王金榮

飼料質(zhì)量安全檢測(cè)是采用一定的分析技術(shù)，對(duì)飼料產(chǎn)品質(zhì)量及安全指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。其結(jié)果不僅是制定政策和標(biāo)準(zhǔn)的科學(xué)基礎(chǔ)，同時(shí)也是解決貿(mào)易糾紛和行政監(jiān)督的重要依據(jù)。發(fā)達(dá)國(guó)家在重視飼料法規(guī)的制定和實(shí)施，并且建立完整的飼料質(zhì)量監(jiān)督管理體系，對(duì)飼料產(chǎn)品的研制、生產(chǎn)、銷售和使用等環(huán)節(jié)實(shí)行有效監(jiān)督的同時(shí)，也十分重視飼料質(zhì)量安全檢測(cè)技術(shù)研究，對(duì)飼料質(zhì)量安全等方面的問(wèn)題進(jìn)行有針對(duì)性的研究，及時(shí)制定相應(yīng)的分析策略，為飼料安全有效監(jiān)督提供技術(shù)支持。我國(guó)在借鑒國(guó)外先進(jìn)技術(shù)基礎(chǔ)上，飼料產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)逐步提高，尤其是對(duì)飼料安全的檢測(cè)和評(píng)價(jià)技術(shù)取得很大的發(fā)展。

由于飼料種類繁多且非常復(fù)雜，飼料中可能存在的化學(xué)、物理和生物的危害物種類紛雜不清，且含量極低，因此對(duì)飼料質(zhì)量安全檢測(cè)技術(shù)水平要求極高。盡管對(duì)飼料質(zhì)量安全檢測(cè)的分類方法不同，以對(duì)飼料中有害物質(zhì)檢測(cè)的逐級(jí)檢測(cè)法進(jìn)行分類包括篩選法、確證法和定量法。篩選法是用于大量樣品的高通量分析，目的是為了檢測(cè)某種或某類危害物質(zhì)是否存在。該類方法的特點(diǎn)是簡(jiǎn)單、快速，不需要有特殊的場(chǎng)地和大型分析儀器及專門(mén)的技術(shù)人才，用于篩選分析的方法主要是基于生物學(xué)分析方法。確證法是對(duì)篩選法為陽(yáng)性反應(yīng)的樣品做進(jìn)一步檢測(cè)，給出確信無(wú)疑的結(jié)論或結(jié)果，通常以質(zhì)譜分析為主。定量法是對(duì)待測(cè)物質(zhì)進(jìn)行定量的結(jié)果，也是貿(mào)易、仲裁等主要依據(jù)，尤其是對(duì)限量的藥物、添加劑或其他危害物的定量測(cè)定。我國(guó)大部分飼料檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)還是以定量分析為主，主要應(yīng)用的技術(shù)是紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)法、原子吸收法、原子熒光法、液相色譜、氣相色譜方法等等。根據(jù)分析方法不同，可以將飼料質(zhì)量安全檢測(cè)技術(shù)分為化學(xué)檢測(cè)和生物學(xué)檢測(cè)，本文將分別對(duì)化學(xué)檢測(cè)和生物學(xué)檢測(cè)進(jìn)行綜述。

1 化學(xué)檢測(cè)技術(shù)

化學(xué)檢測(cè)技術(shù)主要是應(yīng)用各類分析儀器，采用化學(xué)的方法完成分析檢測(cè)任務(wù)的一種分析方法，也是常用的檢測(cè)技術(shù)。

1.1 光譜分析技術(shù)

飼料分析中的光譜技術(shù)主要是對(duì)飼料中金屬元素及其形態(tài)的檢測(cè)，包括原子吸收光譜、原子熒光光譜和電感耦合等離子體發(fā)射光譜技術(shù)，及通過(guò)對(duì)飼料中有機(jī)組分進(jìn)行檢測(cè)的近紅外光譜技術(shù)。原子吸收光譜分析在飼料中廣泛應(yīng)用，主要是對(duì)飼料中金屬元素總量進(jìn)行檢測(cè)，如飼料中的銅、鋅、鐵、錳、鈷、鎳、鈉、鉀、鈣、鋁、硒等金屬元素的檢測(cè)（于青，1995；寧正祥，1998；王加啟等，2004）。有些已經(jīng)制定為國(guó)家或行業(yè)的標(biāo)準(zhǔn)方法，如動(dòng)物飼料中鐵、銅、錳、鋅、鎂的測(cè)定方法（GB/13885—2003）、飼料中鈷的測(cè)定方法（GB/13884—2003）等已被廣泛采用。原子熒光法的分析對(duì)象與原子吸收和原子發(fā)射光譜法相同，原則上可以進(jìn)行數(shù)十種元素的定量分析。但迄今為止，原子熒光光譜法最成功的應(yīng)用還是易于形成氣態(tài)氫化物的10種元素（As、Sb、Bi、Se、Ge、Pb、Sn、Te、Cd、Zn）和 Hg。孫德輝（2002）采用原子熒光測(cè)定了飼料中的總砷、汞，取得滿意的結(jié)果。王金榮等（2009）采用氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法對(duì)飼料通過(guò)消化罐消化的方式，一次樣品預(yù)處理，同時(shí)檢測(cè)砷、汞、硒和鎘四種元素得到很好的回收率和精密度。丁紅梅等（2004）、付佐龍等（2009）探討了應(yīng)用原子熒光光譜法檢測(cè)飼料中鎘。陳新煥等（2003）對(duì)飼料中的微量汞用原子熒光光譜檢測(cè)均得到理想的分析結(jié)果。隨著我國(guó)原子熒光儀器的技術(shù)水平的提高，飼料中的硒、鎘、汞、砷等元素的檢測(cè)靈敏度及準(zhǔn)確度均得到提高，有些已經(jīng)被制定或已列入國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)制定計(jì)劃中，如飼料中鎘、硒、砷的原子熒光方法檢測(cè)。原子發(fā)射光譜在20世紀(jì)50年代就開(kāi)始在我國(guó)推廣和普及，特別是在地質(zhì)、冶金、機(jī)械等部門(mén)得到了廣泛的應(yīng)用，并建立了國(guó)產(chǎn)的原子發(fā)射光譜儀器生產(chǎn)基地，儀器類型主要以火焰光度計(jì)為主。20世紀(jì)70年代迅速興起的電感耦合等離子體發(fā)射光譜（ICPAES），既保留了原子發(fā)射光譜同時(shí)分析的特點(diǎn)，又具有溶液進(jìn)樣的靈活性與穩(wěn)定性，使原子發(fā)射光譜進(jìn)入一個(gè)新的發(fā)展階段。目前電感耦合等離子體發(fā)射光譜主要用于飼料中金屬元素的分析，因?yàn)閮x器的普及程度不如其他兩種類型的儀器，因此在制定標(biāo)準(zhǔn)時(shí)很少采用。對(duì)飼料中金屬元素的檢測(cè)除應(yīng)用光譜分析技術(shù)外，Mahesar等（2010）應(yīng)用微分脈沖陽(yáng)極溶出伏安法（DPASV）檢測(cè)28中不同商業(yè)家禽飼料中的鋅、鎘、鉛和銅，檢出限分別為 0.69、0.35、0.68 和 0.24 μg/kg。

近紅外技術(shù)檢測(cè)的原理是飼料中的分子物質(zhì)可以吸收不同波長(zhǎng)的光，根據(jù)對(duì)飼料有機(jī)組分中含有的C-H、N-H、O-H等化學(xué)鍵的泛頻振動(dòng)或轉(zhuǎn)動(dòng)，以漫反射方式獲得在近紅外區(qū)的光譜信息，通過(guò)與儀器的數(shù)據(jù)庫(kù)或待測(cè)組分線性及非線性模型進(jìn)行分析。優(yōu)點(diǎn)是檢測(cè)快速，不用有害的試劑，所需的樣品量少，非破壞性的無(wú)損檢測(cè)。近年來(lái)近紅外光譜技術(shù)在飼料原料檢測(cè)中推廣應(yīng)用，可以用來(lái)對(duì)飼料中有機(jī)組分如水分、粗蛋白、脂肪等進(jìn)行快速檢測(cè)。在青貯飼料的品質(zhì)測(cè)定中，應(yīng)用近紅外光譜測(cè)定飼料的pH值、粗蛋白、粗灰分、干物質(zhì)等指標(biāo)，得到很好的結(jié)果，但對(duì)于可溶性碳水化合物含量的粗略估計(jì)，精度有待提高（李宇萌等，2010）。我國(guó)也制定了飼料中水分、粗蛋白、粗纖維、粗脂肪、賴氨酸和蛋氨酸的近紅外快速測(cè)定方法（GB/T18868—2002）。由于該項(xiàng)技術(shù)是間接的檢測(cè)，需要大量的樣品參考值來(lái)建立校正和參考模型。同時(shí)受飼料資源的近紅外光譜數(shù)據(jù)庫(kù)的限制，在某種程度上限制了該技術(shù)在飼料檢測(cè)上的應(yīng)用。尤其是對(duì)于配合飼料和濃縮飼料，由于其成分復(fù)雜，很難用近紅外對(duì)其中的某種成分進(jìn)行準(zhǔn)確檢測(cè)。

此外，高光譜分析技術(shù)在肉骨粉尤其是反芻動(dòng)物源性飼料的檢測(cè)中，開(kāi)始研究應(yīng)用。應(yīng)用高光譜分析對(duì)包含有朊蛋白飼料樣品的檢測(cè)，已經(jīng)建立了分析數(shù)據(jù)系統(tǒng)或模型。Nansen等（2010）建立了包含3.65×106的高光譜分析數(shù)據(jù)系統(tǒng)，其中有1.15×106份數(shù)據(jù)來(lái)自肉骨粉樣品，2.23×106來(lái)自12種其他飼料原料，光譜范圍是419～892 nm，用這種高光譜檢測(cè)動(dòng)物源性飼料可以作為定性分析，用這種方法可以檢測(cè)飼料中添加1%（重量百分比）的肉骨粉，方法簡(jiǎn)單靈活，易于控制飼料的質(zhì)量。

1.2 色譜分析技術(shù)

色譜分析的基本原理是讓混合物通過(guò)互不混溶的兩相，由于各組分的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)不同，因此可以在兩相中進(jìn)行分離。飼料檢測(cè)中應(yīng)用的色譜儀器主要有氣相色譜儀和液相色譜儀。

我國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的飼料中農(nóng)藥殘留如有機(jī)磷（GB/T18969—2003）、除蟲(chóng)菊酯類（GB/T19372—2003）、氨基甲酸酯類（GB/T19373—2003）等大多數(shù)農(nóng)藥殘留的檢測(cè)均采用氣相色譜分析方法。隨著飼料中油脂的添加，對(duì)油脂質(zhì)量及種類的檢測(cè)逐漸成為關(guān)注的重點(diǎn)，因此開(kāi)始應(yīng)用氣相色譜對(duì)飼料中脂肪酸種類及含量進(jìn)行檢測(cè)，以確定飼料中油脂的組成。此外飼料香味劑的檢測(cè)主要包括對(duì)其香氣、理化指標(biāo)、穩(wěn)定性和有效性等進(jìn)行檢測(cè)，由于香味劑是非常復(fù)雜的化合物，在國(guó)外多采用氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行定性定量分析。我國(guó)對(duì)香味劑的堿性主要是對(duì)其中味料部分的一些成分進(jìn)行檢測(cè)，如谷氨酸鈉、肌苷酸、鳥(niǎo)苷酸、糖精鈉、葡萄糖等采用高效液相色譜方法進(jìn)行檢測(cè)；對(duì)于香氣部分如含有丁酸乙酯、乳酸乙酯、香草醛等成分采用氣相色譜進(jìn)行檢測(cè)。飼用防霉劑目前國(guó)內(nèi)外普遍采用氣相色譜或高效液相色譜方法進(jìn)行檢測(cè)，有些方法直接采用食品添加劑檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)方法，例如飼用防霉劑中的脂肪酸類物質(zhì)，包括甲酸、乙酸、丙酸、山梨酸、苯甲酸等采用氣相色譜技術(shù)，用有機(jī)溶劑丙酮/石油醚等提取，經(jīng)過(guò)離心凈化，通過(guò)色譜柱或毛細(xì)管柱的分類，用電子捕獲、氫焰等檢測(cè)器進(jìn)行定量測(cè)定。飼用抗氧化劑是添加到飼料中，能夠阻止飼料或延遲飼料氧化，提高飼料穩(wěn)定性和延長(zhǎng)貯存期的一類物質(zhì)，常用的有乙氧基喹啉、二丁基羥基甲苯（BHT）、丁基羥基茴香醚（BHA）等。對(duì)于抗氧化劑的檢測(cè)技術(shù)多采用高效液相色譜或氣相色譜技術(shù)進(jìn)行分析。如飼料中BHA、BHT的檢測(cè)采用液相色譜技術(shù)，經(jīng)乙烷溶解提取、乙腈萃取濃縮，異丙醇稀釋后注入高效液相色譜儀中進(jìn)行分離檢測(cè)，用紫外檢測(cè)器進(jìn)行定量分析。乙氧基喹啉、BHT也可以采用氣相色譜方法，經(jīng)毛細(xì)管柱分離，用氫焰檢測(cè)器測(cè)定其含量。

液相色譜在飼料檢測(cè)中的應(yīng)用十分廣泛，例如飼料中維生素的反相高效液相色譜分析方法已經(jīng)列為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)分析方法。氨基酸的檢測(cè)從以氨基酸分析儀為主逐步轉(zhuǎn)向普遍采用的高效液相色譜方法：經(jīng)鄰苯二甲醛（OPA）和異硫氰酸苯酯（PITC）柱前衍生后，經(jīng)C18柱分離，紫外或熒光檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。該方法的分析時(shí)間短，靈敏度高，極易在大中型飼料廠中普及應(yīng)用。液相色譜還廣泛應(yīng)用于飼料中藥物的檢測(cè)，隨著國(guó)家對(duì)飼料安全問(wèn)題的重視，飼料標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)組織制定了大批飼料中違禁藥物的檢測(cè)方法，如飼料中鹽酸克倫特羅、呋喃唑酮、磺胺喹惡啉、磺胺二甲基嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、鹽酸氯苯胍等，飼料中西馬特羅、地西泮、苯巴比妥、氯丙嗪、己烯雌酚、雌二醇、玉米赤霉烯酮、氫化可的松、氯霉素、金霉素、土霉素、氯苯胍、喹乙醇、莫能菌素、拉沙絡(luò)西鈉、桿菌肽鋅、氯羥吡啶、尼卡巴嗪、鹽霉素、林可霉素、百里霉素、鹽酸氨丙啉、二甲硝咪唑等等，大部分采用液相色譜或液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行分析。此外，也進(jìn)行了一些飼料中藥物尤其是違禁藥物的分析研究工作，如Wang等（2010）通過(guò)固相萃取等凈化技術(shù)，對(duì)飼料中硝呋烯腙進(jìn)行液相色譜分析，檢出限達(dá)到0.05mg/kg，定量限為0.2mg/kg。對(duì)飼料中多種藥物的同步檢測(cè)分析是現(xiàn)今飼料分析技術(shù)的主流方向之一。Shen等（2009）應(yīng)用高效毛細(xì)管電泳測(cè)定了飼料中5種苯并咪唑類藥物，檢出限低于2mg/kg，所有藥物的回收率均大于73%，變異系數(shù)低于10%。Galarini等（2009）應(yīng)用液相色譜熒光檢測(cè)器和紫外檢測(cè)器檢測(cè)了飼料中的11種喹諾酮類藥物，檢出限為0.04～0.8mg/kg，回收率為69%～98%，變異系數(shù)低于10%。Driver等（2009）用柱后衍生離子交換色譜熒光檢測(cè)了飼料中的新霉素B和新霉素C，在治療劑量的飼料產(chǎn)品中新霉素含量范圍為50%～0.005%（質(zhì)量比，以新霉素為基礎(chǔ)計(jì)）時(shí)，新霉素B平均回收率是100.4%，變異系數(shù)2.28%，新霉素C的回收率是97.5%，變異系數(shù)4.36%，均有良好的分析效果。

應(yīng)用液相色譜對(duì)飼料調(diào)質(zhì)劑的檢測(cè)分析逐漸推廣。飼料調(diào)色劑或者著色劑有天然提取的色素和人工合成色素，主要采用液相色譜儀器進(jìn)行定量分析。如飼料中葉黃素的檢測(cè)，目前精確測(cè)定的最可靠方法是高效液相色譜方法，根據(jù)1984年美國(guó)公職分析化學(xué)家協(xié)會(huì)（AOAC）提出柱層析色譜法測(cè)定總?cè)~黃素，直接用分光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè)。我國(guó)2008年上半年出臺(tái)了飼料添加劑葉黃素檢測(cè)的國(guó)家推薦標(biāo)準(zhǔn)GB/T21517—2008，比柱層析方法更加簡(jiǎn)單，操作步驟少，大大提高了葉黃素檢測(cè)工作的推廣。

1.3 質(zhì)譜技術(shù)

確證分析是針對(duì)一些未知分析目標(biāo)物，通過(guò)對(duì)質(zhì)譜庫(kù)比對(duì)等進(jìn)行未知物的確定。確證法可以應(yīng)用多種技術(shù)，如高效液相色譜方法、氣相色譜方法、色譜－質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)等，尤其是質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的應(yīng)用，使得在檢測(cè)微量危害物和殘留物方面發(fā)揮了重要的作用。我國(guó)在對(duì)“瘦肉精”專項(xiàng)查處工作中，采用的檢測(cè)技術(shù)方法是應(yīng)用液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)樣品進(jìn)行定性、定量分析，對(duì)飼料安全的監(jiān)督具有保障作用。

各種分析技術(shù)聯(lián)用是現(xiàn)代分析發(fā)展的特點(diǎn)，聯(lián)用技術(shù)即可進(jìn)行分離，同時(shí)又可對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行定性和定量，因此在確證分析中得到廣泛的應(yīng)用。飼料分析中常見(jiàn)的聯(lián)用技術(shù)有氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GCMS）、液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（LC－MS）、液相色譜－電感耦合等離子體光譜－質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（LC－ICP－MS）等。Wang等（2010）應(yīng)用HPLC－ICP－MS檢測(cè)了飼料添加劑有機(jī)砷和飼料中的陽(yáng)離子砷，很好地分離檢測(cè)了洛克沙砷、阿散酸、砷酸、亞砷酸、一甲基砷、二甲基砷、4－羥基苯砷酸7種砷，砷最低檢出量能達(dá)到1.7 μg/kg，7種形態(tài)砷的回收率大于78.5%。Wang等（2006）應(yīng)用HPLC－MS對(duì)飼料中呋喃唑酮、呋喃他酮、呋喃西林和硝呋烯腙進(jìn)行檢測(cè)，優(yōu)化分離條件，實(shí)現(xiàn)對(duì)四種呋喃類藥物的同步檢測(cè)。對(duì)飼料中鎮(zhèn)靜劑的同步檢測(cè)已經(jīng)列為我國(guó)農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)：飼料中鹽酸異丙嗪、鹽酸氯丙嗪、地西泮、鹽酸硫利達(dá)嗪和奮乃靜的同步測(cè)定－高效液相色譜法和液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法（NY/T 1458—2007）。采用液相色譜－電噴霧離子井（LC/ESI－MS/MS）檢測(cè)飼料中的莫諾霉素，檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室制備樣品的含量范圍是0.50～30.0 μg/g，回收率為83.9%～94.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)變異小于 23%，定量限 0.1 μg/g（Gallo 等，2010）。Delahaut等（2010）利用 HPLC－MS/MS檢測(cè)飼料中拉沙洛西鈉、鹽霉素鈉、沙利霉素鈉等11種抗球蟲(chóng)藥物鈉鹽，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)目標(biāo)含量低于歐盟標(biāo)準(zhǔn)。Zhang等（2009）采用LC－MS同步檢測(cè)飼料中違禁藥物沙丁胺醇、萊克多巴胺和克倫特羅，在添加劑量為 0.5～500mg/kg含量范圍內(nèi)，回收率為83%～110%，變異系數(shù)為1.5%～11%，該方法的檢出限和定量限分別為0.01和0.05mg/kg。Kantiani等（2010）應(yīng)用液相色譜－電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜（SPE－LC－ESI－MS－MS）同步檢測(cè)飼料中18種抗生素，包括青霉素類、先鋒霉素類和磺胺類藥物，定量限達(dá)到0.25～5.79 mμg/kg。

關(guān)于對(duì)飼料中添加藥物尤其是違禁藥物的色譜－質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的研究成果很多，并且還在不斷的研究發(fā)展中。由于這些聯(lián)用技術(shù)需要的大型儀器價(jià)格昂貴，使用成本高，并且需要特殊的場(chǎng)地和專門(mén)的人才，因此限制其在飼料監(jiān)督過(guò)程中的廣泛應(yīng)用。

2 生物技術(shù)在飼料檢測(cè)中的應(yīng)用

應(yīng)用生物學(xué)檢測(cè)方法目前已經(jīng)成為飼料安全檢測(cè)中重要的技術(shù)之一，特別是免疫學(xué)檢測(cè)方法，幾乎是快速篩選的主要技術(shù)，作為一種新型的分析技術(shù)手段已經(jīng)滲透到安全分析的其他環(huán)節(jié)。

2.1 免疫學(xué)方法

免疫學(xué)方法是在特異性抗體－抗原反應(yīng)原理基礎(chǔ)上建立的，在20世紀(jì)初被用來(lái)進(jìn)行肉的種類的鑒別，主要有酶聯(lián)免疫法（ELISA）、放射免疫法（RIA）和免疫熒光法（FIA）?，F(xiàn)在已有多種試劑盒被研發(fā)出來(lái)，用于飼料中違禁藥物如鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、地西泮、沙丁胺醇、氯丙嗪、四環(huán)素、呋喃類藥物等。同時(shí)對(duì)飼料中動(dòng)物源性成分如肉骨粉、反芻動(dòng)物成分等進(jìn)行檢測(cè)。由于免疫分析技術(shù)是以抗原與抗體的特異性、可逆性結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)的分析技術(shù)，因此具有極高的選擇性和靈敏性，具有操作簡(jiǎn)單、樣品容量大、儀器化程度高和分析成本低等優(yōu)點(diǎn)，是目前理想的飼料中違禁藥物篩選的方法之一。

此外，酶聯(lián)免疫法用于霉菌毒素的測(cè)定研究取得新的進(jìn)展，現(xiàn)已經(jīng)研究并建立了黃曲霉素B1、赭曲毒素A、玉米赤霉烯酮、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇單克隆抗體酶聯(lián)免疫方法，利用酶聯(lián)免疫藥盒可以快速測(cè)定飼料原料和成品飼料中霉菌毒素污染狀況，為防霉保鮮和防霉劑的使用提供依據(jù)。

Jiménez等（2010）應(yīng)用酶聯(lián)免疫方法檢測(cè)飼料中的磺胺類藥物。Shiu等（2010）建立了靈敏的檢測(cè)谷物飼料及飼料產(chǎn)品中伏馬菌素B1。完全競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫法檢測(cè)商業(yè)飼料中的重組牛生長(zhǎng)激素，在20～500 μg/g有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)大于0.98，日內(nèi)和日間的變異系數(shù)為3.4%和5.3%，并且添加回收率為105%。Li等（2009）應(yīng)用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)飼料中的四種呋喃類藥物，檢出限為0.2～2.1 ng/g，平均回收率為75.9%～86.4%。Zhao等（2008）應(yīng)用單克隆抗體酶聯(lián)免疫法堿性飼料中的喹乙醇，與液相色譜檢測(cè)方法有很高的相關(guān)性。

2.2 以檢測(cè)DNA為基礎(chǔ)的方法

以DNA為基礎(chǔ)的檢測(cè)技術(shù)主要有核酸探針雜交、DNA指紋分析、PCR－RELP分析、PCR特異擴(kuò)增（常規(guī)PCR方法和Real－time PCR方法）。主要原理都是對(duì)各種物種內(nèi)特異的核酸序列進(jìn)行提取、鑒定，從而判定飼料內(nèi)有無(wú)該物種的成分。其中PCR特異擴(kuò)增方法由于其簡(jiǎn)單、快速、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)，成為目前最廣泛應(yīng)用的方法，特別是熒光PCR的應(yīng)用使得檢測(cè)的特異性和敏感性更高。我國(guó)也于2008年4月1日頒布實(shí)施了應(yīng)用PCR方法定性檢測(cè)動(dòng)物源性飼料中動(dòng)物成分的標(biāo)準(zhǔn)，包括駱駝源性成分、狗源性成分、哺乳動(dòng)物源性成分、豬源性成分、兔源性成分、鹿源性成分和馬、驢源性成分的PCR定性檢測(cè)，為進(jìn)一步規(guī)范和監(jiān)督動(dòng)物源性飼料的安全使用提供技術(shù)支持。

Cawthraw等（2009）應(yīng)用實(shí)時(shí)PCR測(cè)定動(dòng)物飼料中禁用的哺乳類及禽類成分，飼料中含有1%的肉骨粉時(shí)檢測(cè)其中的16S rRNA可以進(jìn)行鑒別。用mtATP6作為靶序列，應(yīng)用PCR探針技術(shù)檢測(cè)飼料中的豬源成分，以PPA8和PPA6作為檢測(cè)DNA，檢出限可以分別達(dá)到0.01%和0.001%，這種方法已經(jīng)在日本的飼料檢測(cè)中應(yīng)用（Shinoda等，2008；Yoshida等，2009）。

2.3 微生物的檢測(cè)

飼料中污染微生物的危害主要產(chǎn)生在以下四個(gè)方面，一是含有致病性微生物如沙門(mén)氏菌、志賀氏菌、致病性大腸桿菌等而使動(dòng)物產(chǎn)生疾?。欢俏⑸锏姆敝呈鼓承I(yíng)養(yǎng)成分如脂肪、動(dòng)物蛋白產(chǎn)生腐敗作用；三是非致病性微生物寄生于飼料中，消耗飼料中的養(yǎng)分，使飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值下降；四是某些微生物會(huì)產(chǎn)生毒素如黃曲霉毒素、赭曲霉毒素、肉毒毒素、金黃色葡萄球菌腸毒素等，動(dòng)物食用含有這些毒素的飼料后會(huì)產(chǎn)生危害。目前微生物的檢測(cè)技術(shù)發(fā)展很快，利用了包括微生物學(xué)、分子化學(xué)、生物化學(xué)、生物物理、免疫學(xué)和血清學(xué)等領(lǐng)域的知識(shí)，其目的是建立可用于微生物計(jì)數(shù)、早期診斷、鑒定等方面的快速檢測(cè)技術(shù)。除常規(guī)的平板培養(yǎng)外，目前已有商品化的基因探針試劑盒，如 GENE－TRAK Systems DNA雜交篩選法（AOAC方法：987.10，990.13）。李斯特氏菌、沙門(mén)氏菌、彎曲桿菌等均有DNA探針的試劑盒。目前，已經(jīng)有了全自動(dòng)化的PCR檢測(cè)試劑盒及儀器，如美國(guó)杜邦快立康公司的BAX病原菌檢測(cè)系統(tǒng)?？捎糜跈z測(cè)沙門(mén)氏菌、大腸桿菌O157:H7等致病菌。熒光酶免疫分析篩選方法是在EIA基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記的酶底物，用熒光計(jì)檢測(cè)熒光度值來(lái)判斷結(jié)果。如沙門(mén)氏菌熒光酶免疫分析研究篩選方法是基于EIA測(cè)定沙門(mén)氏菌抗原。沙門(mén)氏菌多克隆免疫色度分析篩選方法已有許多試劑盒，由澳大利亞Bioenterrises Pty Ltd和美國(guó)BioControl Systems，Inc研制的多克隆免疫試劑盒，都已獲 AOAC認(rèn)可。Koyuncu等（2010）建立了以PCR為基礎(chǔ)的商業(yè)化沙門(mén)氏菌enterica檢測(cè)，當(dāng)每25 g飼料中含有1個(gè)沙門(mén)氏菌enterica時(shí)的檢測(cè)結(jié)果與培養(yǎng)法相近，該方法與平板培養(yǎng)的靈敏度及專屬性基本一致。但也會(huì)有一些PCR檢測(cè)陽(yáng)性的飼料中并不能分離出沙門(mén)氏菌，因此PCR方法目前還不能完全替代平板培養(yǎng)法，但可以用來(lái)進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查研究的方法。

3 飼料檢測(cè)技術(shù)的未來(lái)發(fā)展方向

針對(duì)飼料工業(yè)快速發(fā)展的需要，尤其是高新技術(shù)產(chǎn)品及飼料、營(yíng)養(yǎng)研究的最新進(jìn)展需要開(kāi)展相應(yīng)的“快”、“高”、“難”檢測(cè)技術(shù)的研究。在飼料樣品預(yù)處理方面，現(xiàn)代分析樣品制備技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)就是使處理樣品的過(guò)程要簡(jiǎn)單、處理速度快、使用裝置要小、引進(jìn)的誤差要小、對(duì)欲測(cè)定組分的選擇性和回收率要高。目前，國(guó)際上較多使用固相萃取(SPE)、微波提取技術(shù)、凝膠層析(GPC)、加速溶劑提取（ASE）、基體分散固相萃?。∕SPD）、超臨界萃?。⊿FE）、固相微萃取技術(shù)。而我國(guó)目前主要采用傳統(tǒng)的溶劑萃取，液液分配，柱層析凈化，前處理方法自動(dòng)化程度低、提取凈化的效率不高，速度慢，環(huán)境污染嚴(yán)重。新開(kāi)發(fā)的前處理技術(shù)其目的和結(jié)果就是要實(shí)現(xiàn)快速、有效、簡(jiǎn)單和自動(dòng)化地完成分析樣品制備過(guò)程。在儀器設(shè)備方面，要求檢測(cè)儀器自動(dòng)化程度進(jìn)一步提高，色譜分析柱通用性強(qiáng)，朝更高靈敏度、更高選擇性、更方便快捷的方向發(fā)展，不斷推出新的方法來(lái)解決遇到的新的分析問(wèn)題。

此外，應(yīng)進(jìn)一步開(kāi)展針對(duì)飼料中違禁藥物、霉菌毒素等有毒有害物質(zhì)的高通量篩選技術(shù)和快速檢測(cè)技術(shù)的研究，開(kāi)展對(duì)轉(zhuǎn)基因飼料中外源基因的篩查及定性分析技術(shù)及微生態(tài)制劑的質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)和安全評(píng)價(jià)技術(shù)的研究等。

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