游世晶 具紫勇 夏勇 李藝 何金森

上海中醫(yī)藥大學針灸推拿學院（上海 201203）

近年來，應用中醫(yī)藥方法特別是針灸防治運動性疲勞已受到廣泛關注。但針刺有一定的創(chuàng)傷性，運動員對其有一定的懼怕心理，因此其在比賽和訓練中的應用受限。而經(jīng)皮穴位電刺激（transcutanclus electrical acupoint stimulation，TEAS）克服了這個缺點，具有無創(chuàng)傷、易操作、便于攜帶等優(yōu)點，利于廣泛應用。TEAS用于治療運動性疲勞的研究還處于起步階段，研究表明TEAS可以減少血乳酸堆積、減少脂質過氧化反應，提高機體抗氧化能力，從而提高機能水平，延緩運動性疲勞發(fā)生［1-4］。但TEAS對過量運動引起骨骼肌疲勞方面作用的研究報道較少，此外，目前的研究普遍認為運動對一氧化氮（NO）及其合酶（NOS）的影響與運動強度有關，適當強度的運動可適當提高機體NO及NOS活性，而過度訓練會導致機體NO過度升高，產(chǎn)生細胞毒性作用。本實驗采用大鼠跑臺運動疲勞模型，觀察TEAS對大鼠骨骼肌NO、總一氧化氮合酶（TNOS）和誘導型一氧化氮合酶（iNOS）含量的影響，探討TEAS在防治運動性骨骼肌疲勞方面的作用機制。

1 材料和方法

1.1 實驗動物與分組

40只純種清潔級SD雄性大鼠，體重200～220 g，由上海中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供。飼養(yǎng)溫度18～21℃，相對濕度40%～60%，每天光照12 h，大鼠自由攝食飲水，適應性喂養(yǎng)1周后，每天以10 m/min的速度進行適應性跑臺練習，連續(xù)3天，每天15 min。練習后，將大鼠按體重隨機分為5組：正常組、模型組、正常刺激組、治療1組和治療2組，每組8只。

1.2 運動方案

訓練強度參照Bedford運動負荷標準［5］，大鼠以15 m·min-1×15 min的負荷開始訓練，隔日速度增加2 m·min-1，時間增加5 min，當負荷遞增至38 m·min-1×60 min時，維持此負荷訓練至8周結束，每周訓練6天。訓練中使用小木棍或毛刷刺激動物尾部，使動物保持在跑道前1/3處，以保證運動強度。運動過程中未使用聲、光、電刺激，以避免大鼠的應激反應對實驗結果的影響。

1.3 干預方法

用電動剃毛器分別于大鼠后足三里、環(huán)跳穴位備皮，75%酒精局部消毒，注意避免皮膚損傷。環(huán)跳穴在后肢髖關節(jié)后上緣；（后）足三里穴在后肢后外側，腓骨小頭下約5 mm處［6］。

正常組：常規(guī)飼養(yǎng)，每天使大鼠俯臥于自制大鼠固定器上15 min，無任何干預。

模型組：進行8周跑臺運動，每天使大鼠俯臥于自制大鼠固定器上15 min，無其它干預。

正常刺激組：不運動。每天使大鼠俯臥于自制大鼠固定器上，分別于足三里、環(huán)跳穴處放一直徑約0.5 cm的電極片，與韓氏HANS-200E穴位神經(jīng)刺激儀（南京濟生醫(yī)療科技有限公司）連接，選用疏密波模式刺激15 min，頻率2～15 Hz，強度2.5 mA。

治療1組：于跑臺訓練前對大鼠進行經(jīng)皮穴位電刺激，方法同正常刺激組，結束后1h再進行跑臺運動，共8周。

治療2組：從跑臺訓練第2周起，每次運動訓練后1 h對大鼠進行經(jīng)皮穴位電刺激，方法同正常刺激組，共7周。

1.4 取材及處理

末次訓練治療后，各組大鼠禁食不禁水，24 h后分別用電子秤稱量各組大鼠體重，后用2%戊比巴妥鈉30 ml/kg腹腔注射麻醉后，迅速取右后肢腓腸?。ūM可能去除脂肪組織和結締組織），稱取適量腓腸肌加0.9%生理鹽水，按W（g）:v（m）=1:10制成勻漿，分離上清液，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 指標檢測

在實驗中觀察大鼠的一般情況，包括神態(tài)、活動、反應、食欲、二便等。采用硝酸還原酶法測試NO；采用比色法測定NOS活性；采用考馬斯亮蘭法進行組織蛋白定量。試劑由南京建成生物工程研究所提供（批號20091121），具體檢測過程嚴格按說明書進行。

1.6 統(tǒng)計學分析

2 結果

大鼠一般情況：實驗前各組大鼠神態(tài)安靜，活動正常，對外界刺激及周圍環(huán)境的變化反應靈敏，皮毛干凈光滑，飲食、二便正常。隨著跑臺訓練強度的增加，大鼠逐漸出現(xiàn)了神情倦怠，反應遲鈍，食欲降低，大便偏稀，體型瘦弱等疲勞癥狀。模型組大鼠雙眼乏神，毛發(fā)枯槁，對外界刺激反應遲鈍，運動能力明顯下降，不給予刺激時難以維持原強度運動。治療組大鼠疲勞癥狀比模型組有所好轉。

表1顯示，實驗前各組大鼠體重比較差異無統(tǒng)計學意義。8周后，模型組、治療1組、治療2組大鼠體重明顯低于正常組和正常刺激組，治療組1組與2組大鼠體重顯著高于模型組。

表1 各組大鼠體重變化比較

表2顯示，8周后，模型組、治療1組和治療2組大鼠骨骼肌NO、TNOS和iNOS含量顯著高于正常組和正常刺激組（P < 0.05）；治療1組和治療2組大鼠NO、TNOS和iNOS含量顯著低于模型組（P < 0.05）。

表2 各組大鼠骨骼肌NO、NOS含量比較

3 討論

運動性疲勞可歸于中醫(yī)“虛損”的范疇，其病因病機主要與精氣耗傷有關。足三里為足陽明胃經(jīng)的“合穴”和“下合穴”，為補虛要穴，能促進或增強機體的免疫功能。環(huán)跳穴是足少陽、太陽經(jīng)之交會穴。此兩經(jīng)與腰腿部關系最密切，《針灸甲乙經(jīng)》云：“利腰脅相引痛急，髀筋瘈，脛痛不可屈伸，痹不仁，環(huán)跳主之。”從解剖部位看，刺激環(huán)跳穴可刺激臀大肌、股方肌、股上皮神經(jīng)、坐骨神經(jīng)、臀下神經(jīng)。故刺激環(huán)跳可改善下肢運動和感覺功能，具有利腰腿、通經(jīng)絡之功效。因此，本實驗選擇足三里和環(huán)跳穴作為防治運動性骨骼肌疲勞的穴位。

體重變化可以反映機體的營養(yǎng)和肌肉生長情況，在一定程度上反映訓練大鼠疲勞模型的成功與否。本實驗結果表明，訓練后，模型組大鼠體重明顯下降，與正常組相比有顯著性差異。兩治療組大鼠體重雖然也較正常組大鼠低，但明顯高于模型組。這說明經(jīng)皮穴位電刺激足三里、環(huán)跳穴可以減緩大鼠體重下降，改善疲勞癥狀，在一定程度上有抗疲勞的作用。

研究表明過量運動導致肌肉酸痛和最大肌力下降往往伴有肌肉內NO顯著增多和DNA的損傷，NO是運動中產(chǎn)生的一種不容忽視的自由基物質［7-9］，此外，長期過度訓練可導致大鼠心肌與血清iNOS活性升高，引起心血管內皮細胞損傷［10］。NOS是NO生成的催化酶，在骨骼肌急性損傷、慢性持續(xù)性勞損、自身免疫炎癥性疾病等應激狀態(tài)下，骨骼肌iNOS表達明顯升高，NO合成過量，可導致細胞損傷，直至細胞核酸的亞硝?；?、脫氨基、氧化、破壞DNA結構等多種病理損傷［11］。本實驗結果表明，大運動量耐力訓練大鼠腓腸肌NO、TNOS和iNOS水平顯著上升，與正常組相比有顯著性差異。而兩治療組，無論訓練前還是訓練后進行干預，均能降低腓腸肌NO、TNOS和iNOS水平，與模型組相比有顯著性差異，說明TEAS可能通過抑制NO表達增多預防大運動量耐力訓練對大鼠骨骼肌的破壞作用。正常組與正常刺激組之間無顯著差異，表明TEAS對正常大鼠無明顯影響。

綜上所述，經(jīng)皮穴位電刺激大運動量耐力訓練大鼠足三里、環(huán)跳穴可以顯著降低其腓腸肌NO、TNOS、iNOS水平，防止因過度訓練導致NO合成過量對骨骼肌細胞的損傷，進而起到防治骨骼肌疲勞的作用。TEAS的無創(chuàng)性及數(shù)碼顯示功能確保了使用的客觀準確和可重復性，有望在運動性疲勞研究領域中進一步加以研究應用。

［1］楊翼，李章華，何金森.穴位經(jīng)皮神經(jīng)電刺激對鼠耐力訓練體能的影響. 中國康復理論與實踐，2004，10（7）：408-410.

［2］吳立紅，董曉敏. 經(jīng)皮穴位電刺激對大鼠運動疲勞時血乳酸的影響. 針灸臨床雜志，2006，22（8）：51-53.

［3］梁宜，方劍喬，邵曉梅，等. 經(jīng)皮穴位電刺激足三里穴對跑臺力竭運動大鼠自由基代謝的影響. 中國中醫(yī)藥科技，2008，15（4）：251-252.

［4］江大雷. 運動中全程使用經(jīng)皮穴位電刺激對有氧耐力的影響. 實用醫(yī)藥雜志，2009，26（3）：54-56.

［5］Bedford TG，Tipton CM，Wilson NC，et al. Maximum oxygen consumption of rats and it s changes with various experimental procedures. J Appl Physiol，1979，47（6）：1278-1283.

［6］李忠仁. 實驗針灸學. 北京：中國中醫(yī)藥出版社，2003. 327

［7］鐘慈聲，孫安陽. 一氧化氮的生物醫(yī)學. 上海醫(yī)科大學出版社，1997. 22-24.

［8］張漓，馮連世，宗丕芳. 補充NO前體L-Arg對耐力訓練大鼠疲勞狀況的影響. 中國運動醫(yī)學雜志，2004，23（1）：27-32.

［9］Radak Z，Pucsok J，Mecseki S，et al. Muscle sorenessinduced reduction in force generation is accompanied by increased nitric oxide content and DNA damage in human skeletal muscle. Free Radic Biol Med，1999，26（7-8）：1059-1063.

［10］孫紅梅. 不同運動負荷對大鼠心肌與血清一氧化氮及其合酶的影響. 中國運動醫(yī)學雜志，2008，27（2）：214-215.

［11］Ambiel CR and Alves-Do-Prado W. Neuromuscular facilitation and blockade induced by L-arginine and nitric oxide in the rat isolated diaphragm. Gen Pharmacol，1997，28：789-794.