郄會(huì)卿 董煥娥 劉翠清 王春秀

厄貝沙坦干預(yù)對(duì)DN大鼠炎性細(xì)胞因子的影響

郄會(huì)卿 董煥娥 劉翠清 王春秀

目的觀察厄貝沙坦干預(yù)對(duì)炎性細(xì)胞因子白介素-6(IL-6)、IL-8、IL-10和C-反應(yīng)蛋白(CRP)水平的影響，并從炎癥方面探討其可能的藥物作用機(jī)制。方法 將36只Wistar大鼠隨機(jī)分為右腎切除對(duì)照組(C組)、糖尿病腎病組(DN組)、厄貝沙坦治療組(Irb組)3組，每組12只。第8、12周末收集大鼠血液標(biāo)本，ELASA方法測(cè)定血液IL-6、IL-8、IL-10和CRP含量。結(jié)果 Irb組和DN組8周、12周的CRP、IL-6、IL-8均高于C組;而DN組8周、12周的CRP、IL-6、IL-8又高于Irb組(P ＜0.01)。Irb組和DN組8周、12周的IL-10均低于C組，而DN組8周、12周的IL-10又低于Irb組(P＜0.01);C組12周與8周的上述各指標(biāo)無明顯變化。結(jié)論 厄貝沙坦不同程度地抑制DN大鼠IL-6、IL8和CRP的產(chǎn)生，刺激IL-10的分泌，從而部分逆轉(zhuǎn)炎性細(xì)胞因子和抗炎細(xì)胞因子的失衡，降低蛋白尿、抑制腎小球的硬化，而延緩糖尿病腎病的進(jìn)展。

白介素-6;白介素-8;白介素-10;C-反應(yīng)蛋白;糖尿病腎病;厄貝沙坦

糖尿病腎病(DN)是糖尿病常見而嚴(yán)重的慢性微血管病變的并發(fā)癥，是引起終末期腎病最常見的病因之一。厄貝沙坦作為血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑，對(duì)DN有明確的治療效果，可減輕腎臟肥大程度和減少蛋白尿，改善腎功能，但其確切機(jī)制尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察厄貝沙坦干預(yù)DN大鼠前后炎性細(xì)胞因子白介素-6(IL-6)、IL-8、C-反應(yīng)蛋白(CRP)和抗炎細(xì)胞因子IL-10的變化，探討厄貝沙坦對(duì)DN細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)作用，探討其可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物模型及分組 健康Wistar大鼠36只，雄性，體重100～120 g，由河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。將大鼠用戊巴比妥鈉(40 mg/kg)腹腔麻醉后行右腎切除術(shù)。2周后將大鼠隨機(jī)分為3組，每組12只。即右腎切除對(duì)照組(C組)、糖尿病腎病組(DN組)、厄貝沙坦治療組(Irb組)。C組只注射等量的枸櫞酸緩沖液。DN組和Irb組采用一次性腹腔注射鏈脲霉素(STZ)(65 mg/kg，溶于pH值4.5枸櫞酸緩沖液中)誘導(dǎo)DN，于給藥

后48 h測(cè)血糖，凡全血血糖≥16.7 mmol/L，尿糖+++～++++者確定為DN模型，實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物自由進(jìn)食飲水，不使用胰島素及其他降糖藥物。DN模型建成后，每周測(cè)血糖1次，不符合標(biāo)準(zhǔn)者棄去。Irb組給予厄貝沙坦50 mg·kg-1·d-1灌胃，1次/d，連續(xù)給藥12周。C組和DN組只用等量0.9%氯化鈉溶液灌胃。分別于厄貝沙坦干預(yù)第8、12周末每組取6只大鼠股動(dòng)脈取血，分離血清，測(cè)IL-6、IL-8、IL-10和CRP。

1.2 試劑與方法 IL-6、IL-8、IL-10、厄貝沙坦購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，CRP購(gòu)自利德曼生物工程股份有限公司。芬蘭產(chǎn)Multisken Ascent型全自動(dòng)酶標(biāo)儀，日本產(chǎn)日立7170-A自動(dòng)生化分析儀。CRP采用免疫比濁法，IL-6、IL-8、IL-10采用 ELASA酶免法。

2 結(jié)果

Irb組和DN組8周、12周的CRP、IL-6、IL-8均高于C組，除Irb組8周IL-8與C組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，其他各指標(biāo)與C組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);而DN組8周、12周的CRP、IL-6、IL-8又高于Irb組(P ＜0.01)。Irb組12周CRP與8周比較降低(P＜0.05);DN組12周CRP與8周比較降低但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。Irb組12周IL-6與8周比較降低(P＜0.01);DN組12周IL-6與8周比較上升(P＜0.05)。Irb組和DN組12周IL-8高于8周(P ＜0.01);Irb組和DN組8周、12周的IL-10均低于C組，而DN組8周、12周的IL-10又低于Irb組(P＜0.01);Irb組12周的IL-10高于8周(P＜0.01);但DN組12周的IL-10低于8周(P＜0.01);C組12周與8周的上述各指標(biāo)無明顯變化。見表1。

表1 3組大鼠CRP、IL-6、IL-8、IL-10水平變化n=12，±s

表1 3組大鼠CRP、IL-6、IL-8、IL-10水平變化n=12，±s

注:與C組比較，*P ＜0.05;與DN組比較，#P ＜0.01;與8周比較，△P ＜0.05，☆P ＜0.01

組別 CRP(mg/L)IL-6(ng/L)IL-8(ng/L)IL-10(ng/L)8周 12周8周 12周8周 12周8周 12周5.4±1.6 39.8±1.6 40.5±2.2 DN組 23.6±6.9* 21.5±3.6* 81.5±2.4* 84.0±3.5＊△ 26.5±2.3* 59.3±1.3＊☆ 21.3±2.5* 18.0±3.6＊☆I(lǐng)rb組 14.3±6.0*# 11.6±3.6*#△ 68.8±4.1*# 47.9±5.2*#☆ 16.1±2.1# 21.5±2.6*#☆ 25.6±3.5*# 33.2±3.0*#☆C組 6.4±2.3 6.0±3.2 18.7±3.6 19.6±1.2 13.9±1.9 1

3 討論

目前，炎性反應(yīng)在DN發(fā)病中的作用越來越受到人們的關(guān)注。許多實(shí)驗(yàn)和臨床資料均提示糖尿病常存在炎細(xì)胞浸潤(rùn)和細(xì)胞因子、炎性介質(zhì)水平上升，無論1型還是2型DN，早期腎組織中均有單核/巨噬細(xì)胞(ED-1)的浸潤(rùn)。糖尿病時(shí)腎組織局部腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)活性上升，血管緊張素Ⅱ不僅可以通過影響血流動(dòng)力學(xué)致DN，還可通過刺激單核細(xì)胞釋放炎性趨化因子(MCP-1)、細(xì)胞因子、黏附分子引起慢性炎癥影響DN進(jìn)展。隨著對(duì)腎素血管緊張素系統(tǒng)作用的不斷認(rèn)識(shí)，人們發(fā)現(xiàn)血管緊張素Ⅱ在微炎性反應(yīng)中可能起著十分重要的作用［1］。ARB類藥物通過阻斷腎素-血管緊張素系統(tǒng)而發(fā)揮腎臟保護(hù)作用。厄貝沙坦是繼氯沙坦、纈沙坦后的又一新型血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑，可阻斷RAS，存在降壓以外的減少尿蛋白，保護(hù)腎臟的作用。本試驗(yàn)研究在STZ誘導(dǎo)下建立DN大鼠模型，通過檢測(cè)實(shí)驗(yàn)性DN大鼠不同階段炎性細(xì)胞因子IL-6、IL-8、IL-10、CRP的變化，從炎癥/抗炎細(xì)胞因子方面探討厄貝沙坦治療DN可能的作用機(jī)制。

以往研究表明DN的發(fā)生發(fā)展與炎性細(xì)胞因子和抗炎細(xì)胞因子的失衡有關(guān)，炎性細(xì)胞因子分泌活躍，而抗炎細(xì)胞因子分泌相對(duì)減弱［2］?？寡准?xì)胞因子產(chǎn)生的量不足以對(duì)抗促炎因子的作用，最終導(dǎo)致DN的發(fā)生。DN患者體內(nèi)存在炎性反應(yīng)，而炎性反應(yīng)也是DN持續(xù)進(jìn)展的因素［3］。本研究結(jié)果顯示DN組12周IL-6、IL-8的分泌水平明顯高于8周，經(jīng)過厄貝沙坦干預(yù)后，厄貝沙坦干預(yù)組大鼠血清炎癥細(xì)胞因子IL-6、IL-8和CRP含量與DN組相比明顯降低，隨著厄貝沙坦干預(yù)時(shí)間的延長(zhǎng)12周IL-6、IL-8和CRP的分泌水平明顯低于8周，呈減少趨勢(shì)，而抗炎細(xì)胞因子IL-10分泌水平反而增加，說明厄貝沙坦作為血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑，有可能通過與AT1受體結(jié)合，阻斷血管緊張素Ⅱ的致炎作用，致使部分炎性細(xì)胞因子IL-6、IL-8和CRP產(chǎn)生和釋放減少，而刺激抗炎細(xì)胞因子IL-10的表達(dá)增加，部分逆轉(zhuǎn)炎癥細(xì)胞因子和抗炎細(xì)胞因子的失衡，在一定程度上抑制機(jī)體炎性反應(yīng)。ARB類藥物從受體水平阻滯了血管緊張素Ⅱ的作用，理論上能更有效、更特異地阻斷RAS系統(tǒng)，起到抗炎作用。ARB類藥物可阻滯C-C趨化因子2b型受體，干擾其在炎癥部位對(duì)單核細(xì)胞的趨化作用，從而直接調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫系統(tǒng)，阻斷RAS系統(tǒng)起到抗炎作用［4］，使單核細(xì)胞活化和轉(zhuǎn)化受到抑制，腎組織單核細(xì)胞浸潤(rùn)減少，內(nèi)皮細(xì)胞功能得到改善，MC增殖減緩，細(xì)胞外基質(zhì)成分在腎臟局部的積聚減輕，對(duì)腎臟病變起到保護(hù)作用。

總之，厄貝沙坦能延緩糖尿病大鼠腎臟功能損害的進(jìn)展，其機(jī)制可能與厄貝沙坦不同程度地抑制DN大鼠IL-6、IL-8和CRP的產(chǎn)生，刺激IL-10的分泌有關(guān)，通過阻斷血管緊張素Ⅱ的致炎作用，部分逆轉(zhuǎn)炎癥細(xì)胞因子和抗炎細(xì)胞因子的失衡，降低蛋白尿、抑制腎小球硬化，而延緩DN的進(jìn)展。本研究從炎癥/抗炎細(xì)胞因子方面探討厄貝沙坦治療DN可能的作用機(jī)制，為深入研究DN發(fā)病機(jī)制及其治療提供新的思路。

1 李敏俠.血管緊張素Ⅱ和微炎癥反應(yīng).國(guó)際泌尿系統(tǒng)雜志，2006，26:139-143.

2 郄會(huì)卿，董煥娥，吳亞，等.糖尿病腎病大鼠炎癥細(xì)胞因子的變化.河北醫(yī)藥，2010，32:2729-2730.

3 楊世峰.C反應(yīng)蛋白與糖尿病腎病的研究進(jìn)展.醫(yī)學(xué)綜述，2008，14:432-434.

4 Marshall TG，Lee RE，Marshall FE.Common angiotension receptor blockers may directly modulate the immune system via VDR，PPAR and CCR2b.Theor Biol Med Model，2006，3

:1-33.

Influence of irbesartan intervention on inflammatory cytokines in rats with diabetic nephropathy

QIE Huiqing* ，DONG Huan’e，LIU Cuiqing*，et al．*Traditional Chinese Medical Hospital of Hebei Province，Shijiazhuang 050011，China

ObjectiveTo observe the effect of irbesartan intervention on the levels of inflammatory cytokines including interleukin-6(IL-6)，interleukin-8(IL-8)，interleukin-10(IL-10)and C-reactive protein(CRP)in rats with diabetic nephropathy(DN)，and to investigate the possible drug action mechanism.Methods

36 Wistar rats were randomly divided into three groups:control group(right nephrectomized)，diabetic nephropathy group(DN group)and irbesartan treatment group，and there were 12 rats in each group.At the end of the 8th and the 12th week，the serums of the rats were collected.The levels of IL-6，IL-8，IL-10 and C-reactive protein in serum were detected by ELASA.ResultsAt the end of the 8th and the 12th week，the levels of IL-6，IL-8 and CRP in irbesartan treatment group and DN group were significantly higher than those in control group，and the levels of IL-6，IL-8 and CRP in DN group were significantly higher than those in irbesartan treatment group(P＜0.01).At the end of the 8th and the 12th week，the levels of IL-10 in irbesartan treatment group and DN group were significantly lower than those in control group，and the levels of IL-10 in diabetic nephropathy group were significantly lower than those in irbesartan treatment group(P＜0.01).ConclusionIrbesartan can inhibit the production of IL-6，IL-8 and CRP and can stimulate the secretion of IL-10，as a result，which can improve partly the unbalance of inflammatory cytokines and anti-inflammatory cytokines，decrease and inhibit glomerular sclerosis，thereby，which can delay the advancement of diabetic nephropathy.

interleukin-6;interleukin-8;interleukin-10;C-reactive protein

R 587.24

A

1002-7386(2011)09-1305-02

10．3969/j．issn．1002-7386．2011．09．008

項(xiàng)目來源:河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點(diǎn)課題(編號(hào):20090304)

050011 石家莊市，河北省中醫(yī)院(郄會(huì)卿、劉翠清、王春秀);河北省石家莊市中心醫(yī)院(董煥娥)

2011-01-14)

·論著·