張培培，韓春超

(山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250355)

當(dāng)歸為傘形科植物Angellica sinensis(Oliv)Diels.的根。具有補(bǔ)血調(diào)經(jīng)，活血止痛，潤腸通便的功效。主要用于熱血虛諸癥，血虛血瘀，月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)閉，痛經(jīng)，虛寒性腹痛，跌打損傷，癰疽瘡瘍，風(fēng)寒痹痛，血虛腸燥便秘［1］。當(dāng)歸所含有效成分主要是阿魏酸［2］，具有促進(jìn)細(xì)胞免疫和體液免疫，增強(qiáng)單核細(xì)胞的吞噬功能［3］。本實(shí)驗(yàn)以阿魏酸為指標(biāo)綜合評(píng)判，對(duì)萃取法與索氏提取法進(jìn)行對(duì)比研究。

1 儀器與材料

MA110型電子分析天平(上海第二分析儀器廠);KQ—100B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);LXI—Ⅲ離心沉淀器(上海醫(yī)療器械三廠);Agilent 1100高效液相色譜儀。

阿魏酸對(duì)照品(批號(hào):110773－200611，供含量測(cè)定用)購自中國藥品生物制品檢定所;甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品液的制備 將當(dāng)歸中藥材粉碎，稱取10～20目的當(dāng)歸粗粉25 g，浸泡0.5 h，用中性水加熱回流提取3次(加水量依次為藥材重量的10，8，8倍，提取時(shí)間依次為3.0，3.0，3.0 h)，提取液用8層紗布分別濾過，濾液離心(3000 r·min－1，15 min)，合并上清液，在水浴鍋上濃縮并定容。

2.2 提取方法比較

2.2.1 索氏提取法制備供試液 取樣品液于蒸發(fā)皿中水浴蒸至近干，加硅藻土3 g，攪勻，烘干，研細(xì)，以甲酸－乙酸乙酯(1∶19)索氏提取2 h，回收溶劑，殘?jiān)舆m量甲醇使溶解，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，得到供試液A。

2.2.2 萃取法制備供試液 取樣品液用甲酸－乙酸乙酯(1∶19)萃取(20 mL×6次)，合并萃取液，回收溶劑至干，殘?jiān)舆m量甲醇使溶解，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，得到供試液B。

2.3 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取阿魏酸對(duì)照品2.370 mg，用甲醇－1%冰醋酸(30∶70)溶解并定容至5 mL，制成對(duì)照液A(每1 mL含當(dāng)歸液0.474 mg)，取對(duì)照液A，用甲醇－1%冰醋酸(30∶70)稀釋成 0.0077 mg·mL－1，0.0159 mg·mL－1，0.0316 mg·mL－1，0.0633 mg·mL－1，0.1263 mg·mL－1對(duì)照液 A1～5。

2.4 阿魏酸的含量測(cè)定

2.4.1 色譜條件 色譜柱為 Kromasil C18柱(5 μm，250 mm×4.6 mm);流動(dòng)相為甲醇－1%冰醋酸(30∶70);檢測(cè)波長320 nm;進(jìn)樣量20 μL;柱溫30 ℃。

2.4.2 線性關(guān)系考察 精密吸取2.3項(xiàng)下對(duì)照品溶液A1～5，按2.4.1項(xiàng)下色譜條件，依法測(cè)定。以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，計(jì)算回歸方程為:Y=3151.9X－3.7704，r=0.9999，表明在0.0077～0.1263 mg·mL－1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4.3 含量測(cè)定［4］依次吸取阿魏酸對(duì)照品溶液和2.2項(xiàng)下供試液A、B，按2.4.1項(xiàng)下色譜條件，依法測(cè)定，結(jié)果見圖1、圖2 和圖3、表1。

圖3 索氏提取法的阿魏酸圖譜

表1 2種供試液中阿魏酸成分的含量比較

3 小結(jié)與討論

3.1 根據(jù)阿魏酸含量測(cè)定結(jié)果比較，索氏提取法提取阿魏酸高于萃取法，表明當(dāng)歸有效成分的提取索氏提取法優(yōu)于萃取法。

3.2 采用不同比例甲醇－水溶液進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)加入冰醋酸可明顯改善峰形，提高柱效?？梢罁?jù)不同色譜柱，調(diào)整甲醇與水的比例，以縮短分析時(shí)間。

［1］高學(xué)敏.中藥學(xué)［M］.2版.北京:中國中醫(yī)藥出版社，2007:460.

［2］匡海學(xué).中藥化學(xué)［M］.北京:中國中醫(yī)藥出版社，2003:99.

［3］袁麗霞，王紅.HPLC法測(cè)定當(dāng)歸苦參丸中阿魏酸的含量［J］.中國藥事，2008，22(1):61.

［4］張兆旺，王英姿，孫秀梅.當(dāng)歸苦參丸2種方法提取液的成分比較［J］.中國中藥雜志，1999，24(12):734－735.