徐禮通

解放軍第一六一醫(yī)院（湖北武漢430010）

肝性腦?。℉E）又稱肝昏迷，是指肝臟功能嚴(yán)重障礙引起的以代謝紊亂為基礎(chǔ)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能失調(diào)綜合征，是慢性肝病及嚴(yán)重肝病患者常見的并發(fā)癥和死亡原因，病死率高達(dá)60%～80%［1］。筆者臨床運(yùn)用生大黃泡服或者保留灌腸能顯著提高慢性重型肝炎患者的存活率，并能預(yù)防HE的發(fā)生。本研究觀察生大黃對實(shí)驗性大鼠HE模型的影響，為臨床運(yùn)用提供實(shí)驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗動物清潔級雄性wistar大鼠70只，體質(zhì)量 （200±20）g，購自湖北省醫(yī)學(xué)科學(xué)院動物實(shí)驗中心。

1.2 藥物及試劑生大黃煎劑由解放軍第一六一醫(yī)院藥劑科煎制，制成含質(zhì)量濃度為1g/mL大黃水煎液，置于冰箱4℃保存?zhèn)溆?；乳果糖口服溶液，?guī)格：5.0g/10mL。由丹東康復(fù)制藥有限公司生產(chǎn)，批號：091202。四氯化碳（CCl4，分析純），由老河口市石油化工總廠生產(chǎn)，批號：080805。用液體石蠟配制成20%的CCl4石蠟溶液；天門冬酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、血氨（BA）、內(nèi)毒素（LPS）檢測試劑盒均購自南京建成生物工程公司。

1.3 造模與給藥70只大鼠采用數(shù)字表法隨機(jī)分為正常組10只，模型組、生大黃組和乳果糖組各20只。HE大鼠模型參照文獻(xiàn)［2］方法。除正常組外，采用CCl4誘導(dǎo)，結(jié)扎、切除2/3肝臟，建立大鼠HE模型。實(shí)驗開始每日1次給大鼠灌胃20%CCl4，石蠟溶液5mL/kg，連續(xù)2d。手術(shù)前大鼠禁食12h，在戊巴比妥鈉麻醉下背位固定于手術(shù)板上，無菌操作，沿腹正中線上腹部小切口開腹，暴露肝臟，依次在肝蒂部結(jié)扎左前葉及中葉，將此兩葉切除；然后再將暴露的肝右葉結(jié)扎，但不切除。正常組灌胃等體積的生理鹽水，并行假手術(shù)（剖腹但不切肝）。于實(shí)驗第5日（術(shù)后禁食24h）開始，生大黃組和乳果糖組分別予生大黃水煎液5g/100g、乳果糖0.5g/100g灌胃，連續(xù)灌胃3d。實(shí)驗第8日全部大鼠在乙醚麻醉下心臟采血，取肝組織標(biāo)本。

1.4 標(biāo)本采集與檢測腦電圖檢測：采血前，各組大鼠均在乙醚麻醉下俯臥，安置額枕骨間電極，用八道生理記錄儀描記腦電圖，時間常數(shù)0.3s，高頻濾波100Hz。血清生化指標(biāo)：取血5mL，離心取血清，嚴(yán)格按照試劑盒操作說明檢測血清AST、ALT、BA、LPS水平。肝臟病理檢查 ：取大鼠肝左葉部分肝組織用10%中性甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋、切片，常規(guī)HE染色，光鏡下觀察肝組織病理變化。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 12.0統(tǒng)計軟件，計量資料以±s）表示，組間比較采用t檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠死亡率比較正常組大鼠無死亡，模型組死亡率為60%（12/20），生大黃組死亡率為 35%（7/20），乳果糖死亡率為40%（8/20）；生大黃組和乳果糖組與模型組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；但生大黃組與乳果糖組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

2.2 各組大鼠腦電圖變化正常組大鼠腦電圖以α波為主，無明顯異常；模型組大鼠腦電頻率變慢，5～7次/s，以寬大的δ波為主，電壓高達(dá)160～280μV；與模型組比較，生大黃組和乳果糖組大鼠腦電的電壓、頻率均有大幅度的恢復(fù)，接近于正常組波型。

2.3 各組大鼠血清AST、ALT、BA、LPS水平比較見表1。與正常組比較，模型組大鼠血清AST、ALT、BA、LPS水平顯著升高（P均 ＜0.01）；生大黃組大鼠血清 AST、ALT、BA、LPS水平與模型組比較顯著降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；生大黃組大鼠血清BA、LPS水平與乳果糖組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＜0.05）。

表1 各組大鼠血清 AST、ALT、BA、LPS水平比較 （±s）

表1 各組大鼠血清 AST、ALT、BA、LPS水平比較 （±s）

與正常組比較，△P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05；與乳果糖組比較，▲P＜0.05。

LPS（EU/mL）0.08±0.04 0.92±0.12△0.48±0.06△*▲0.66±0.08△*組 別 n AST（U/L）ALT（U/L）60.45±14.04 1320.86±285.84△生大黃組 13 620.68±156.34△*866.52±132.66△*乳果糖組 12 756.52±168.75△*1051.48±156.24△*正常組 10 41.22±10.56模型組 8 1056.80±235.65△BA（mg/L）1.04±0.45 4.52±1.86△2.15±1.02△*▲3.22±1.25△*

2.4 各組大鼠肝組織病理學(xué)觀察正常組肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝板排列整齊，肝細(xì)胞以中央靜脈為中心呈放射狀排列，肝細(xì)胞無變性、壞死，匯管區(qū)無炎性細(xì)胞浸潤；模型組肝組織呈彌漫性壞死，肝小葉結(jié)構(gòu)破壞，肝細(xì)胞溶解，匯管區(qū)及壞死區(qū)可見炎性細(xì)胞浸潤；生大黃組和乳果糖組肝小葉結(jié)構(gòu)尚完整，肝板排列欠整齊，肝細(xì)胞呈不同程度的腫脹，少部分呈氣球樣變，肝小葉內(nèi)可見點(diǎn)片狀壞死，匯管區(qū)有炎性細(xì)胞浸潤。

3 討 論

目前HE發(fā)病機(jī)制尚不十分清楚，多數(shù)認(rèn)為是多種因素作用的結(jié)果，氨中毒學(xué)說仍占主導(dǎo)地位。BA來源分體內(nèi)代謝產(chǎn)氨和腸道內(nèi)產(chǎn)氨，入血后在肝臟中經(jīng)鳥氨酸循環(huán)合成尿素，由尿排出。肝臟損害時，不能將進(jìn)入肝臟的氨都轉(zhuǎn)變?yōu)槟蛩?，使BA升高［3］，氨進(jìn)入腦細(xì)胞后干擾腦細(xì)胞的能量代謝，使NA+-K+-ATP酶活性減低，ATP缺乏，能量供應(yīng)不足，以致不能維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)地興奮活動，從而引起昏迷。能否降低BA濃度在臨床上是衡量藥物療效和評估患者預(yù)后的一個重要指標(biāo)。LPS是腸道革蘭陰性菌分解代謝的產(chǎn)物，主要在肝臟代謝排泄，肝臟受損時，不能及時代謝排泄LPS，使其在血液中儲積，進(jìn)一部損害肝臟。本實(shí)驗中，所有大鼠血清BA和LPS水平均高于正常組，在經(jīng)過乳果糖和生大黃的治療后，血清BA和LPS水平下降，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，生大黃療效優(yōu)于乳果糖。

乳果糖是一種人工合成雙糖，能改變腸內(nèi)環(huán)境，減少氨的吸收，從而降低BA，還可以增加排便，有利于內(nèi)毒素的排泄，減少LPS及其他毒性物質(zhì)，臨床上用于各種肝病的治療，尤其是HE［4］。本實(shí)驗以乳果糖作為陽性對照藥物，其有較好的可比性。藥理學(xué)證實(shí)，生大黃有瀉下作用，通過排便，使腸道有毒廢物盡快排出體外；抑制腸道有毒菌過度生長，調(diào)節(jié)正常菌群，減少細(xì)菌對腸道尿素分解，產(chǎn)氨減少，防止肝性腦病復(fù)發(fā)［5］；促進(jìn)干擾素產(chǎn)生，促進(jìn)細(xì)胞免疫，清除肝細(xì)胞炎癥，改善肝組織的微循環(huán)和供氧作用也有利于肝細(xì)胞的生長［6］。臨床治療中發(fā)現(xiàn)大黃有減輕患者腹脹作用，而乳果糖不僅不能減輕腹脹，而且還可以引起腹脹［7］。本研究結(jié)果顯示，生大黃可改善大腦誘發(fā)電位異常和肝功能，降低血清BA和LPS水平，對大鼠HE有治療作用，與其瀉下作用，縮短腸道對BA、LPS等有害物質(zhì)的吸收，促進(jìn)其排泄有關(guān)，同時證實(shí)生大黃可以起到預(yù)防及減輕HE的作用。

［1］劉赫，梁妍，劉雁勇，等.地黃蘇合香合劑對輕微肝性腦病模型大鼠治療的實(shí)驗研究［J］.中國康復(fù)理論與實(shí)踐，2010，16（10）：904-906.

［2］熊益群，周大橋，李航森，等.實(shí)驗性大鼠肝性腦病動物模型的研究［J］.中國實(shí)驗動物學(xué)雜志，2002，12（6）：340-342.

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［4］李瑞軍，楊昭徐.乳果糖對臨床及亞臨床肝性腦病預(yù)防作用的實(shí)驗研究［J］.胃腸病學(xué)，2000，5（4）：214-215.

［5］陳靜，葉柏.大黃灌腸治療肝性腦病30例［J］.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2004，20（3）：180-181.

［6］胡林華，崔錦章，吳繁，等.生大黃的實(shí)驗研究及治療肝性昏迷的臨床觀察［J］.江蘇醫(yī)藥，1994，20（6）：304.

［7］王菊玲.大黃煎劑與乳果糖治療肝性腦病療效比較［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2004，13（17）：2302-2303.