池浩波， 張夢虹， 李國毅， 黃冬梅

(廣東省潮州市藥品檢驗(yàn)所，廣東潮州 521011)

我國地理緯度跨度大，高寒、高濕地區(qū)多，特別是少數(shù)民族居住的氣候條件惡劣的山區(qū)。同時，我國農(nóng)村人口較多，聚居及生活工作在高寒、高濕環(huán)境，感受風(fēng)寒濕三氣的機(jī)會較多，因此具有較高的風(fēng)濕病發(fā)病率［1］。

千百年來，人們一直同風(fēng)濕病進(jìn)行頑強(qiáng)的斗爭，積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)，經(jīng)過數(shù)千年的探索和實(shí)踐，中醫(yī)對風(fēng)濕病的認(rèn)識、治療得到進(jìn)一步的發(fā)展，并形成了系統(tǒng)的中醫(yī)風(fēng)濕病學(xué)理論，中成藥是由中草藥直接加工而成，方便病人服用，在規(guī)定的劑量內(nèi)中藥副作用少，但中藥的藥性緩和，所以藥效也比化學(xué)藥(俗稱西藥)要慢一些。西藥療效較為明顯，但同時副作用也比中藥大一些，因此大多數(shù)西藥都不適合長期服用，必須在醫(yī)生的指導(dǎo)下服用［2］。

由于用于治療風(fēng)濕疾病的化學(xué)藥雙氯芬酸鈉價格低廉，且有一定的控制風(fēng)濕性和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的功效。為了迎合患者既想快速治療風(fēng)濕疾病又想副作用小的心理，近年來雙氯芬酸鈉屢被一些不法商家加入到治療風(fēng)濕、類風(fēng)濕疾病的中成藥和保健食品中，并被標(biāo)榜為所謂的“祖?zhèn)髅胤健?、“純中藥制劑”或“天然食品”，以增?qiáng)其療效，從中牟取暴利?；颊咴诓恢榈那闆r下服用了含有雙氯芬酸鈉的中成藥或保健食品后，癥狀看似緩解了，認(rèn)為有“療效”，其實(shí)往往會掩蓋病情，有可能產(chǎn)生嚴(yán)重的后果，危害身體健康，如長期口服非甾體抗炎藥的患者中，大約有10% ～25%的病人發(fā)生消化性潰瘍，嚴(yán)重的并發(fā)癥會導(dǎo)致出血或穿孔;能導(dǎo)致10%的患者出現(xiàn)肝臟輕度受損的生化異常;可引起尿蛋白、管型，尿中可出現(xiàn)紅、白細(xì)胞等，嚴(yán)重者可引起間質(zhì)性腎炎等;有的會造成骨質(zhì)疏松或肌肉萎縮等嚴(yán)重不良反應(yīng)，使得病情惡化，甚至導(dǎo)致癱瘓［3］。

為了凈化我國的藥品市場，打擊不法分子的囂張氣焰，保護(hù)廣大人民群眾的身體健康，本實(shí)驗(yàn)建立一種簡單、快速、高效、可靠的篩查方法，以滿足基層藥品現(xiàn)場打假的需求。

1 擬定快速篩查方法的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1.1 取樣量 各種口服制劑均取一次服用量，片劑可壓碎或剪碎(紅色糖衣片應(yīng)除去糖衣);膠囊劑取內(nèi)容物;丸劑研碎或剪碎;口服液直接取服用量;酊劑取約1 mL。

1.2 供試液的制備 取經(jīng)壓碎或剪碎的一次服用量固體樣品于20 mL具塞試管中，加入乙醇約10 mL，密塞，上下強(qiáng)烈振搖約1 min，濾過，取續(xù)濾液約1 mL作為供試液。

1.3 檢驗(yàn)方法與結(jié)果判斷 在供試液中加入40%硝酸溶液約1 mL(注意加入硝酸溶液時不要振搖)，約40～50 s后檢視，如試管下部顯紅棕色，則可判斷供試品中含有雙氯芬酸鈉;如試管下部不變色或顏色變淺，則不含雙氯芬酸鈉。

2 確證方法 采用薄層色譜法和高效液相色譜法。

2.1 薄層色譜法 取一次服用量的樣品于具塞錐形瓶中，加乙醇10 mL，振搖提取1 min，濾過，濾液作為供試品溶液;另取雙氯芬酸鈉對照品適量，加乙醇制成每1 mL含2.5 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010版附錄Ⅵ B)試驗(yàn)［4］，分別吸取上述兩種溶液各 1 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254板上，以乙酸乙酯－乙醇(15∶5)為展開劑［5］，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。見圖1。

圖1 TLC薄層鑒別色譜圖

2.2 高效液相色譜法

2.2.1 檢測波長的選擇 精密稱取雙氯芬酸鈉對照品適量，加甲醇制成每1 mL中含雙氯芬酸鈉約10 μg的溶液，于400～190 nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果在204.4 nm與281.2 nm的波長處有最大吸收，參考有關(guān)文獻(xiàn)［6］，故選擇281 nm作為本品的檢測波長。

2.2.2 色譜條件和系統(tǒng)適應(yīng)性 參考有關(guān)文獻(xiàn)［6－7］，采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充柱的色譜柱，以二極管陣列式檢測器(DAD)為檢測器，以甲醇－0.2%冰乙酸溶液(3∶2)為流動相，檢測波長為281 nm，進(jìn)樣量為10 μL，雙氯芬酸鈉的理論塔板數(shù)不低于10 000，與其它色譜峰的分離度大于1.5。

2.2.3 對照品溶液的制備 精密稱取雙氯芬酸鈉對照品約15 mg，置100 mL量瓶中，加適量甲醇振搖使溶解，加甲醇至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.2.4 供試品溶液的制備 若供試品為片劑(如糖衣片應(yīng)去糖衣)，稱量后研磨粉碎，然后稱取一次服用量的樣品，置100 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲處理10 min，放冷至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻;若供試品為膠囊劑，取出內(nèi)容物研磨粉碎，然后稱取一次服用量的樣品，置100 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲處理10 min，放冷至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻;若供試品為丸劑，稱量后研碎或剪碎，然后稱取一次服用量的樣品，置100 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲處理10 min，放冷至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻;若供試品為口服液，直接量取一次服用量的樣品，置100 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻;若供試品為酊劑，直接量取約1 mL的樣品，置100 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲處理10 min，放冷至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。

上述溶液經(jīng)微孔濾膜過濾后，分別吸取10 μL，注入液相色譜儀，若供試品色譜峰保留時間與雙氯芬酸鈉對照品色譜峰的保留時間一致，且供試品溶液與對照品溶液具有相同的紫外光譜圖，則初步確證供試品中含有雙氯芬酸鈉。HPLC－DAD 圖譜見圖2～5。

圖2 雙氯芬酸鈉對照品HPLC圖譜

圖3 陽性樣品HPLC圖譜

圖4 雙氯芬酸鈉對照品DAD圖譜

圖5 陽性樣品DAD圖譜

3 結(jié)果確證

根據(jù)廣東省藥品檢驗(yàn)所制訂的《中成藥和保健食品中擅自添加化學(xué)成分的快速篩查方法指導(dǎo)原則與技術(shù)要求(試行)》的要求對快速篩查方法總結(jié)見表1。

表1 快速篩查方法總結(jié)

可以看出，本快速篩查方法操作簡單、專屬性強(qiáng)、靈敏度高、準(zhǔn)確度高，不需要專門的設(shè)備，適合于現(xiàn)場操作，能滿足基層監(jiān)督檢驗(yàn)需要。

4 討論

4.1 A試液為乙醇，B試液為40%硝酸溶液，選用乙醇作為化學(xué)溶劑，是因?yàn)殡p氯芬酸鈉的溶解性，選擇40%硝酸溶液作為顯色劑是因?yàn)殡p氯芬酸鈉能在稀硝酸溶液中發(fā)生硝化作用，生成紅棕色物質(zhì)。

4.2 有些中成藥或保健品，本身有較深的顏色，采用該方法不會影響判斷結(jié)果，如果含有雙氯芬酸鈉，則顏色更深，如果不含雙氯芬酸鈉，則顏色不變或變淺。

［1］張鐵軍.抗風(fēng)濕中草藥(彩色圖譜)［M］.北京:中國中醫(yī)藥出版社，1997.

［2］劉 利.非甾體抗炎藥的不良反應(yīng)機(jī)制及用藥安全［J］.中國實(shí)用醫(yī)藥，2008，34(3):201－202.

［3］黃玉蘭.中成藥中非法添加化學(xué)藥成分的危害［EB/OL］.四川省食品藥品監(jiān)督管理局網(wǎng)站，2007－11－28［2010－03－12］.http://www.scfda.gov.cn/CL0206/9254.html

［4］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:2010年版一部［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄ⅥB.

［5］呂長淮.雙氯芬酸鈉腸溶片薄層色譜鑒別方法的改進(jìn)［J］.安徽醫(yī)藥，2006，10(5):344.

［6］鄭 凱.HPLC法測定雙氯芬酸鈉腸溶片的含量［J］.西北藥學(xué)雜志，2005，20(1):5－6.

［7］閆韶華.HPLC法測定雙氯芬酸鈉腸溶片的含量及含量均勻度［J］.數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志，2009，22(6):723－725.