安 彥

(天津市藥品檢驗(yàn)所，天津300070)

眼睛是人體的重要感覺(jué)器官,人類(lèi)在與外界交流過(guò)程中有80%的信息是通過(guò)眼睛獲得的，所以眼用制劑作為直接用于眼部發(fā)揮治療作用的劑型，其安全性一直為人們所關(guān)注。眼用制劑系指直接用于眼部發(fā)揮治療作用的無(wú)菌制劑，可分為眼用液體制劑(滴眼劑、洗眼劑、眼內(nèi)注射劑)、眼用半固體制劑(眼膏劑、眼用乳膏劑、眼用凝膠劑)、眼用固體制劑(眼膜劑、眼丸劑、眼內(nèi)插入劑)等。目前，國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上的眼用制劑大多數(shù)為多劑量包裝，為了防止眼用制劑在使用和保存過(guò)程中被淚液及環(huán)境中的微生物汚染，多數(shù)眼用制劑(包括抗生素類(lèi))中都添加有抑菌劑(又稱(chēng)防腐劑)。抑菌劑是指能抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的物質(zhì)，其本身可能無(wú)法殺死細(xì)菌，而是通過(guò)干擾微生物有機(jī)體的生長(zhǎng)、繁殖和新陳代謝來(lái)發(fā)揮抑菌作用，但同時(shí)抑菌劑也對(duì)眼組織細(xì)胞產(chǎn)生作用，這也是抑菌劑存在眼部細(xì)胞毒性的原因。近年來(lái)隨著眼用制劑中抑菌劑對(duì)眼表?yè)p害報(bào)道的增多，抑菌劑的合理應(yīng)用和質(zhì)量控制日益受到醫(yī)藥研究工作者的重視。

1 眼用制劑中抑菌劑的應(yīng)用

1.1抑菌劑的種類(lèi)及作用機(jī)理 由于眼睛是人體最嬌嫩的器官之一，用于眼用制劑中的抑菌劑要求對(duì)眼表的刺激性較小，因此適用的抑菌劑品種不多，根據(jù)其化學(xué)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)可分為以下幾類(lèi)：①有機(jī)汞類(lèi)，如硫柳汞、硝酸汞；②季銨鹽類(lèi)，如苯扎氯銨、苯扎溴銨等；③醇類(lèi)，如三氯叔丁醇；④酯類(lèi)，常用的為羥苯酯類(lèi)，如羥苯甲酯、羥苯乙酯等；⑤酸類(lèi)，如山梨酸。

抑菌劑的作用機(jī)制包括：使病原微生物蛋白質(zhì)變性、沉淀和凝固；與病原微生物的酶系統(tǒng)結(jié)合并干擾其代謝過(guò)程；降低表面張力，增加菌體胞漿膜的通透性，導(dǎo)致菌體成分外溢等[1]。羥苯乙酯主要作用于細(xì)胞膜及競(jìng)爭(zhēng)輔酶；三氯叔丁醇具有抑制細(xì)菌和霉菌的作用；硫柳汞能抑制細(xì)菌的巰基酶系統(tǒng)，使細(xì)菌蛋白凝固，均有強(qiáng)烈的殺菌作用；苯扎系列抑菌劑是使菌體蛋白或蛋白類(lèi)物質(zhì)凝固，阻止細(xì)胞的代謝[2]。

1.2常用抑菌劑的眼表毒性 抑菌劑對(duì)角膜、結(jié)膜的細(xì)胞和組織造成損害的主要機(jī)制有：①破壞淚膜穩(wěn)定性或直接損害對(duì)淚膜穩(wěn)定性起重要作用的上皮細(xì)胞微絨毛；②破壞上皮細(xì)胞之間的緊密連接；③抑制細(xì)胞的有絲分裂；④促使結(jié)膜下的淋巴細(xì)胞向漿細(xì)胞轉(zhuǎn)化和聚集；⑤免疫機(jī)制引起的炎癥和過(guò)敏反應(yīng)[3]。

臨床研究、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)以及體外細(xì)胞培養(yǎng)等基礎(chǔ)研究結(jié)果表明，常用抑菌劑對(duì)眼表會(huì)產(chǎn)生一定的毒副作用。有人在對(duì)藥源性角膜上皮病變病例研究時(shí)發(fā)現(xiàn),其中的防腐劑特別是苯扎氯銨可破壞角膜上皮細(xì)胞的緊密連接,使角膜上皮細(xì)胞容易脫落[4]。在臨床研究中，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)防腐劑對(duì)準(zhǔn)分子激光原位角膜磨鑲術(shù)后角膜上皮恢復(fù)存在影響，如患者在術(shù)后使用了含0.01%的氯芐烷胺的滴眼液則發(fā)生角膜病變的幾率明顯高于使用不含防腐劑的滴眼液的患者[5]。國(guó)內(nèi)還有學(xué)者在體外動(dòng)物試驗(yàn)中，研究了羥苯乙酯、山梨酸和苯扎溴銨3種常用防腐劑對(duì)體外培養(yǎng)的兔角膜和結(jié)膜上皮細(xì)胞的損傷，結(jié)果表明3種防腐劑對(duì)于上皮細(xì)胞存在不同程度的毒性作用，其中苯扎溴銨毒性最大，羥苯乙酯作用最小[6]。另外，在體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)苯扎氯銨對(duì)體外培養(yǎng)的人角膜上皮細(xì)胞具有明確的抑制細(xì)胞增生作用，而且，這種毒性作用具有時(shí)間和劑量依賴(lài)性，高濃度的苯扎氯銨可導(dǎo)致細(xì)胞迅速死亡，同時(shí)提示長(zhǎng)期使用含有苯扎氯銨滴眼液患者(尤其是干眼癥患者)選擇滴眼液時(shí)應(yīng)充分考慮防腐劑對(duì)角膜上皮細(xì)胞的毒性作用，盡可能選擇含有低濃度防腐劑或不含有防腐劑的藥物，以減少或避免其對(duì)眼表的細(xì)胞毒性作用[7]。

1.3眼用制劑中抑菌劑的選擇 抑菌劑的正確選擇和合理使用是保證眼用制劑質(zhì)量，減少污染，降低毒性反應(yīng)的前提。根據(jù)各國(guó)藥典對(duì)于眼用制劑的要求，在其使用過(guò)程中需要無(wú)菌度的保持，理想的抑菌劑應(yīng)該滿(mǎn)足以下要求：①有效性：抑菌劑應(yīng)具有廣譜抗菌能力，對(duì)細(xì)菌(特別是綠膿菌)以及真菌的繁殖有抑制力或殺傷力，作用迅速。②安全性：包括無(wú)過(guò)敏性、無(wú)毒性和無(wú)刺激性，在臨床規(guī)定的使用頻次和濃度內(nèi)，不會(huì)對(duì)眼組織(特別是眼角膜)造成刺激及傷害。③穩(wěn)定性：抑菌劑和主藥以及其他輔料等成分混合后不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)，對(duì)pH、滲透壓不會(huì)造成影響；抑菌劑自身應(yīng)比較穩(wěn)定和耐熱，可長(zhǎng)期保存[8]。

但是在實(shí)際生產(chǎn)和使用過(guò)程中難以找到一種“完美的抑菌劑”。因此，在抑菌劑的選擇問(wèn)題上應(yīng)采取科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度，結(jié)合滴眼劑的儲(chǔ)藏及使用特點(diǎn)，統(tǒng)籌考慮抑菌作用、毒性作用、配伍關(guān)系、穩(wěn)定性以及環(huán)境影響等多方面因素，盡可能做到以上條件“完美”，必要時(shí)要考慮抑菌劑的聯(lián)合應(yīng)用。

2 眼用制劑中抑菌劑的含量測(cè)定及抑菌效力研究

2.1抑菌劑的含量測(cè)定 對(duì)于一種抑菌劑來(lái)說(shuō)，由于同時(shí)兼具抑菌作用和毒性作用兩個(gè)方面，其在制劑中的處方量顯得尤為關(guān)鍵，因此在常規(guī)檢驗(yàn)中應(yīng)關(guān)注眼用制劑中抑菌劑的含量測(cè)定。在《中國(guó)藥典》2010年版二部中有多個(gè)抗生素品種的眼用制劑增加了抑菌劑的含量測(cè)定，包括：羥苯甲酯、羥苯乙酯、羥苯丙酯、苯扎溴銨、苯扎氯銨以及硫柳汞[9]。目前，我國(guó)眼用制劑中最常使用的抑菌劑是羥苯類(lèi)，由于這類(lèi)抑菌劑均具有較強(qiáng)的紫外吸收，日常檢驗(yàn)中多采用高效液相色譜法測(cè)定，其文獻(xiàn)報(bào)道也最為常見(jiàn)[10，11]。新版《中國(guó)藥典》收載了鹽酸環(huán)丙沙星滴眼液中苯扎溴銨HPLC的含量測(cè)定方法，之前有文獻(xiàn)報(bào)道經(jīng)中空纖維分離后采用HPLC法測(cè)定羥丙甲纖維素滴眼液中苯扎溴銨的含量[12]。2010年版《中國(guó)藥典》收載的諾氟沙星滴眼液中硫柳汞的測(cè)定則借鑒了三部附錄中疫苗中硫柳汞的測(cè)定方法，采用雙硫腙滴定法，但其實(shí)驗(yàn)過(guò)程煩瑣，對(duì)環(huán)境污染亦較大。另外有學(xué)者報(bào)道了采用HPLC法測(cè)定氯霉素滴眼液中羥苯乙酯和硫柳汞的含量，其方法較為簡(jiǎn)單[13]。

2.2眼用制劑中抑菌效力的研究 抑菌劑效力檢查法系用于測(cè)定滅菌、非滅菌制劑中抑菌劑的活性，以評(píng)價(jià)最終產(chǎn)品的抑菌效力，同時(shí)也可用于指導(dǎo)生產(chǎn)企業(yè)在研發(fā)階段制劑中抑菌劑濃度的確定。在《英國(guó)藥典》和《美國(guó)藥典》中早已收載了抑菌劑效力檢查法，我國(guó)2010年版《中國(guó)藥典》首次收錄了抑菌劑效力檢查法指導(dǎo)原則，試驗(yàn)菌種包括：銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌和黑曲霉，在這一指導(dǎo)原則中將眼用制劑列為1類(lèi)產(chǎn)品。之前有學(xué)者已參考英、美藥典方法開(kāi)展了抑菌效力的研究[14-16]，通過(guò)抑菌效力的測(cè)定，考查抑菌劑對(duì)于不同菌種的抑菌效力，有效控制產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量。

3 關(guān)于眼用制劑抑菌劑使用的幾點(diǎn)思考

目前，隨著學(xué)者對(duì)于抑菌劑毒性關(guān)注度的提高，有很多不添加抑菌劑的眼用制劑面世，其中大多數(shù)為單劑量包裝，還有研究人員開(kāi)發(fā)出不含抑菌劑多劑量包裝眼用制劑，特別是一些本身有抑菌作用的光譜抗生素眼用制劑。例如：有學(xué)者研制了磺胺醋酰鈉滴眼液和氧氟沙星滴眼液，經(jīng)采用2005版《中國(guó)藥典》微生物限度檢查法檢驗(yàn)，在6個(gè)月內(nèi)符合規(guī)定[17]。不過(guò)，從目前我國(guó)眼用制劑開(kāi)發(fā)現(xiàn)狀發(fā)現(xiàn)，多數(shù)藥物研發(fā)工作者多通過(guò)改變產(chǎn)品的包裝來(lái)降低制劑中不添加抑菌劑所帶來(lái)的風(fēng)險(xiǎn)。然而，對(duì)于大多數(shù)多劑量包裝的眼用制劑如果藥品本身不具有充分的抗菌活性，添加抑菌劑是無(wú)法避免的，適宜的抑菌劑是防止藥品在正常儲(chǔ)存和使用過(guò)程中微生物污染的重要方法，但并不是唯一的方法?？紤]到所有抑菌劑都具有一定的毒性，首先在抑菌劑的使用問(wèn)題上必須采取科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度，結(jié)合眼用制劑本身性質(zhì)、用藥途徑等因素，統(tǒng)籌考慮抑菌劑的抑菌效力及毒性作用，合理選擇。同時(shí)研發(fā)工作者也在積極開(kāi)發(fā)可降低抑菌劑毒性的眼用制劑，如有研究表明玻璃酸鈉可通過(guò)保護(hù)上皮細(xì)胞，從而有效降低抑菌劑所導(dǎo)致的不良反應(yīng)[6，18]。

綜上所述，眼用制劑中抑菌劑的正確選擇和合理使用是保證藥品質(zhì)量，降低毒性的重要前提，必須引起足夠的重視。此外，應(yīng)盡快研制出新型高效低毒的抑菌劑，降低因抑菌劑給眼用制劑而帶來(lái)的安全性隱患。

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