董志敏，李海霞，田秀娟

（大同市第二人民醫(yī)院病理科，山西大同037005）

乳腺癌是常見的惡性腫瘤,占女性全部惡性腫瘤的22%[1],成為威脅婦女健康的高發(fā)癌癥。本研究通過免疫組化方法對108例原發(fā)乳腺癌標(biāo)本進(jìn)行P53，nm23蛋白測定,以探討其臨床病理意義。

1 材料與方法

1.1 病理材料

收集大同市第二人民醫(yī)院2005-2008期間原發(fā)性乳腺癌手術(shù)切除標(biāo)本108例,按照美國癌癥聯(lián)合委員會(AJCC)TNM分期[1]均為Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期乳腺癌。年齡32～65歲,平均52.4歲。所有患者術(shù)前均未接受化療和放療。

1.2 方法

所有標(biāo)本均經(jīng)10%福爾馬林固定連續(xù)切片4 μm,分別做HE染色和免疫組化染色。采用SP二步法進(jìn)行P53，nm23標(biāo)記(試劑購自北京中杉公司)。切片脫蠟、水化,3%H2O2去離子水室溫浸10 min,以滅活內(nèi)源性酶,0.01 MPBS洗2 min×3次,高壓鍋熱修復(fù)抗原,將切片浸入pH 6.0的枸櫞酸緩沖液中，高壓鍋加熱至100～120℃持續(xù)2 min,冷卻后,0.01 MPBS洗2 min×3次,滴加抗原修復(fù)液,室溫放置10 min。蒸餾水洗3次滴加正常工作血清封閉液,室溫放置10 min,甩去多余液體,不洗。滴加適當(dāng)稀釋的一抗，20～30℃1～2 h，0.01 MPBS洗2 min×3次。滴加生物素化山羊抗小鼠IgG20,37℃,20 min。0.01 M PBS洗2 min×3次。滴加試劑SABC 20～37℃,20 min 0.01 M PBS洗5 min×4次，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，樹膠封片。

1.3 結(jié)果判定

以已知強(qiáng)陽性大腸癌作陽性對照,以多形性腺瘤作陰性對照。(+)為每張切片陽性細(xì)胞30%以下,黃色顆粒;(++)為陽性細(xì)胞31%～70%,棕色顆粒;(+++)為陽性細(xì)胞70%以上,深棕色顆粒。P53核著色,nm23核、漿、膜著色。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

檢測結(jié)果按照年齡、腫物大小、病理學(xué)分型、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等分組統(tǒng)計(jì)分析,組間顯著性差異采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

見表1。

2.1 P53蛋白陽性表達(dá)的相關(guān)因素

蛋白陽性表達(dá)與患者年齡、腫物大小和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P＞0.05)。在病理學(xué)分型中浸潤性癌、早期浸潤性癌和非浸潤性癌中P53陽性率分別為90.3%，61.9%和25.7%,三者比較有顯著性差異(P＜0.01)。在癌分化程度上,低分化組P53蛋白檢出率明顯高于高、中分化組(P＜0.01)。

2.2 nm23蛋白表達(dá)的相關(guān)因素

與患者年齡、癌腫病理分型及分化程度無關(guān),但與癌腫大小和轉(zhuǎn)移有密切關(guān)聯(lián)。在2 cm以下組nm23蛋白檢出率明顯高于2～5 cm組和5 cm以上組(P＜0.01);無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組nm23蛋白檢出率高達(dá)59.5%,明顯高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P＜0.01)。

表1 108例乳腺癌P53和nm23蛋白與臨床病理關(guān)系

3 討論

3.1 乳腺癌P53蛋白表達(dá)與臨床及病理關(guān)系

P53蛋白是重要的腫瘤抑制基因,分野生型(WtP53)和突變型(MtP53)。WtP53在正常組織內(nèi)含量低,半衰期短,僅30～60 min,而免疫組化的敏感性無法檢測如此微量的抗原成分。當(dāng)P53突變后,能和進(jìn)入組織內(nèi)的各種病毒蛋白、WtP53蛋白、正常等位基因蛋白和熱休克蛋白等結(jié)合形成穩(wěn)定的復(fù)合物,在組織內(nèi)的半衰期長,含量逐漸積累,為免疫組化的檢測提供了條件。MtP53蛋白是目前腫瘤界研究最多的抑癌基因之一,國內(nèi)外均有許多報(bào)道,它不僅失去了正常的抑癌作用,而且具有促進(jìn)正常細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的作用,促進(jìn)腫瘤的發(fā)生[2]。當(dāng)P53突變后則喪失了啟動(dòng)細(xì)胞凋亡的能力,結(jié)果使腫瘤細(xì)胞數(shù)目增加,從而使細(xì)胞呈現(xiàn)無休止生長而凋亡受到抑制。本研究顯示,在乳腺癌增生過程中有MtP53基因表達(dá),P53表達(dá)水平與細(xì)胞的浸潤生長及腫瘤細(xì)胞的分化程度有關(guān),浸潤范圍越廣,分化越低的乳腺腫瘤,P53基因水平越高。提示P53基因蛋白陽性乳腺癌患者預(yù)后不良,生存期短。

3.2 nm23蛋白表達(dá)與臨床及病理關(guān)系

nm23是美國國立癌癥研究所 Steeg等[3]在K-1735鼠黑色素細(xì)胞株中分離鑒定出來的一種與惡性腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因。此后,文獻(xiàn)相繼報(bào)道在動(dòng)物和人的某些實(shí)體癌中有nm23基因表達(dá),并指出其表達(dá)水平與腫瘤轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān),所以nm23又稱為抗轉(zhuǎn)移癌基因。其基因片段與NDP-Kinase是相同的[4],通過影響微管聚合而調(diào)節(jié)細(xì)胞運(yùn)動(dòng),并通過影響G蛋白的信號傳遞而發(fā)揮負(fù)向調(diào)節(jié)作用,從而抑制腫瘤轉(zhuǎn)移。也就是說,nm23蛋白高表達(dá)與預(yù)后好有關(guān),而低表達(dá)往往預(yù)后差,本研究結(jié)果與上述觀點(diǎn)一致。另外本研究在＜2 cm組nm23蛋白檢出率明顯高于2～5 cm組和＞5 cm組 (P＜0.01),提示nm23蛋白具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用。

3.3 P53和nm23的臨床病理意義

根據(jù)nm23-H1檢測結(jié)果篩選具有轉(zhuǎn)移危險(xiǎn)的患者,早期實(shí)施化、放療;根據(jù)P53檢測結(jié)果,早期預(yù)測乳腺癌患者腫瘤細(xì)胞分化程度。綜合二者檢測結(jié)果為判斷乳腺癌預(yù)后具有積極的臨床價(jià)值。

[1]陳虹.乳腺及女性生殖器官腫瘤病理學(xué)和遺傳學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2006.

[2]劉壯,韓蘊(yùn)麗,韋紅英,等.鼠雙微體2、p16、mtp53蛋白表達(dá)與兒童非霍奇金淋巴瘤的關(guān)系[J].新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2006,21(15):1004-1005.

[3]吳又名,儲兵.nm23、p53、PCNA的表達(dá)與鼻咽癌轉(zhuǎn)移預(yù)后關(guān)系的研究[J].診斷病理學(xué)雜志,2000,7(3):204.

[4]吳秉銓,劉彥仿.免疫組織化學(xué)病理診斷[M].北京:科學(xué)技術(shù)出版社,2007.