三聚氰胺是一種在合成樹脂和塑料中常見的化學試劑,不用于食品,2008年在中國被發(fā)現(xiàn)作為奶粉添加劑來提高蛋白質表觀測量值水平。三聚氰胺易導致嬰兒腎臟功能障礙。但是目前有關其對中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的毒性研究尚少見報道。因此研究三聚氰胺對CNS的可能毒性很有必要。
本研究目的是評估三聚氰胺對已分化PC12細胞(常用的神經(jīng)細胞株)的影響。以不同三聚氰胺濃度(0、33、330、990、1 980和3 300 mg/L)分別處理細胞12、24和36 h后用MTT法檢測細胞的活性,熒光顯微鏡定性觀察Hoechst 33258熒光染色后細胞核的形態(tài),流式細胞儀檢測Annexin V/PI染色后細胞的凋亡和壞死率,最后用分光光度法檢測細胞內(nèi)T-SOD水平。
MTT的結果表明三聚氰胺抑制PC12細胞的存活能力,且隨三氯氰胺濃度增大和培養(yǎng)時間延長,PC12細胞的存活率逐漸下降。Hoechst 33258染色顯示,用三聚氰胺培養(yǎng)的細胞染色質固縮,聚集于核膜,并且產(chǎn)生更多易染色顆粒,呈典型凋亡形態(tài)。流式細胞儀測試結果顯示,三聚氰胺引起早期細胞凋亡主要濃度范圍是33~3 300 mg/L,并呈濃度依賴性,在3 300 mg/L以下幾乎不會引起分化的PC12細胞壞死。SOD結果顯示T-SOD隨濃度增加而減少,SOD作為重要的抗氧化物質,其減少使氧化應激反應增加。
因此,三聚氰胺通過引起細胞凋亡來抑制分化的PC12細胞的增殖,并且氧化應激參與了這一過程。這項研究有助于估測三聚氰胺對神經(jīng)細胞的毒性,為研究三聚氰胺及其衍生物制品的潛在毒性提供了依據(jù)。
(馬燕燕摘 楊卓審校 譯自Cell Mol Neurobiol,2011,31:65-71)