茍顯娜，彭成，王忠，劉建林

記憶障礙(Impaired Memory)，指個人處于一種不能記住或回憶信息或技能的狀態(tài)，有可能是由于病理生理性的或情境性的原因引起的永久性或暫時性的記憶障礙。

腦絡(luò)舒寧膠囊是王永炎院士提出的臨床應(yīng)用的有效方，由女貞子、墨旱蓮等中藥組成，具有滋腎平肝、理氣活絡(luò)的功效。本文通過制作經(jīng)典記憶障礙動物模型，探討腦絡(luò)舒寧膠囊對記憶獲得、鞏固、再現(xiàn)缺失障礙動物模型的智力影響。

1 實驗材料

1.1 實驗動物

SD大鼠，普通級，雌雄各半，體重（240±20）g；昆明種小鼠，普通級，雌雄各半，體重18～22g，由成都中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物研究中心提供，動物質(zhì)量合格證號：SCXK（川）2008-11。

1.2 藥品與試劑

受試藥物 腦絡(luò)舒寧膠囊浸膏粉，由北京陽光合和中醫(yī)藥科技有限公司提供。批號：100401；浸膏粉1 g相當(dāng)于原生藥3.833 g。試驗設(shè)低、中、高三個劑量組，試驗前用蒸餾水分別配制成0.067 gmL-1、0.133 gmL-1、0.266 gmL-1藥液備用。陽性藥物：甲磺酸雙氫麥角毒堿片（喜得鎮(zhèn)），由天津華津制藥廠和瑞士諾華制藥有限公司聯(lián)合生產(chǎn)，生產(chǎn)批號：9J856T。規(guī)格：1 mg/片。用蒸餾水配制成0.2 mgmL-1藥液，4℃冷藏備用。

造模藥物 氫溴酸東莨菪堿，由SIGMA公司生產(chǎn)，批號：648K1200；臨用時用0.9%生理鹽水配成0.5 mgmL-1溶液備用。亞硝酸鈉，成都市科龍化工試劑廠生產(chǎn)，批號：20070717，臨用時用0.9%生理鹽水配成6 mgmL-1備用。環(huán)己酰亞胺，由SIGMA公司生產(chǎn)，批號030M1524，臨用時用0.9%生理鹽水配成6 mgmL-1藥液備用。酒精，75%酒精，由成都蜀都實業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號20100402，臨用時配成40%的藥液，備用。

1.3 主要儀器

YLS-3TB小鼠跳臺儀；MT-200Morris型水迷宮跟蹤分析系統(tǒng)；BA-200自動避暗測試儀。

2 實驗方法

2.1 大鼠、小鼠記憶獲得障礙試驗

取健康、合格普通級SD大鼠60只，按體重隨機(jī)分為空白組、模型對照組、喜得鎮(zhèn)組、腦絡(luò)舒寧膠囊高、中、低劑量組；取健康、合格普通級KM小鼠72只，分組方法同上。喜得鎮(zhèn)組及腦絡(luò)舒寧膠囊各劑量組灌胃相對應(yīng)藥液10 mLkg-1，空白組及模型對照組灌胃等體積蒸餾水，1次/d，SD大鼠連續(xù)灌胃30 d；小鼠連續(xù)灌胃14 d。末次給藥后1 h，除空白組外，其他各組大鼠腹腔注射氫溴酸東莨菪堿5 mgkg-1，造成記憶獲得障礙模型[1]，對照組注射等體積生理鹽水。造模20 min后用跳臺法進(jìn)行訓(xùn)練，記錄大鼠從平臺跳下的潛伏期和5 min內(nèi)跳下次數(shù)（錯誤次數(shù)）作為記憶指標(biāo)。

2.2 大鼠記憶鞏固障礙試驗

亞硝酸鈉所致記憶鞏固障礙模型：取健康、合格SD大鼠66只，按體重隨機(jī)分為空白組、喜得鎮(zhèn)組、腦絡(luò)舒寧膠囊高、中、低劑量組；取健康、合格SD大鼠60只，分組方法同上。喜得鎮(zhèn)組和腦絡(luò)舒寧膠囊各劑量組灌胃相應(yīng)藥液10 mLkg-1，空白組及模型對照組灌胃等體積蒸餾水，1次/d，分別連續(xù)灌胃21 d和14 d。亞硝酸鈉：在給藥的第17d，用MT-200 Morris水迷宮跟蹤分析系統(tǒng)行定位航行訓(xùn)練[2]，末次訓(xùn)練結(jié)束后，除空白組外，各組動物立即一次性腹腔注射亞硝酸鈉120 mgkg-1，造成記憶鞏固障礙模型；空白組注射等體積生理鹽水。24 h后進(jìn)行定位航行測試，于定位航行試驗結(jié)束24 h后，進(jìn)行空間搜索測試。環(huán)己酰亞胺所致記憶鞏固障礙模型：末次訓(xùn)練結(jié)束后，除空白組外，其他各組大鼠立即腹腔注射環(huán)己酰亞胺120 mgkg-1，造成記憶鞏固障礙模型，空白組注射等體積生理鹽水。造模24 h后，用跳臺法進(jìn)行測試，記錄大鼠跳臺潛伏期和5 min內(nèi)錯誤反應(yīng)次數(shù)。

2.3 小鼠記憶再現(xiàn)缺失障礙試驗

取健康、合格昆明種小鼠66只，按體重隨機(jī)分為空白組、喜得鎮(zhèn)組、腦絡(luò)舒寧膠囊高、中、低劑量組。喜得鎮(zhèn)組及腦絡(luò)舒寧膠囊各劑量組灌胃相對應(yīng)藥液10 mLkg-1，空白組及模型對照組灌胃等體積蒸餾水，1次/d，連續(xù)灌胃14 d。末次給藥24 h后，除空白組外，其它各組灌胃40%的酒精10 mLkg-1，造成記憶再現(xiàn)缺失模型[5]，空白組灌胃等體積蒸餾水。造模20 min后進(jìn)行避暗測試，記錄小鼠的錯誤潛伏期和5 min內(nèi)從明區(qū)到暗區(qū)的錯誤次數(shù)。

2.4 結(jié)果統(tǒng)計

以上數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件包建立實驗結(jié)果數(shù)據(jù)庫并進(jìn)行分析，以（x±SD）表示各定量指標(biāo)的平均值和分散程度。多樣本均數(shù)的比較采用oneway ANOVA分析。

3 實驗結(jié)果

3.1 腦絡(luò)舒寧膠囊對大鼠、小鼠記憶獲得障礙的影響

經(jīng)訓(xùn)練，大鼠跳臺潛伏期均達(dá)標(biāo)；小鼠跳臺淘汰1只動物。與空白組比較，模型對照組大鼠、小鼠潛伏期明顯縮短，觸電錯誤次數(shù)明顯增多，有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。結(jié)果詳見表1、2。

表1 腦絡(luò)舒寧膠囊對東莨菪堿致記憶獲得障礙大鼠的影響(x±SD)

表2 腦絡(luò)舒寧膠囊對東莨菪堿致記憶獲得障礙小鼠跳臺法測試的影響(x±SD)

注：與空白組比較，△△P <0.01；與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01

3.2 腦絡(luò)舒寧膠囊對大鼠記憶鞏固障礙的影響

3.2.1 對大鼠亞硝酸鈉致記憶鞏固障礙模型的影響 經(jīng)訓(xùn)練，從喜得鎮(zhèn)組和腦絡(luò)舒寧膠囊中劑量組淘汰有明顯認(rèn)知障礙的大鼠2只，其余大鼠進(jìn)入正常試驗。結(jié)果：定位航行測試：模型對照組大鼠逃避潛伏期明顯延長，到達(dá)平臺的總路程明顯增加，同時在第二象限的距離明顯增加，與空白組比較具有顯著性差異（P<0.05或P<0.01）。空間搜索測試：與空白組比較，模型對照組平臺停留時間明顯縮短，有效區(qū)停留距離明顯縮短，經(jīng)過平臺的次數(shù)明顯減少，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。結(jié)果詳見表3、4。

表3 腦絡(luò)舒寧膠囊對亞硝酸鈉記憶鞏固障礙大鼠定位航行測試的影響 （x±SD）

表4 腦絡(luò)舒寧膠囊對亞硝酸鈉記憶鞏固障礙大鼠空間搜索測試的影響 （x±SD）

3.2.2 對大鼠環(huán)己酰亞胺致記憶鞏固障礙模型的影響 經(jīng)訓(xùn)練，所有動物均達(dá)標(biāo)。與空白組比較，模型對照組大鼠潛伏期明顯縮短，觸電錯誤次數(shù)增多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。結(jié)果詳見表5。

表5 腦絡(luò)舒寧膠囊對環(huán)己酰亞胺記憶鞏固障礙大鼠跳臺法測試的影響 （x±SD）

3.3 腦絡(luò)舒寧膠囊對小鼠記憶再現(xiàn)缺失障礙的影響

經(jīng)訓(xùn)練，腦絡(luò)舒寧膠囊中劑量組1只動物不達(dá)標(biāo)被淘汰。經(jīng)灌胃40%酒精后，模型對照組小鼠避暗潛伏期明顯縮短，5 min內(nèi)錯誤次數(shù)明顯增加，與空白組比較有顯著性差異（P＜0.01）。結(jié)果詳見表6。

表6 腦絡(luò)舒寧膠囊對酒精致記憶再現(xiàn)缺失小鼠避暗測試的影響（x±SD）

4 討論及結(jié)論

學(xué)習(xí)和記憶是動物和人類賴以生存的重要腦功能。記憶，是使貯存于腦內(nèi)的信息復(fù)呈于意識中的功能，是保存和回憶以往經(jīng)驗的過程。人類的記憶是一個相當(dāng)復(fù)雜的過程，有三個基本過程：即獲得、鞏固、再現(xiàn)[3]。東莨菪堿是M-膽堿受體阻斷劑，能特異性阻抑信息由第1級記憶向第2級記憶的轉(zhuǎn)移過程，從而干擾獲得近期記憶的能力，制造的記憶障礙模型屬于記憶獲得性障礙[4]。腦組織的缺血缺氧會嚴(yán)重影響動物的學(xué)習(xí)記憶功能，亞硝酸鈉為致缺氧劑，它可使血液中的低鐵血紅蛋白氧化成高鐵血紅蛋白，失去運輸氧的能力而導(dǎo)致組織缺氧，進(jìn)而引起腦組織缺血缺氧，損害學(xué)習(xí)和記憶過程。蛋白質(zhì)合成是長期記憶的內(nèi)在基礎(chǔ)，在學(xué)習(xí)過程中形成的新蛋白質(zhì)是記憶的存貯分子，反之，抑制蛋白質(zhì)合成40%即能引起遺忘[5]；環(huán)己酰亞胺作為蛋白抑制劑能明顯損害動物的學(xué)習(xí)記憶能力。乙醇作為中樞抑制劑，較低濃度下（40%）即可明顯破壞記憶過程，而對中樞和一般運動功能無明顯影響[5]。本試驗在用上述藥物造模后，模型組大、小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力明顯弱于正常組，說明本試驗的造模方法是可取的，造模是成功的。

腦絡(luò)舒寧膠囊是王永炎院士提出的臨床應(yīng)用的有效方，由女貞子、墨旱蓮等中藥組成，具有滋腎平肝、理氣活絡(luò)的功效。本試驗中，腦絡(luò)舒寧膠囊能夠顯著延長記憶獲得障礙大、小鼠的跳臺潛伏期，減少5 min內(nèi)錯誤次數(shù)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05，P<0.01）；明顯縮短亞硝酸鈉所致記憶鞏固障礙大鼠定位航行測試的逃避潛伏期，縮短到達(dá)平臺的總路程，增加空間搜索測試2min內(nèi)經(jīng)過平臺次數(shù)和有效區(qū)停留距離，延長平臺停留時間，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05，P<0.01）；顯著延長環(huán)己酰亞胺所致記憶障礙大鼠的跳臺潛伏期和減少5min內(nèi)的錯誤次數(shù)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05，P<0.01）；明顯延長記憶再現(xiàn)缺失小鼠潛伏期和5min內(nèi)進(jìn)入暗區(qū)的錯誤次數(shù)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05，P<0.01）。以上結(jié)果提示：腦絡(luò)舒寧膠囊可能具有膽堿能樣作用，改善腦部缺血缺氧，改善中樞抑制以及增加腦內(nèi)蛋白質(zhì)合成，從而發(fā)揮其益智作用。結(jié)論：腦絡(luò)舒寧膠囊具有較好的益智作用。

[1] 徐淑云,卞如濂,陳修.藥理實驗方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2001:826.

[2] 陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2006:739.

[3] 曾錦旗,董為偉.記憶障礙動物模型研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代康復(fù),2001,5(10):74.

[4] 鄒宇曉,廖森泰,吳娛明,等.金針菇多糖提取物對記憶障礙 模型大鼠、小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響[J].中國食品學(xué)報,2010,10(1):28.

[5] 陳玉興,周瑞玲,崔景朝,等.益智湯對三種化學(xué)藥品所致小鼠記憶損傷的影響[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2006,12(1):43.