譚 穎，史姚平，劉 琳，趙 瑛

(哈爾濱商業(yè)大學藥學院，哈爾濱 150076)

葛根芩連湯出自張仲景《傷寒論·太陽篇》，由葛根、黃芩、黃連、甘草4味藥組成，是中藥治療急性腹瀉的經典方劑［1］.現(xiàn)代藥理研究表明葛根芩連湯具有抗心律失常、抗缺氧、抑制代謝綜合癥等藥理作用［2］.近年來有研究表明葛根芩連湯可以治療肺源性心臟?。?］.大量研究表明當中藥復方的物質基礎發(fā)生變化時，其藥理作用可能隨之改變.本實驗通過觀察葛根芩連湯與其有效部位群對大鼠離體心臟的作用，探討制備工藝不同方劑作用的差異.

1 實驗材料

1.1 實驗動物

健康成年SD大鼠，雌雄各半，體重300～350 g，由黑龍江中醫(yī)藥大學動物研究室提供(合格證號:00102006)

1.2 儀器

分析天平ALC－1104:德國賽多利斯集團;Langendorff離體心臟灌流實驗儀LE 05.200:Panlab s.l.;生物機能實驗系統(tǒng) BL－420E:成都泰盟科技有限公司.

1.3 藥品

葛根芩連湯與其有效部位群由哈爾濱商業(yè)大學藥學院提供(其中有效部位群總黃酮、總生物堿含量大于 52%).K－H 液:NaCl 120、KCl 4.63、CaC121.25、KH2PO41.17、MgS041.20、NaHCO320、Glucose 8.用雙蒸水分別完全溶解后，依次轉移到1 L容量瓶中，定容，搖勻過濾備用.

1.4 試劑

肝素:北京奧博星生物技術有責任限公司，批號:20060831;水合氯醛:中國五聯(lián)化工廠，批號:20020509;1，2－丙二醇:中國山海試劑總廠，批號:20030106;95%O2+5%CO2混合氣:哈爾濱黎明氣體有限公司.

2 實驗方法

2.1 離體心臟模型的建立

參考《藥理實驗方法學》［4］制備 Langendorff離體心臟:實驗動物稱重后，10%水合氯醛3mL/kg麻醉.l 0min后仰臥固定于操作臺.立即開胸，暴露心臟，破心包，游離左右肺葉，從主動脈弓處剪斷主動脈，摘取心臟，用預先(體積分數(shù)95%O2+5%CO2)氧飽和的4℃的K－H液迅速沖洗后，立即移入裝有氧飽和的4℃ K－H溶液的平皿中.修剪心臟周圍組織，找出主動脈，沿主動脈向上1 cm處剪斷主動脈，于液面下行主動脈插管，絲線結扎固定.80 cm水柱恒壓、37℃灌注，當心臟示射血動作后，于肺動脈起始部與右室圓錐部之間剪一個小口.剪掉左心耳，將制備好的水囊插入左心室，充水調節(jié)壓力至0.532～1.064 kPa.

2.2 分組與給藥

將大鼠離體心臟模型隨機分成K－H對照組、丙二醇對照組、葛根芩連湯(G)和葛根芩連湯有效部位群(GQ)組，G和GQ分設5個劑量組，分別為G50、GQ50(50 g生藥/L 組)，G25、GQ25(25 g生藥/L 組)，G12.5、GQ12.5(12.5 g生藥/L 組)，G6.25、GQ6.25(6.25 g 生藥/L 組)，G3.125、GQ3.125(3.125 g生藥/L 組)，每組6只.

給藥方法:將溶于體積分數(shù)1%丙二醇的藥物按給藥質量濃度稀釋到K－H液中，80 cm水柱恒壓灌流離體心臟.

2.3 統(tǒng)計方法

采用SPSS 16.0 For Windows統(tǒng)計軟件進行處理.用平均值±標準差()表示，給藥前后比較采用配對t檢驗，組間比較方差齊采用t值簡法檢驗，方差不齊采用校正t值法.P＜0.05說明有顯著性差異，P＜0.01說明有非常顯著性差異.

3 實驗結果

實驗結果表明:K－H和丙二醇對照組HR、LVSP、+dp/dtm變化較給藥前均無顯著性差異(P＞0.05);GQ50 組給藥后 HR、LVSP、+dp/dtm 顯著降低(P ＜0.01，P ＜0.05);GQ25 組、GQ12.5 組和GQ6.25組給藥后HR降低，LVSP、+dp/dtm升高，較給藥前有顯著性差異(P＜0.01，P＜0.05);G50組和G25組給藥后HR降低，較給藥前有顯著性差異(P＜0.01，P＜0.05);G50組給藥后 LVSP顯著升高(P＜0.05).GQ50與 G50比較，對 HR、LVSP、+dp/dtm的作用更為顯著(P＜0.05);其他同等劑量情況下，GQ對心臟的作用稍強于G，但無顯著性差異(P ＞0.05).見表1.

表1 葛根芩連湯與其有效部位群對大鼠離體心臟HR、LVSP、+dp/dtm影響(次/min，n=6)

表1 葛根芩連湯與其有效部位群對大鼠離體心臟HR、LVSP、+dp/dtm影響(次/min，n=6)

注:*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01 與給藥前比較;▲P ＜0.05，▲▲P ＜0.01與同等劑量葛根芩連湯組比較

實驗結果表明，K－H和丙二醇對照組CF、LVEDP、－dp/dtm變化較給藥前均無顯著性差異(P＞0.05);GQ50組給藥后CF、－dp/dtm顯著降低，LVEDP顯著升高(P＜0.01，P＜0.05);GQ25組、GQ12.5組和 GQ6.25 組給藥后 LVEDP 降低，CF、－dp/dtm升高，較給藥前有顯著性差異(P＜0.01，P＜0.05);G50組和 G25組給藥后 LVEDP降低，CF、－dp/dtm升高，較給藥前有顯著性差異(P＜0.01，P ＜0.05).GQ50 與 G50 比較，對 CF、LVEDP、－dp/dtm的作用更為顯著(P＜0.05);其他同等劑量情況下，GQ對心臟的作用稍強于G，但無顯著性差異(P ＞0.05).結果見表2.

表2 葛根芩連湯與其有效部位群對大鼠離體心臟CF、LVEDP、－dp/dtm影響(次/min，n=6)

表2 葛根芩連湯與其有效部位群對大鼠離體心臟CF、LVEDP、－dp/dtm影響(次/min，n=6)

注:*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01 與給藥前比較;▲P ＜0.05，▲▲P ＜0.01與同等劑量葛根芩連湯組比較

4 討論

1)溶媒的選取:丙二醇是無色澄明黏稠液體，與水、乙醇、甘油相混溶，但不能與脂肪相混溶.性質穩(wěn)定，高溫下(250℃以上)可被氧化.預實驗發(fā)現(xiàn)體積分數(shù)10%、5%丙二醇K－H液對大鼠離體心臟有較明顯的降低左心室內壓作用，體積分數(shù)1%丙二醇K－H液雖也有弱的一過性降低左心室內壓作用，但很快就恢復給藥前的水平.故在實驗中選取1%丙二醇溶解藥物.實驗結果顯示，體積分數(shù)1%丙二醇對 HR、LVSP、LVEDP、+dpdtm、－dpdtm和CF的改變均無顯著性(P＞0.05)，說明體積分數(shù)1%丙二醇的K－H液對大鼠離體心臟的血流動力學的改變不影響試驗結果.

2)葛根芩連湯與其有效部位群對大鼠離體心臟的影響:心臟的泵血功能取決于心肌的收縮性能以及前負荷和后負荷等指標.葛根芩連湯和低劑量的葛根芩連湯有效部位群可以使+dp/dtm升高，提示葛根芩連湯可以增強心肌收縮性能.這與降低LVEDP結果相符，LVEDP降低說明左室收縮加強或回心血量減少.此結果提示葛根芩連湯及有效部位群可以增強心功能，具有正性肌力、負性頻率作用，同時可能通過擴張冠脈和降低HR而增加舒張期時間、減少心肌收縮對冠脈的擠壓而增加冠脈流量.

3)葛根芩連湯與其有效部位群作用的比較:葛根芩連湯有效部位群是經溶媒提取，大孔吸附樹脂富集有效成分制得，而葛根芩連湯是傳統(tǒng)煎煮而得.有研究表明方劑制備工藝不同，有效成分的含量和配比可能不同［5－6］，藥理作用也必定存在差異.通過本實驗研究可以看出葛根芩連湯有效部位群的藥理作用要強于同等劑量葛根芩連湯組，其藥理作用與葛根芩連湯高一劑量基本相當.

葛根芩連湯有效部位群最高劑量對心臟的作用與低劑量相反.導致這一結果的原因可能與葛根芩連湯的主要成分之一為小檗堿有關.有研究表明，小檗堿對心肌收縮力的影響具有小劑量增強、大劑量抑制的雙向特征［7］.

［1］王 立.經典方劑葛根芩連湯研究現(xiàn)狀［J］.黑龍江醫(yī)藥，2009，22(2):172－173.

［2］趙 瑛，李文亭，孟曉紅，等.葛根芩連湯及有效部位群對代謝綜合征大鼠作用的比較［J］.中藥藥理與臨床，2009，25(4):7－10.

［3］徐忠正.葛根芩連湯辨治肺原性心臟?。跩］.中醫(yī)雜志，2001，42(10):636.

［4］徐叔云，卞如濂，陳 修.藥理實驗方法學［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2006.

［5］UMBREIT J.Iron deficiency:a concise review［J］.Am J Hematol.，2005，78(3):225－31.

［6］任美容，趙 瑛，凌 勇.中藥復方不同提取方法藥效成分動態(tài)變化研究［J］.中醫(yī)藥學報，2010，38(3):80－84.

［7］張曉丹，任宏敏，劉 琳.小檗堿對DHF大鼠血流動力學和心肌細胞內鈣離子質量濃度的影響［J］.中國中藥雜志，2008.33(7):818－821.