薛 坤，賈 凡，金 蕊

(天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，天津 300193)

消巖顆粒由黃芪、太子參、夏枯草、生牡蠣等味藥組成，具有扶正抗癌，解毒祛瘀的功效。適用于肺癌、乳腺癌、肝癌、消化道惡性腫瘤、婦科惡性腫瘤和惡性淋巴瘤等，配合放、化療使用，有助于提高化、放療效果，改善免疫功能，減輕放、化療不良反應(yīng)。處方中黃芪為君藥 , 黃芪甲苷為其主要有效成分之一。黃芪甲苷的含量測(cè)定方法有比色法、薄層掃描法、高效液相色譜法，經(jīng)參考相關(guān)文獻(xiàn)[1-4]，采用高效液相色譜法-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法(HPLC-ELSD) 建立了消巖顆粒中黃芪甲苷的測(cè)定方法，結(jié)果顯示本法準(zhǔn)確、可靠、重現(xiàn)性好,可用于消巖顆粒的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Waters 高效液相色譜儀 600 Pump 2420 ELS Detector Empower數(shù)據(jù)工作站，梅特勒-多利托AG-135型電子天平 (十萬(wàn)分之一 ) ，超聲波清洗器(TCQ-250型，北京醫(yī)療設(shè)備二廠)。

1.2試劑與試藥 黃芪甲苷對(duì)照品 (中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用 ，批號(hào)110781、200613) ,消巖顆粒本院制劑室提供(批號(hào)090702、090730、090731)。乙腈 (色譜純 ) ，水 (蒸餾水) ，其他試劑均為分析純 (天津市化學(xué)試劑批發(fā)公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱：Intertex C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)； 流動(dòng)相：乙腈-水 (33∶67) ；柱溫35 ℃；流速1.0 ml/min；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器參數(shù)：漂移管溫度60 ℃，加熱器級(jí)別68%霧化氣體為高純氮?dú)?(99.5%)；增益70%。在此色譜條件下 ,黃芪甲苷峰完全達(dá)到基線分離 (R> 2) ,理論板數(shù)在 6 000以上。

2.2溶液制備

2.2.1對(duì)照品溶液的制備 精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 ml含0.5 mg的溶液，即得。

2.2.2供試品溶液的制備 取本品適量，研細(xì)，取1.0 g，精密稱定，精密加甲醇50 ml，超聲30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)?0 ml水溶解，用水飽和正丁醇振搖萃取3 次，每次20 ml，合并正丁醇液，再用氨試液充分洗滌2次，(30、20 ml)，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状既芙庵? ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜 (0.45 μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3陰性對(duì)照溶液的制備 除黃芪外，其余按本品處方比例稱取適量，依照制備工藝制成陰性制劑，照“2.2.2”項(xiàng)下方法制成陰性對(duì)照溶液。分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液20 μl，注入液相色譜儀，色譜圖見(jiàn)圖1。

1. 黃芪甲苷

2.3線性關(guān)系考查 取黃芪甲苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml含1.249 2 mg的溶液，作為儲(chǔ)備液，再分別精密量取1、2、3、4和5 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，分別精密吸取上述5種濃度的對(duì)照品溶液各20 μl，注入液相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，測(cè)定各自峰面積，以對(duì)照品濃度(μg/μl)為橫坐標(biāo)，峰面積值為縱坐標(biāo)，求得回歸方程：Y=1.74X+5.69(r=0.999 9)。結(jié)果表明在2.498 4～12.492 μg范圍內(nèi)線性良好。

2.4精密度試驗(yàn) 取消巖顆粒(批號(hào)090731)按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣20 μl測(cè)定，重復(fù)進(jìn)樣 6次，測(cè)得黃芪甲苷峰面積的RSD為2.18%。

2.5穩(wěn)定性試驗(yàn) 取消巖顆粒(批號(hào)090731)按“2.2.2”方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣20 μl, 分別在0、1、2、3、4、5、6、7和8 h測(cè)定，測(cè)得黃芪甲苷含量值的RSD為2.32%，說(shuō)明供試品溶液在8 h之內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取消巖顆粒(批號(hào)090731)樣品6份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣20 μl測(cè)定，結(jié)果平均含量為0.756 mg/g，RSD為1.96%。

2.7 回收率試驗(yàn) 取消巖顆粒(批號(hào)090731)，共6份，研細(xì)，各取0.5 g，精密稱定，分別加入黃芪甲苷對(duì)照品溶液0.037 86 mg/ml各10 ml，精密加入甲醇40 ml，再按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣20 μl測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為100.14%，RSD為2.96%，見(jiàn)表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8樣品測(cè)定 取消巖顆粒(批號(hào)090702、090730、090731)，分別按“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法及“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，結(jié)果3批消巖顆粒中的黃芪甲苷含量分別為0.698、0.766和0.756 mg/g。

3 討論

在供試品溶液制備時(shí)，考查了甲醇、乙醇及水提取，結(jié)果顯示甲醇的提取率較高，而且提取的雜質(zhì)較少，因此，以甲醇提取為最佳。用超聲30 min、索氏提取5 h、加熱回流1 h 3種不同提取方法提取，結(jié)果顯示，用超聲30 min作為提取方法測(cè)得的黃芪甲苷含量高，且省時(shí)節(jié)能源，所以選擇超聲30 min作為提取方法。

黃芪甲苷的紫外末端吸收較差(λmax=200.8 nm)，如果用紫外檢測(cè)，受試劑影響很大，檢測(cè)效果不佳。ELSD檢測(cè)器為質(zhì)量型檢測(cè)器，不受外部環(huán)境干擾，試劑在檢測(cè)器中全部蒸發(fā)，不干擾檢測(cè)，靈敏度高，穩(wěn)定性和重現(xiàn)性好，且操作方便，是檢測(cè)黃芪及相關(guān)制劑中黃芪甲苷的一種有效的分析方法。

1 中國(guó)藥典.一部.2005：212

2 王明娟,胡昌勤,金少鴻. 蒸發(fā)光散射檢測(cè)器在藥物分析及其他方面的應(yīng)用.中國(guó)藥事, 2002,16 (7) : 431

3 李濤,徐長(zhǎng)根,郝武常.HPLC-ELSD測(cè)定桃芪生血膠囊中黃芪甲苷的含量.中成藥, 2005, 27(5) : 541

4 楊慶勝,李彩榮,趙雪暉.HPLC-ELSD測(cè)定補(bǔ)中益氣片中黃芪甲苷的含量.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志, 2005, 12 (7) : 47