安賀軍，王新月，于 玫，沈 靜

（1.解放軍第306醫(yī)院中醫(yī)科，北京 100101；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院消化科，北京 100700；3.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029）

益氣活血解毒法對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎血漿血小板活化的臨床及實(shí)驗(yàn)研究*

安賀軍1，王新月2，于 玫3，沈 靜3

（1.解放軍第306醫(yī)院中醫(yī)科，北京 100101；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院消化科，北京 100700；3.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029）

[目的]探討益氣活血解毒法對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎（UC）血漿血小板活化的影響。[方法]分臨床研究及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)兩部分；臨床研究以90例潰瘍性結(jié)腸炎復(fù)發(fā)患者按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為2組，中藥治療組45例，西藥對(duì)照組45例。治療3個(gè)月后對(duì)完全緩解及有效病例（其中治療組39例，對(duì)照組32例）進(jìn)行為期6個(gè)月的隨訪。治療組給予益氣活血解毒立法的中藥湯劑，對(duì)照組給予柳氮磺胺吡啶治療，并各與20例作正常對(duì)照。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)用三硝基苯磺酸（TNBS）復(fù)制實(shí)驗(yàn)性大鼠UC模型，將其隨機(jī)分為模型組、西藥對(duì)照組、中藥治療組，并設(shè)正常對(duì)照組。進(jìn)行反映血小板活化程度的特異性標(biāo)志物P-選擇素的檢測(cè)。[結(jié)果]臨床研究中，治療前UC患者血漿P-選擇素水平明顯高于正常健康人（P＜0.01）；治療組治療后及隨訪時(shí)含量明顯低于西藥對(duì)照組（P＜0.05 或 P＜0.01）。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，在治療 10 d 時(shí)，兩治療組皆可降低血漿P-選擇素水平，西藥組水平明顯低于中藥組（P＜0.05）；治療30 d時(shí)中藥組與西藥組相比無顯著差異（P＞0.05）；停藥 10 d 時(shí)，中藥組明顯低于西藥組（P＜0.05）。[結(jié)論]以益氣活血解毒立法的中藥潰結(jié)復(fù)發(fā)方與西藥比較，可有效降低血漿P-選擇素水平，從而阻抑血小板活化，可能是抗?jié)⒔Y(jié)復(fù)發(fā)作用機(jī)制之一。

結(jié)腸炎；潰瘍性；抗復(fù)發(fā)；益氣活血解毒；P-選擇素；血小板活化

潰瘍性結(jié)腸炎（UC）是一種以慢性炎癥和潰瘍形成為主要病理特點(diǎn)的消化道疾病。由于其患病率逐漸增加、高復(fù)發(fā)率和結(jié)腸直腸癌發(fā)生關(guān)系密切而成為目前研究熱點(diǎn)；本研究以導(dǎo)師在臨床長(zhǎng)期使用行之有效的益氣活血解毒立法的潰結(jié)復(fù)發(fā)方為干預(yù)手段，探討其對(duì)血漿血小板活化的影響，報(bào)告如下。

1 臨床研究

1.1 資料與方法

1.1.1 臨床資料 采用西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]及參照1994年頒布的《慢性非特異性潰瘍性結(jié)腸炎中西醫(yī)結(jié)合診斷、辨證和療效標(biāo)準(zhǔn)（試行方案）》[2]自擬的中醫(yī)證候標(biāo)準(zhǔn)，于2006年3月—2007年1月選擇臨床類型屬于慢性復(fù)發(fā)型活動(dòng)期和慢性持續(xù)型潰瘍性結(jié)腸炎患者共90例，病例來自于北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院、解放軍第301醫(yī)院、306醫(yī)院門診和病房；按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為中藥治療組45例，西藥對(duì)照組45例。治療過程中脫落5例，1個(gè)療程后對(duì)完全緩解及有效病例（其中治療組39例，對(duì)照組32例，最后有效病例71例）進(jìn)行為期6個(gè)月的隨訪。排除有嚴(yán)重并發(fā)癥以及患有嚴(yán)重心、腦、肝、腎等疾病者。

1.1.2 治療方法 治療組給予益氣活血解毒立法的潰結(jié)復(fù)發(fā)方中藥湯劑，基本方如下：生黃芪30 g，炒白術(shù)10 g，當(dāng)歸10 g，炒五靈脂10 g，生蒲黃（包）10 g，赤芍、白芍各 10 g，焦檳榔 10 g，煨木香 10 g，黃連10 g，黃柏10 g，連翹20 g。臨床并隨證加減。用法：每日1劑，水煎，取300mL，分早晚2次各150mL服用。對(duì)照組柳氮磺胺吡啶每日4～6 g，分4次口服。觀察療程為3個(gè)月，觀察完畢后，減少藥量鞏固治療，療程結(jié)束后隨訪6個(gè)月，觀察患者的復(fù)發(fā)情況。

1.1.3 血漿標(biāo)本 治療前、治療3個(gè)月后及6個(gè)月隨訪時(shí)，抽取患者靜脈血各1次，清晨空腹靜脈采血，2%乙二胺四乙酸二鈉鹽及0.7%氯化鈉（2%EDTA-Na2-0.7%NaCl）抗凝，立即分離血漿，放-70 ℃冰箱保存待檢。其中同時(shí)檢測(cè)正常人血漿20例作為血漿P-選擇素正常對(duì)照。血漿P-選擇素測(cè)定采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法，試劑盒由美國(guó)RB公司進(jìn)口分裝，購自北京百事創(chuàng)新科技有限公司；嚴(yán)格按照試劑盒說明操作。

1.1.4 統(tǒng)計(jì)方法 采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，正態(tài)分布計(jì)量資料兩組間的比較采用t檢驗(yàn)，多組間的比較采用單因素方差分析，偏態(tài)分布計(jì)量資料的比較采用秩和檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 結(jié)果 治療前UC組（71例）與正常組（20例）、治療后復(fù)發(fā)組（16例）、未復(fù)發(fā)組（55例）血漿P-選擇素含量比較分別為（46.43±12.78）、（23.06±12.55）、（35.52±6.77）、（25.42±8.24）μg/L。經(jīng) t檢驗(yàn)，治療前，UC組血漿P-選擇素含量明顯高于正常健康人（P＜0.01）。復(fù)發(fā)組血漿P-選擇素含量明顯高于未復(fù)發(fā)組（P＜0.01）?？梢哉J(rèn)為病情復(fù)發(fā)與血漿P-選擇素含量變化有關(guān)。

治療后及隨訪時(shí)兩組血漿P-選擇素含量的變化比較 見表1。

表1 治療后及隨訪時(shí)血漿P-選擇素含量的變化比較（±s）Tab.1 Com parison of p lasma P-selectin expression after treatmentand during follow-up visi（t±s） μg/L

表1 治療后及隨訪時(shí)血漿P-選擇素含量的變化比較（±s）Tab.1 Com parison of p lasma P-selectin expression after treatmentand during follow-up visi（t±s） μg/L

注：與西藥對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別 例數(shù) 治療后 隨訪時(shí)中藥治療組 39 27.02±3.48* 29.09± 8.32**西藥對(duì)照組 32 30.64±4.46* 36.58±10.42**

治療組治療后及隨訪時(shí)血漿P-選擇素含量明顯低于西藥對(duì)照組（P＜0.05或P＜0.01）。西藥對(duì)照組隨訪時(shí)與治療后比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

2.1 材料與方法

2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)健康雄性SD大鼠，體質(zhì)量（160～200）g，由中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（京）2006-0006。

2.1.2 主要試劑與儀器 2，4，6—三硝基苯磺酸（TNBS），為 Sigma公司產(chǎn)品，批號(hào)：074K007；水合氯醛購自恒業(yè)中遠(yuǎn)化工有限公司；ELISA法試劑盒由美國(guó)RB公司進(jìn)口分裝，購自北京百事創(chuàng)新科技有限公司；離心機(jī)：型號(hào)：LDZ5－2，北京醫(yī)用離心機(jī)廠生產(chǎn)。

2.1.3 藥物 潰結(jié)復(fù)發(fā)方主要藥物組成同上，購自北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院，由北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院制劑室煎制，之后濃煎為生藥量5 g/mL灌胃用，每只每日1mL；灌胃劑量為60 kg體質(zhì)量成年人藥量的8倍。奧沙拉秦鈉膠囊劑（暢美）由天津力生制藥有限公司生產(chǎn)，每粒0.25 g，蒸餾水配成混懸液，配成0.67 g/L溶液，每只每日1mL；灌胃劑量為60 kg體質(zhì)量成年人藥量的8倍。

2.1.4 動(dòng)物模型制備[3-4]將大鼠正常飼養(yǎng)1周后，禁食24 h（不禁水），稱體質(zhì)量，100mg/L水合氯醛（3.8mL/kg）腹腔麻醉，將一直徑2mm、長(zhǎng)約12 cm的橡膠管由大鼠肛門輕緩插入，約深8～10 cm，然后以0.85mL TNBS/乙醇液（120mg/kg TNBS+體積分?jǐn)?shù)50%乙醇0.25mL），約5秒灌注完畢；將造模鼠倒置8min后（盡量減少造模試劑流出）放回籠內(nèi)。

2.1.5 動(dòng)物分組及給藥 將120只大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為4組，其中模型組、西藥組、中藥組每組各30只，均予造模；正常組30只，不予造模，但與其余3組同步禁食、麻醉，同步飼養(yǎng)觀察。于造模后第2天起：正常組、模型組以蒸餾水灌胃，每次每只1 mL；西藥對(duì)照組以暢美混懸液按0.266 g/（kg·d）劑量給藥；中藥治療組以潰結(jié)復(fù)發(fā)方按20 g/（kg·d）劑量給藥，均每天1次，共40 d。統(tǒng)計(jì)方法同上。

2.1.6 取材 分別于給藥后10 d、30 d和停藥后10 d，各組隨機(jī)取10只大鼠，以100mg/L水合氯醛（3.8mL/kg）腹腔麻醉，腹主動(dòng)脈取血，2%EDTANa2-0.7%NaCl抗凝，立即分離血漿，放-70℃冰箱保存待檢。血漿P-選擇素含量測(cè)定采用ELISA法，按試劑盒說明書操作。

2.2 各組血漿P-選擇素含量測(cè)定結(jié)果 見表2。

表2 各組UC模型大鼠血漿P-選擇素含量的比較（±s）Tab.2 Com parison of plasma P-selectin expression of rats with ulcerative colitis in differentgroups（±s）ng/L

表2 各組UC模型大鼠血漿P-選擇素含量的比較（±s）Tab.2 Com parison of plasma P-selectin expression of rats with ulcerative colitis in differentgroups（±s）ng/L

注：與正常組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01；與西藥組比較，#P<0.05。

組別 n 治療10 d 治療30 d 停藥后10 d正常組 30 0.281 0±0.099 7 0.273 4±0.099 7 0.261 3±0.099 7模型組 30 1.142 2±0.410 8**0.485 8±0.279 6* 0.430 8±0.246 7*中藥組 30 0.382 3±0.174 9▲▲ 0.258 2±0.054 9▲ 0.198 2±0.022 5#西藥組 30 0.238 0±0.089 4▲▲ 0.317 9±0.167 2▲ 0.379 8±0.056 8

結(jié)果顯示：模型組造模10 d時(shí)，P-選擇素含量明顯高于正常組（P<0.01）。中藥組治療10 d明顯低于模型組（P＜0.01）；停藥 10 d 時(shí)，低于西藥組（P<0.05）。

3 討論

潰瘍性結(jié)腸炎慢性復(fù)發(fā)型、慢性持續(xù)型與中醫(yī)之“休息痢”、“久痢”相類似；本病多是在脾胃虛弱基礎(chǔ)上，在感受外邪、飲食不節(jié)或憂思惱怒等諸多誘發(fā)因素作用下，脾虛失于健運(yùn)，運(yùn)化無權(quán)，水谷不歸正化，腸道傳導(dǎo)失司，濕熱瘀毒等病邪壅滯腸中，脂膜血絡(luò)受傷，腐敗化為膿血；濕熱瘀毒等病邪未能及時(shí)清除，腸道正常功能不能恢復(fù)，以使病情反復(fù)發(fā)作，纏綿難愈。

筆者檢測(cè)了臨床慢性復(fù)發(fā)型活動(dòng)期、慢性持續(xù)型UC患者經(jīng)治療完全緩解及有效病例71例的血漿P-選擇素水平，結(jié)果顯示活動(dòng)期UC患者血漿P-選擇素水平明顯高于正常組，提示血小板活化直接參與了UC的病理過程。復(fù)發(fā)組與未復(fù)發(fā)組血漿P-選擇素水平比較，結(jié)果顯示復(fù)發(fā)組顯著高于未復(fù)發(fā)組，提示血小板活化可能是UC復(fù)發(fā)的病理機(jī)制之一。為了探討益氣活血解毒法是否對(duì)血小板活化具有阻抑作用，檢測(cè)了治療后及隨訪時(shí)血漿P-選擇素水平，結(jié)果顯示治療后、隨訪時(shí)中藥治療組明顯低于西藥對(duì)照組。

本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)在造模第10天時(shí)模型組血漿P-選擇素水平均顯著高于正常組，之后逐漸下降，造模第40天時(shí)仍明顯高于正常組，提示造模10 d時(shí)是模型炎癥的急性期，血小板和內(nèi)皮細(xì)胞活化，介導(dǎo)炎性細(xì)胞黏附、聚集，參與急性炎癥反應(yīng)；隨著病程進(jìn)入中期（造模30 d）和緩解期（造模第40天），模型組血漿P-選擇素水平逐漸下降但并未恢復(fù)正常，說明在中期和緩解期仍存在血小板活化。以益氣活血解毒立法的中藥潰結(jié)復(fù)發(fā)方與西藥比較，可有效降低血漿P-選擇素水平，從而抑制血小板及內(nèi)皮細(xì)胞活化。

本研究以益氣活血解毒立法為主組成的中藥潰結(jié)復(fù)發(fā)方，補(bǔ)脾益氣，祛瘀行滯，清熱燥濕，能行腸胃滯氣，清化瘀毒，恢復(fù)腸道正常的通降功能，從而減少本病的復(fù)發(fā)。

[1]中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化病學(xué)分會(huì).對(duì)炎癥性腸病診斷治療規(guī)范的建議[J].中華消化雜志，2001，21（4）：236－239.

[2]鄭家駒.炎癥性腸病基礎(chǔ)與臨床[M].北京：科學(xué)出版社，2000：25.

[3]張 濤,謝建群.大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化雜志，2006，14（4）：240.

[4]宮健偉,苑述剛,阮時(shí)寶.對(duì)免疫方法制作潰瘍性結(jié)腸炎動(dòng)物模型的探討[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2005，11（2）：70.

Clinicalstudy and animalexperimenton benefiting vitalQi,activating blood flow and detoxication on plasma plateletactivation during ulcerative colitis

ANHe-jun1,WANGXin-yue2,YUMei3,etal
（1.Departmentof TCM,The306Hospitalof the PLA,Beijing100101,China;2.DepartmentofDigestion,Dongzhimen Hospitalof Beijing University of TCM,Beijing 100700,China;3.Beijing University of TCM,Beijing 100029,China）

[Objective]ToinvestigatetheinfluenceofbenefitingvitalQI,activatingblood flowand detoxicationonplasmaplateletactivation during ulcerative colitis(UC).[Methods]The study included clinical study and animalexperiment.In clinical study,90 caseswith recurrentUCwere randomlydivided into the treatmentgroup(n=45)and thecontrolgroup(n=45)according to the random table.Threemonths after treatment,the casesofcomplete remission and effective caseswere followed-up for6months(39 cases in treatmentgroup,32 in control group).The patients of treatmentgroup

medicinal decoction of TCM consisting of herbswith benefiting vital Qi,activating blood flow and detoxication;the controlgroup was treated with salazosulfapyridine.In animalexperiment,UCwas induced with TNBS in rats and then random ly divided intomodel control group,westernmedicine group,the traditional Chinesemedicine group,and normal control group.P-selectin,a specificmarker reflecting the activation level of plateletwas determined.[Results]In clinical study,before treatment the plasma P-selectin level in patientswith UCwas significantly higher than normolhealthy persons(P<0.01);the levelof P-selectin in recurrentgroup wassignificantly higher than those patientswithout recurrence(P<0.01);After treatmentand during the follow-up period the levelofplasma P-selectin in treatmentgroup wasmarkedly lower than those in controlgroup with westernmedicine(P<0.05 or P<0.01).In animalexperiment,plasma P-selectin levelofwesternmedicine group weremarkedly lower than thatof the traditional Chinesemedicinegroup 10 daysafter treatment(P<0.05).30 daysafter treatment,therewasnosignificantdifferencebetween TCM group and westernmedicine group(P>0.05）.Afterwithdrawing medicine for10 days the P-selectin level in traditional Chinesemedicine group was markedly lower than thatinwesternmedicine group(P<0.05).[Conclusion]The study shows that the Kuijiefufafang(prescription preventing recurrence of UC,PPRUC)consisting ofmedicinewith benefiting vital Qi,activating blood flow and detoxication can effectively decrease the P-selectin level compared with westernmedicine.Accordingly the activation of platelet is inhibited.Thatprobably is one of the therapeuticmechanism of PPRUC.

ulcerative colitis;against-relapse;benefiting vitalQi,activatingblood flow and detoxication;P-selectin;plateletactivation

R574.1

A

1672-1519(2011)04-0281-03

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（NO.30572390）。

安賀軍（1969-），女，博士，主治醫(yī)師，中醫(yī)內(nèi)科學(xué)專業(yè)。

王新月。

2011-02-26）