閆曉楠，安適之，陳 偉，孫律衡，袁 培

(天津中新藥業(yè)研究中心，天津 300457)

降脂膠囊由青黛、茶葉等組成，具有清熱解毒，涼血化痰的作用。用于治療高血脂、高血粘引起的頭暈、胸悶、胸痛、心悸、肢麻及心律不齊等癥狀。其中青黛為主要有效成分。青黛為爵床科植物馬藍(lán)［Baphicacanthus cusia(Nees)Bremek.］、蓼科植物蓼藍(lán)(Polygonum tinctorium Ait.)或十字花科植物菘藍(lán)(Isatis indigotica Fort.)的葉或莖葉經(jīng)加工制得的干燥粉末或團(tuán)塊。主要有效成分靛藍(lán)和靛玉紅，有清熱解毒、涼血止血、清肝瀉火等功效。《中國(guó)藥典》2005年版中分別采用紫外分光光度法、薄層掃描法測(cè)定青黛中靛藍(lán)的含量，存在準(zhǔn)確度低，操作復(fù)雜等問(wèn)題。而本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法測(cè)定降脂膠囊中靛藍(lán)，使得測(cè)定過(guò)程更簡(jiǎn)便、迅速，結(jié)果更準(zhǔn)確。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Lab Allaince Series 1500高效液相色譜儀(包括Lab Allaince Model 500紫外檢測(cè)器);超聲波清洗器(HU10260B);電子天平(SARTORIUS BP211D)。

1.2 試藥 靛藍(lán)對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):110716 －200408);降脂膠囊(自制，批號(hào) 0801、0802、0803);甲醇為色譜純(天津市康科德科技有限公司);乙腈(天津市康科德科技有限公司);醋酸(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司);水為純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:Phenomenex Gemini C18(250 mm×4.6 mm，5 μm);以甲醇 －0.1%醋酸(70∶30)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)285 nm;流速1 mL·min－1。理論塔板數(shù)按靛藍(lán)峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液 取本品0.1 g，精密稱定，精密加入N，N－二甲基甲酰胺50 mL，稱定重量，超聲處理40 min，稱重，用N，N－二甲基甲酰胺補(bǔ)足減失重量。搖勻，濾過(guò)，續(xù)濾液經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，即得。

2.2.2 對(duì)照品溶液 精密稱取靛藍(lán)對(duì)照品適量，加N，N－二甲基甲酰胺配制成每1 mL含8 μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液 取缺靛藍(lán)的處方藥材，按供試品溶液的制備方法制備，作為陰性樣品溶液。

2.3 專屬性實(shí)驗(yàn) 取靛藍(lán)對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液進(jìn)行測(cè)定，色譜圖見(jiàn)圖1，各主成分峰間分離完全，陰性對(duì)照無(wú)干擾。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液，分別配制成濃度為 0.98 μg·mL－1、1.96 μg·mL－1、2.94 μg·mL－1、5.88 μg·mL－1、9.80 μg·mL－1的對(duì)照品溶液，取上述溶液，按擬定的色譜條件，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，得回歸方程:Y=2251550X-2048(r=0.9990)。結(jié)果表明:靛藍(lán)在 0.0196 －0.196 μg之間峰面積與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。

圖1 A.靛藍(lán)對(duì)照品，B.供試品溶液，C.陰性樣品溶液

2.5 精密度試驗(yàn) 取同一供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算靛藍(lán)峰面積的RSD為1.53%。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批樣品，平行制備6份供試品溶液，測(cè)定，計(jì)算靛藍(lán)峰面積的RSD為1.41%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液，分別于0、2、4、6、8 h進(jìn)樣，按靛藍(lán)的峰面積計(jì)算RSD為8 h相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.20%，6 h相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.52%。表明供試品溶液在室溫下6 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 加樣回收試驗(yàn) 精密稱取樣品(批號(hào)為080201)0.05 g，精密加入 0.0126 mg·mL－1的靛藍(lán)對(duì)照品溶液 50 mL，按照供試品溶液制備方法制備，依擬定色譜條件測(cè)定6份，計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率98.9%，RSD為1.97%(n=6)。

2.9 樣品的測(cè)定 取本品3批樣品，制備供試品溶液，分別取供試品溶液和對(duì)照品各10 μL，進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算，結(jié)果3批樣品含量分別為2.64 mg/粒、2.65 mg/粒、2.62 mg/粒。

3 討論

3.1 提取溶媒的選擇 多數(shù)文章報(bào)道使用三氯甲烷作為溶媒提取青黛藥材的靛藍(lán)，本實(shí)驗(yàn)使用三氯甲烷進(jìn)行前處理，測(cè)定結(jié)果表明提取率低，且樣品穩(wěn)定性較差。改用N，N－二甲基甲酰胺，發(fā)現(xiàn)對(duì)于靛藍(lán)的提取較完全［1］。

3.2 用HPLC法測(cè)定青黛中靛藍(lán)的含量多使用甲醇－水作為流動(dòng)相。但比例不同，我們通過(guò)考察發(fā)現(xiàn)用甲醇－0.1%醋酸(70∶30)時(shí)效果最佳，單純使用水主峰存在拖尾現(xiàn)象，使用 0.1%醋酸效果較好［2］。

3.3 使用不同的十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱進(jìn)行測(cè)定，如 Agilent Extend C18(4.6 mm ×250 mm，5 μm)、A-pollo C18(4.6 mm × 250 mm，5 μm)、Phenomenex PRODIGY C18(4.6 mm ×250 mm，5 μm)。色譜峰峰型和分離度良好，測(cè)定結(jié)果不受影響，證明本方法耐用性良好。

［1］范立昌，石立華，劉世琛.青黛膜劑的制備和靛藍(lán)的含量測(cè)定［J］.藥學(xué)研究，2008，5(7):24 －25.

［2］劉澤玉，蘇柘僮，高亞男，等.HPLC法同時(shí)測(cè)定青黛有效成分靛藍(lán)和靛玉紅的含量［J］.中國(guó)藥師，2010，13(3):324－326.