許慶軒 ，張婷婷 ，周 芹 ，吳玉梅

（1.農(nóng)業(yè)部甜菜品質(zhì)監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心，哈爾濱 150080；2.黑龍江大學(xué)農(nóng)作物研究院，哈爾濱 150080；3.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院甜菜研究所，哈爾濱150080；4.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，哈爾濱150040）

黑龍江省位于北緯53°至43°之間，年平均氣溫僅4℃左右，氣溫偏低導(dǎo)致除草劑在土壤中的降解十分緩慢，很容易對(duì)下茬作物造成藥害[1]。甜菜對(duì)某些除草劑十分敏感，在黑龍江地區(qū)藥害十分嚴(yán)重，經(jīng)常造成減產(chǎn)，甚至絕產(chǎn)[2-6]，已經(jīng)成為甜菜生產(chǎn)中的重要問(wèn)題。

在黑龍江，對(duì)甜菜危害較大的除草劑主要是豆磺隆、普斯特、賽可津和莠去津。本研究采用UPLC-MS/MS技術(shù)對(duì)上述4種除草劑市售原藥進(jìn)行檢測(cè)，建立較為快捷的準(zhǔn)確定量方法，便于指導(dǎo)田間及試驗(yàn)準(zhǔn)確用藥，同時(shí)可以辨別原藥除草劑中有效成分，防止摻加禁用除草劑，為安全合理用藥奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

4種除草劑原藥均購(gòu)自農(nóng)藥商店，其標(biāo)識(shí)含量如下：普斯特，有效成分為咪唑乙煙酸，50g/L；豆磺隆有效成分為氯嘧磺隆，20%（質(zhì)量比）；莠去津有效成分50%（質(zhì)量比）；賽克津有效成分為嗪草酮，有效成分70%（質(zhì)量比）。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 儀器設(shè)備 UPLC-Quattro Premier超高效液相色譜串聯(lián)三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀，美國(guó)Waters公司生產(chǎn)。

1.2.2 儀器條件 （1）色譜條件：色譜柱為 ACQUITY UPLCTMBEH C18column（50mm×2.1mm i.d.，1.7μm，Waters Corp，Milford，USA）；流速：0.3mL/min；柱溫：35℃；流動(dòng)相：A：0.1%甲酸乙腈，B：0.1%甲酸水；進(jìn)樣量：2μL；梯度洗脫，初始流動(dòng)相比例為A：10%，B：90%，之后在1.5minA相比例線性增加到35%，B相為65%，在4minA相比例線性增加到90%，B為10%，在這個(gè)比例持續(xù)1min，到第5min恢復(fù)到初始流動(dòng)相比例，平衡2min到第7min結(jié)束。

（2）質(zhì)譜條件：電噴霧離子源（ESI），正離子模式檢測(cè)；毛細(xì)管電壓3.5kV，提取電壓3.0V，離子源溫度120℃，脫溶劑氣溫度350℃，錐孔氣流量為30L/h，脫溶劑氣流量500L/h，離子對(duì)監(jiān)測(cè)時(shí)間0.2s，莠去津（Atrazine）定量離子對(duì) 216>174，錐孔電壓 35kV，碰撞能量 18；嗪草酮（Metribuzin）定量離子對(duì) 215>187，錐孔電壓25kV，碰撞能量18；氯嘧磺隆（Chlorimuron-ethyl）定量離子對(duì)415>186，錐孔電壓43kV，碰撞能量15；咪唑乙煙酸（Imazethapyr）定量離子對(duì)290>177，錐孔電壓30kV，碰撞能量25。

1.2.3 主要試劑 乙腈和甲醇：色譜純，美國(guó)Fisher公司生產(chǎn)；甲酸：色譜純，天津科密歐化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)；除草劑：咪唑乙煙酸純度99.0%，氯嘧磺隆97.5%，莠去津99.5%，嗪草酮99.0%，標(biāo)準(zhǔn)品由德國(guó)Dr.Ehrenstorfer生產(chǎn)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 除草劑標(biāo)準(zhǔn)溶液儲(chǔ)備液及標(biāo)準(zhǔn)混合溶液的配制

取咪唑乙煙酸、莠去津、嗪草酮、氯嘧磺隆標(biāo)準(zhǔn)品適量，精密稱定，加乙腈溶液配制成4種除草劑標(biāo)準(zhǔn)品的工作儲(chǔ)備液（濃度為10 mg/L）。精密吸取4種除草劑標(biāo)準(zhǔn)品的工作儲(chǔ)備液各1 mL置于10 mL容量瓶中，以乙腈稀釋至刻度，搖勻，配制成濃度為1.0mg/L的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液用于標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。精密吸取混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液各0.1mL、0.3mL、0.5mL、1mL、3mL、5mL置10mL容量瓶中，用10%乙腈水溶液釋至刻度，搖勻，用于標(biāo)準(zhǔn)曲線制備。

2.2 供試品溶液的制備

⑴普施特（標(biāo)注有效成分50g/L）：吸取20mL普施特原藥溶液于1000mL容量瓶，用蒸餾水定容，得到1 mg/mL的原藥溶液；用10%乙腈水溶液再稀釋至0.1mg/L。⑵豆磺?。?biāo)注有效成分20%）：稱取豆磺隆原藥5g，用蒸餾水溶解，定容到1000mL容量瓶中，得到1mg/mL的原藥溶液，用10%乙腈水溶液再稀釋至0.1 mg/L。⑶莠去津（標(biāo)注有效成分50%）：稱取莠去津原藥2g，用蒸餾水定容到1000mL溶量瓶中，得到1mg/mL的溶液，用10%乙腈水溶液再稀釋至0.1mg/L。⑷塞克津（標(biāo)注有效成分70%）：稱取塞克津原藥1.5g，用蒸餾水定容到1000mL，得到1mg/mL的溶液，最后采用10%乙腈水溶液再稀釋至0.1mg/L。以上樣品用0.22μm濾膜過(guò)濾，直接用于UPLC-MS/MS分析。

3 結(jié)果與討論

以4種除草劑混和標(biāo)準(zhǔn)溶液優(yōu)化色譜質(zhì)譜條件，最終確定其條件如1.2.2所示，圖一為4種除草劑的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）的提取離子流圖（EIC），如圖所示，4種除草劑分離度較好，峰形也較好，可以用來(lái)做定性定量分析，說(shuō)明1.2.2所示的色譜質(zhì)譜條件適當(dāng)。

使用0.01、0.03、0.05、0.1、0.3、0.5mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)混和溶液 5μL 注入U(xiǎn)PLC-MS/MS分析系統(tǒng)，記錄峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/L）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，曲線過(guò)原點(diǎn)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行回歸分析，得各成分的線性回歸方程結(jié)果見(jiàn)表1。從表中結(jié)果可以得知該方法用于分析4種除草劑的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性很好，待測(cè)組分具有較好的定量準(zhǔn)確性。

取各組分濃度均為0.1×10-6的除草劑原藥1mL用于UPLC-MS/MS分析，每次進(jìn)樣5μL，記錄峰面積，用原藥溶液作為空白，以外標(biāo)法計(jì)算原藥溶液加標(biāo)準(zhǔn)品的含量。用原藥加標(biāo)準(zhǔn)品的含量減去原藥所得含量，所得差值與標(biāo)準(zhǔn)品含量作比較，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表2。加標(biāo)水平在0.1mg/L的情況下，仍然有很好的回收率，說(shuō)明本方法定量準(zhǔn)確度高，適合4種除草劑的定量分析。

取0.1mg/L的除草劑原藥用于UPLC-MS/MS分析，連續(xù)進(jìn)樣3次，每次進(jìn)樣5μL，記錄峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算原藥中咪唑乙煙酸、氯嘧磺隆、莠去津、嗪草酮的有效成分含量。結(jié)果見(jiàn)表3。通過(guò)結(jié)果可以看出，普施特原藥中有效成分的含量低于標(biāo)注含量38%、莠去津原藥中有效成分的含量低于標(biāo)注量18%，塞克津原藥中有效成分的含量高于標(biāo)注量14%，豆磺隆原藥中有效成分的含量高于標(biāo)注量5%。普斯特、莠去津和賽克津中有效成分的含量與標(biāo)注有很大誤差，說(shuō)明對(duì)原藥除草劑有效成分的檢測(cè)是十分必要的。另外，在每種除草劑原藥中均未檢出其它類型除草劑成分，本分析方法可以作為違禁除草劑的檢測(cè)方法。

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[1]魯兆新，史淑芝，羅成飛，程大友，崔杰，徐德昌.長(zhǎng)殘留除草劑對(duì)甜菜的危害及對(duì)策[J]..中國(guó)甜菜糖業(yè)，2008（4）：47-49.

[2]夏樹(shù)有，畢景春.幾種常用化學(xué)除草劑對(duì)甜菜的危害[J].中國(guó)甜菜糖業(yè)，2001（3）：47-48.

[3]陳山，李維秀，楊海杰，邰樹(shù)仁.豆磺隆除草劑對(duì)后作甜菜藥害分析[J].中國(guó)糖料，2004（2）：36-37.

[4]黃春艷，陳鐵保，王宇，等.幾種長(zhǎng)殘留除草劑對(duì)后茬作物甜菜的影響[J].中國(guó)糖料，2005（3）：21-24.

[5]趙英娜，單德鑫，路偉明.幾種長(zhǎng)殘留除草劑對(duì)甜菜苗期的影響[J].中國(guó)新技術(shù)新產(chǎn)品，2010（18）：236.

[6]朱晶，姜德進(jìn)，丁學(xué)強(qiáng)，陳瑞珍.綠黃隆對(duì)甜菜幼苗影響的盆栽試驗(yàn)[J].現(xiàn)代化農(nóng)業(yè)，1994（6）：3.