姚 冰

內(nèi)蒙古呼倫貝爾市藥品檢驗(yàn)所，內(nèi)蒙古 呼倫貝爾 021008

敖樂木斯－5由熊膽粉、人工牛黃、紅花、黃連、木香等五味藥組成的丸劑。其中紅花具通經(jīng)散瘀，消腫止痛的功能。選擇紅花的主要成分羥基紅花黃色素A作為該藥品的含量控制指標(biāo)是可行的。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法，參照《中國藥典》2005年版一部中“紅花”項(xiàng)下的含量測定方法，對處方中紅花所含的羥基紅花黃色素A進(jìn)行測定。通過試驗(yàn)分析，結(jié)果表明該方法重現(xiàn)性好，專屬性強(qiáng)，方中其它組分對羥基紅花黃色素A的測定無干擾，本方法可作為該藥品的質(zhì)控方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC－2010A HT高效液相色譜儀 SCL－10ATvp型控制器，SPD－10Avp型檢測器，LCsolution色譜工作站。UA－1700型紫外－可見分光光度計(jì)。Sartorius Bp121S(0.1mg)Bp211D(0.01mg)電子天平。

1.2 試劑與試藥 羥基紅花黃色素A對照品 (批號:111637－200503，供含量測定用):由中國藥品生物制品檢定所提供;樣品:敖樂木斯－5由呼倫貝爾市新巴爾虎左旗蒙醫(yī)院提供。甲醇為色譜純，乙腈為色譜純，水為高純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 十八烷基建和硅膠為填充劑;流動相:甲醇－乙腈－0.7%磷酸 (26:2:72) (用三乙胺調(diào)pH至6.0±0.1);柱溫:30℃;檢測波長:403nm;進(jìn)樣量:10μl。

2.2 提取條件的選擇 參照中國藥典2005版一部“紅花”項(xiàng)下對羥基紅花黃色素A的提取方法，以25%甲醇作為提取溶劑進(jìn)行超聲提取，為保證被測成分的完全提取，實(shí)驗(yàn)中考察了超聲20分鐘、30分鐘、40分鐘、50分鐘不同提取時間對提取效率的影響，含量測定結(jié)果見表1。

表1 羥基紅花黃色素A提取效率考察結(jié)果

從表中數(shù)據(jù)可見，超聲40分鐘后供試品中羥基紅花黃色素A的含量基本穩(wěn)定不變，故將提取時間定為超聲40分鐘。

2.3 試驗(yàn)溶液的制備

對照品溶液的制備 取羥基紅花黃色素A對照品適量，精密稱定，加25%甲醇制成每 1ml含67.2μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備 取本品約0.8g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入25%甲醇50ml，稱定重量，超聲40分鐘，放冷，再稱定重量，用25%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

陰性對照品溶液的制備 精密稱取按處方比例并以相同工藝制備的缺紅花的樣品0.8g按供試品溶液制備法制得陰性對照溶液。在上述色譜條件下，分別精密吸取對照品溶液、陰性對照溶液、供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，測得結(jié)果為:陰性對照色譜圖中在與羥基紅花黃色素A對照品以及供試品色譜圖相應(yīng)的保留時間處無色譜峰出現(xiàn)，表明其他組分對羥基紅花黃色素A的測定無干擾。

羥基紅花黃色素A、陰性對照溶液、供試品溶液色譜圖見圖1

圖1 檢測結(jié)果色譜圖

2.4 線性關(guān)系試驗(yàn) 取羥基紅花黃色素A對照品 (批號110715－200413)約8.4mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加25%甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻 (0.0336mg/ml)，精密吸取 1、2、3、4、5、6ml，分別置10ml量瓶中，加25%甲醇稀釋至刻度，搖勻，各取10μl進(jìn)樣，按上述色譜條件測定，以峰面積對對照品進(jìn)入的量進(jìn)行回歸分析，結(jié)果羥基紅花黃色素A在0.0336μg～0.2016μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系?；貧w方程為y=836940x+8785.9，r=0.9999。標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)值見表2。

表2 標(biāo)準(zhǔn)曲線測定結(jié)果

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取樣品含量測定項(xiàng)下制備的供試品溶液1份，分別于0h、2h、4h、6h、8h、12h進(jìn)樣測定峰面積值，結(jié)果見表3。

從表中數(shù)據(jù)可以看出，羥基紅花黃色素A在12小時內(nèi)的峰面積基本穩(wěn)定。

2.6 精密度試驗(yàn) 取同一批號 (20090802)供試品6份，各約0.8g，精密稱定，分別按樣品含量測定項(xiàng)下方法操作，測定每份供試品的含量，結(jié)果平均值為2.844mg/g，RSD%為0.16%。結(jié)果見表4。

表3 不同時間測定樣品中羥基紅花黃色素A的峰面積積分值

表4 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.7 加樣回收試驗(yàn)

取已知羥基紅花黃色素A含量 (含量為2.844mg/g)供試品6份，每份約0.4g，精密稱定，分別置6個具塞錐形瓶中，精密加入用25%甲醇配制的羥基紅花黃色素A對照品溶液 (羥基紅花黃色素A濃度1.122mg/ml)1ml，再精密加入49ml25%甲醇制成供試品溶液，按樣品含量測定項(xiàng)下的方法操作，測定每份的含量，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為98.20%，RSD%為0.59%結(jié)果見表5。

表5 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品的含量測定 取本品3個批號共6份，各約0.8g，按供試品溶液的制備方法處理，分別精密吸取供試品溶液與對照溶液各10μl注入液相色譜儀，按外標(biāo)法計(jì)算含量。三批樣品的測定結(jié)果見表7。

表7 樣品中羥基紅花黃色素A的含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 檢測波長的選擇 精密稱取羥基紅花黃色素A對照品適量，用25%的甲醇制成每1ml含15μg的溶液，于紫外－可見分光光度儀上，在190nm～600nm波長范圍掃描，結(jié)果羥基紅花黃色素A在波長403nm、223nm處有最大吸收。參照中國藥典2005版一部“紅花”含量測定項(xiàng)下羥基紅花黃色素A的測定方法，選擇403nm作為檢測波長。

3.2 本實(shí)驗(yàn)精密度及回收率試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法具有較好的準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性，可作為該制劑的含量測定方法。

［1］國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典［S］.北京;化學(xué)工業(yè)出版社，2005.