李友生，陳江鴻

1.武漢市新洲區(qū)中醫(yī)醫(yī)院婦產(chǎn)科，湖北 武漢 430400；2.廣西醫(yī)科大學附屬第四醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣西 柳州 545005

化療是腫瘤治療中的重要手段之一，因其療效確切，現(xiàn)已廣泛應用于臨床。但由于化療藥物缺乏選擇性，對正常組織細胞也存在毒性作用。因此，環(huán)磷酰胺化療過程中可引起致卵巢損害導致卵巢功能不全、不孕及早絕經(jīng)，甚至出現(xiàn)卵巢功能早衰（POF），嚴重影響了年輕女性腫瘤患者的生活質(zhì)量[1]。目前研究表明，GnRH-ant與GnRH-a對化療引起的卵巢損害均具有保護作用[2-3]，但前者會導致雌激素一過性升高，后者會出現(xiàn)低雌激素效應，故單用均存在一定的局限性。本研究旨在通過動物實驗探討GnRH-ant與GnRH-a聯(lián)合應用化療中卵巢功能的保護作用及可能的機制，為其在臨床上的應用尋求理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

8～9 周成年雌性 Balb/c 小鼠，體重（20±2）g，購自湖南斯萊克景達實驗動物公司，以無特殊病原體（SPF）級鼠飼料和凈化水喂養(yǎng)，室溫22℃左右，相對濕度50%左右，明暗交替各12 h。于飼養(yǎng)1周后，每天陰道分泌物涂片觀察性周期，將有正常性周期的大鼠納入實驗。CTX購于錦州九泰藥業(yè)有限責任公司，GnRH-ant購自瑞士雪蘭諾制藥有限公司，GnRH-a購自天津博福-益普生制藥有限公司。

1.2 方法

將納入實驗組的36只小鼠隨機分成4組，A組為對照組，B組為 CTX組，C組為 GnRH-ant+GnRH-a組，D組為GnRH-ant+GnRH-a+CTX組，每組各9只。A組：生理鹽水1 ml/d，連續(xù)腹腔注射20 d；B組：生理鹽水1 ml/d，連續(xù)腹腔注射 10 d 后，給予 CTX 2.0 mg/（kg·d），連續(xù)腹腔注射 10 d；C 組：GnRH-ant 0.5 mg/（kg·d），GnRH-a 0.1 mg/（kg·d），連續(xù)皮下注射 20 d；D組：GnRH-ant與 GnRH-a連續(xù)給藥 10 d后，給予GnRH-ant、GnRH-a與CTX連用10 d。給藥期間，每天將陰道分泌物涂片以觀察性周期。用藥結束后于動情期處死小鼠，取其子宮及雙側卵巢，稱取濕重后用4%多聚甲醛固定。

1.3 激素測定方法

采用放射免疫法測定小鼠血清中促卵泡生成素（FSH）、雌二醇（E2）的水平，試劑盒購自天津九鼎醫(yī)學生物工程有限公司。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（）表示，組間比較采用t檢驗或成組資料單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t法，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各組小鼠用藥前后體重變化

用藥前，各組小鼠體重比較差異無統(tǒng)計學意義（F=0.07，P＞0.05），用藥后B組小鼠體重、子宮及卵巢濕重與其他三組比較顯著減輕，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；而C、D組與A組相比，差異均無統(tǒng)計學意義（均P＞0.05）。見表1、2。

表1 各組小鼠用藥前后體重變化比較（，g）

表1 各組小鼠用藥前后體重變化比較（，g）

注：與 B 組比較，t=5.37，①P＜0.05，t=4.26，②P＜0.05，t=5.58，③P＜0.05；與A 組比較，t=0.70，④P＞0.05；t=0.12，⑤P＞0.05

組別 例數(shù)A組B組C組D組9999用藥前18.35±1.4317.89±1.2717.68±1.0318.52±1.59用藥后19.44±1.52①16.23±0.9518.92±1.64②④19.36±1.39③⑤

表2 各組小鼠子宮及卵巢濕重比較（，mg）

表2 各組小鼠子宮及卵巢濕重比較（，mg）

注：與 B 組比較，t=19.00，①P＜0.05，t=17.36，②P＜0.05，t=18.28，③P＜0.05； 與 A 組比較，t=0.32， ④P＞0.05，t=0.25， ⑤P＞0.05。 與 B 組比較，t=34.00，aP＜0.05，t=29.06，bP＜0.05，t=26.30，cP＜0.05；與 A 組比較，t=0.37，dP＞0.05；t=0.29，eP＞0.05

組別 例數(shù)A組B組C組D組9999子宮濕重68.75±9.41①9.03±0.5467.28±10.05②④67.63±9.60③⑤卵巢濕重18.94±0.53a 8.28±0.7618.03±0.66bd 17.52±0.73ce

2.2 各組小鼠各級卵泡數(shù)量變化

用藥后B組小鼠各級卵泡數(shù)均有所減少，尤其是生長卵泡、成熟卵泡及卵泡總數(shù)，與其他三組相比差異有統(tǒng)計學意義 （P＜0.05），而C組生長卵泡與成熟卵泡數(shù)較A組顯著減少，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表 3。

表3 各組小鼠子宮及卵巢濕重比較（，個）

表3 各組小鼠子宮及卵巢濕重比較（，個）

注：初級卵泡，a經(jīng)t檢驗，與其他三組比較，tA=20.60、tC=8.46、tD=5.02，P＜0.05；生長卵泡，b 經(jīng) t檢驗，與其他三組比較，tB=13.50、tC=23.14、tD=23.86；成熟卵泡，c經(jīng)t檢驗，與其他三組比較，tB=14.25、tC=12.16、tD=11.74；卵泡總數(shù)，d經(jīng)t檢驗，與其他三組比較，tA=21.29、tC=21.36、tD=21.90；與 A 組比較，t=23.14，①P＜0.05，t=12.16，②P＜0.05

組別 例數(shù) 初級卵泡A組B組C組D組9999665.86±29.42349.45±35.47a 787.47±31.51743.25±35.64生長卵泡218.34±16.49b 124.58±12.7378.25±7.62①69.97±8.73成熟卵泡66.53±8.41c 23.23±3.5228.45±4.19②28.98±4.62卵泡總數(shù)818.23±42.33438.84±32.67d 858.94±49.12797.37±36.67

2.3 各組小鼠血清FSH和E2濃度

用藥后B組小鼠血清FSH水平升高，E2水平下降，與其他三組比較差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05），而C、D組與A組相比，差異均無統(tǒng)計學意義（均P＞0.05），見表 4。

表4 各組小鼠用藥前后生殖激素水平比較（）

表4 各組小鼠用藥前后生殖激素水平比較（）

注：與 B 組比較，t=9.23，①P＜0.05，t=6.59，②P＜0.05，t=6.67，③P＜0.05；與A 組比較，t=1.45，④P＞0.05，t=1.87，⑤P＞0.05；與 B 組比較，t=9.23，aP＜0.05，t=6.59，bP＜0.05，t=6.67，cP＜0.05； 與 A 組比較，t=1.90，dP＞0.05，t=1.95，eP＞0.05

組別 例數(shù)A組B組C組D組9999 FSH（IU/L）1.05±0.13①1.89±0.241.28±0.14②④1.32±0.09③⑤E2（pg/ml）49.45±1.58a 36.40±1.9250.93±1.73bd 51.07±1.92ce

3 討論

化療藥物造成卵巢功能損傷的機制目前尚未完全清楚，通常認為，該類藥物影響卵泡的生長發(fā)育與成熟過程，使卵泡受到破壞，卵泡總數(shù)下降，最終導致POF。CTX是臨床上常用的抗腫瘤藥，具有廣譜、強效且無交叉耐藥等特點，但同樣對卵巢功能具有損傷作用。研究表明，GnRH-ant和GnRH-a可通過對促性腺功能的抑制達到保護卵巢功能的作用，但是其作用機制不同，前者可能為抑制性腺軸，阻止原始卵泡向成熟卵泡轉變并處于藥物低敏感狀態(tài)[4]，后者主要通過與垂體受體的高度親和，直接抑制內(nèi)源性GnRH的作用[5]。

3.1 GnRH-ant和GnRH-a對生殖器官的影響

用藥后CTX組小鼠體重、子宮與卵巢濕重較其他三組明顯減輕，卵泡總數(shù)顯著減少，尤其是生長卵泡與成熟卵泡，可能原因是CTX加速卵泡閉鎖，過度凋亡，最終導致各級卵泡數(shù)量減少，子宮體積縮小，腺體萎縮和減少。CTX+GnRH-a+GnRH-ant組與GnRH-ant+GnRH-a組體重、子宮與卵巢濕重略低于對照組，而生長卵泡與成熟卵泡顯著減少，初級卵泡與卵泡總數(shù)略高于對照組，提示GnRH-ant和GnRH-a聯(lián)合應用可阻止初級卵泡的成熟，不損害靜止期的卵泡，降低CTX對卵巢卵泡的敏感性，從而保護卵巢的儲備功能[6-7]。

3.2 GnRH-ant和GnRH-a對血清FSH與E2的影響

FSH與E2的水平可作為卵巢儲備功能的間接指標[8]。本研究結果顯示，在CTX組小鼠中，F(xiàn)SH濃度顯著升高，E2水平顯著下降，可能是CTX對損傷卵巢顆粒細胞，使其無法分泌雌激素，進一步干擾下丘腦-垂體-卵巢軸，導致E2水平下降，F(xiàn)SH繼發(fā)性升高。CTX+GnRH-a+GnRH-ant組與GnRH-ant+GnRH-a組小鼠中，血清FSH和E2水平與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義，表明聯(lián)合應用GnRH類似物可有效降低CTX對卵巢儲備功能的損傷。其可能原因是GnRH-ant與競爭性抑制內(nèi)源性GnRH對垂體的興奮作用有關；GnRH-a使垂體性腺軸受抑制，阻止原始卵泡募集，形成低雌激素水平，而雌激素可抑制顆粒細胞凋亡，進而達到保護卵巢的目的。

綜上所述，GnRH-ant和GnRH-a聯(lián)合應用克服了單用GnRH-ant所致低雌激素狀態(tài)及單用GnRH-a所致的垂體短暫的興奮作用，優(yōu)勢互補，對化療藥物誘導的卵巢損傷具有一定保護作用，但其長期有效性與安全性仍需進一步臨床觀察。

[1]De Maio E,Adriano G,Carmen P,et al.Compliance and toxicity of adjuvant CMF in elderly breast cancer patients:a single-center experience[J].BMC Cancer,2005,5(1):30-31.

[2]袁光文,沈鏗,楊佳欣.促性腺激素釋放激素激動劑對化療損傷卵巢功能保護作用的實驗研究[J].中華婦產(chǎn)科雜志,2005,40(10):666-669.

[3]趙雪靜,黃艷紅.GnRH拮抗劑對化療中卵巢的保護作用[J].中國婦幼健康研究,2007,18(4):337-339.

[4]崔蕾,陳建玲,雷小敏.促性腺激素釋放素類似物預防化療后卵巢早衰[J].河北醫(yī)藥,2007,29(7):743-744.

[5]王丹,惠寧.促性腺激素釋放激素類似物在卵巢癌治療中的應用[J].第二軍醫(yī)大學學報,2008,29(9):1102-1104.

[6]趙雪靜,辛曉燕,黃艷紅,等.促性腺激素釋放激素拮抗劑預防化療大鼠卵巢功能損害的實驗研究[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學,2008,16(6):896-900.

[7]彭萍,楊冬梓,鄭澄宇,等.促性腺激素釋放激素激動劑在化療患者卵巢功能保護中應用的研究進展[J].中華婦產(chǎn)科雜志,2006,41(4):139-141.

[8]李媛,陳子江.卵巢儲備能力的預測[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展,2002,11(1):56-58.