李啟艷， 朱日然， 徐麗華

(1.山東省藥品檢驗(yàn)所，山東 濟(jì)南 250010;2.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，山東濟(jì)南 250012)

銀屑顆粒由土茯苓、菝葜兩味藥組成，具有祛風(fēng)解毒的功效，臨床用于治療銀屑病。研究表明，土茯苓和菝葜均含有落新婦苷，為了確保藥品的安全有效，我們采用高效液相色譜法對(duì)落新婦苷進(jìn)行定量測(cè)定［1-4］。

1 儀器與試藥

島津UV-2550紫外分光光度計(jì)，Mettler AE240電子天平，Agilent1200高效液相色譜儀。落新婦苷對(duì)照品，煙臺(tái)大學(xué)提供，供定量測(cè)定用。銀屑顆粒，山東魯泰環(huán)中制藥有限公司生產(chǎn)(批號(hào):100401、100402、100403);甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法

2.1 色譜條件［5-6］色譜柱 Kromasil C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流動(dòng)相 甲醇-0.1%磷酸(25 ∶75)，體積流量1 mL/min;柱溫35℃;檢測(cè)波長(zhǎng)291 nm。理論板數(shù)按落新婦苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。采用此色譜條件，供試品及對(duì)照品色譜分離度良好，見(jiàn)圖1、2。

圖1 落新婦苷對(duì)照品HPLC色譜圖

2.2 方法與結(jié)果

2.2.1 線性關(guān)系的考察 精密稱取落新婦苷對(duì)照品9.47 mg，加60%甲醇溶解并稀釋至100 mL，搖勻，作為對(duì)照品溶液(落新婦苷質(zhì)量濃度為0.094 7 mg/mL)。

圖2 供試品HPLC色譜圖

分別精密吸取上述對(duì)照品溶液各 2、4、8、12、16、20 μL，注入液相色譜儀，分別測(cè)定峰面積積分值。以落新婦苷對(duì)照品的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=2 276.444 0X+21.119 5，相關(guān)系數(shù)r=1.000 0。表明落新婦苷進(jìn)樣量在 0.189 4 ～1.894 0 μg之間與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.2.2 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取上述對(duì)照液10 μL，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，按上述測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果落新婦苷峰面積積分值的RSD為0.43%，表明儀器精密度良好。

2.2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物(山東魯泰環(huán)中制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào):100401)，研細(xì)，取約1.0 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入60%甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，加熱回流1 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用60%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

精密吸取上述供試品溶液10 μL，每隔2 h進(jìn)樣一次，測(cè)定落新婦苷的峰面積積分值，共考察8 h，以觀察樣品溶液在檢測(cè)過(guò)程中待測(cè)成分的穩(wěn)定性，結(jié)果RSD為0.08%，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好，能夠滿足測(cè)定需要。

2.2.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物(山東魯泰環(huán)中制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào):100401)，研細(xì)，取約1.0 g，共取5份，按樣品測(cè)定項(xiàng)下的供試品溶液的制備方法，分別制得供試品溶液。按上述測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算落新婦苷的量，結(jié)果平均含落新婦苷為14.2 mg/袋，RSD為1.11%，表明本品測(cè)定方法的重復(fù)性良好。

2.2.5 回收率試驗(yàn) 對(duì)照品貯備液的制備 精密稱取落新婦苷對(duì)照品13.45 mg，置100 mL量瓶中，加60%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(落新婦苷質(zhì)量濃度為0.134 5 mg/mL)。

取已測(cè)定的裝量差異項(xiàng)下本品內(nèi)容物(山東魯泰環(huán)中制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào):100401，平均裝量:5.958 6 g，含落新婦苷為14.2 mg/袋)，研細(xì)，取約 0.5 g，精密稱定，共取 5份，置圓底燒瓶中，精密加入落新婦苷對(duì)照品貯備液(落新婦苷對(duì)照品質(zhì)量濃度為0.134 5 mg/mL)10 mL，再精密加入60%甲醇15 mL，按樣品測(cè)定項(xiàng)下的供試品溶液的制備方法，制得供試品溶液。照上述測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果表明，本方法的回收率良好。

3 樣品的測(cè)定

取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物，研細(xì)，取約1.0 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入60%甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，加熱回流1 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用60%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。進(jìn)樣10 μL。3批樣品測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 落新婦苷加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2 樣品測(cè)定結(jié)果

根據(jù)上述測(cè)定結(jié)果，暫定本品每袋含土茯苓、菝葜以落新婦苷(C21H22O11)計(jì)，不得少于11.4 mg。

4 討論［7-10］

4.1 取落新婦苷對(duì)照品溶液，在200～400 nm之間進(jìn)行掃描，結(jié)果落新婦苷在201 nm、291 nm處有吸收峰，其中291 nm處吸收最大，故選用291 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

4.2 考察了超聲提取和回流提取兩種方法，并考查了提取時(shí)間對(duì)含量的影響，結(jié)果加熱回流提取效果優(yōu)于超聲提取。且回流提取1 h和1.5 h含量結(jié)果一致，表明回流提取1 h落新婦苷已基本提取完全，因此確定提取方法為:樣品加熱回流提取1 h。

4.3 考察了60%甲醇、50%乙醇、甲醇3種溶劑，結(jié)果甲醇回流提取量最低，為7.2 mg/袋;60%甲醇與50%乙醇提取量接近，分別為14.1 mg/袋和13.8 mg/袋。但50%乙醇與流動(dòng)相組成相差較大，色譜峰峰形較差，故確定60%甲醇為提取溶劑。

4.4 原計(jì)劃對(duì)樣品中薯蕷皂苷元進(jìn)行定量測(cè)定，但是通過(guò)試驗(yàn)和查閱相關(guān)資料發(fā)現(xiàn)，根據(jù)2005年版《中國(guó)藥典》收載的方法對(duì)菝葜藥材中薯蕷皂苷元進(jìn)行定量測(cè)定，很難檢出薯蕷皂苷元，即使檢出也很難達(dá)到現(xiàn)行《中國(guó)藥典》規(guī)定的要求(不低于0.04%)，而所檢藥材均為正品。因此未建立薯蕷皂苷元的定量測(cè)定方法。

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