于春月 ，張?zhí)亓?，白玉華，韓成花

1.哈爾濱醫(yī)科大學(xué)大慶校區(qū)藥學(xué)院，黑龍江大慶 163319；2.大慶市人民醫(yī)院藥劑科，黑龍江大慶 163316

防風(fēng)為傘形科植物防風(fēng)Saposhnikovia divaricata（Turcz.）Schischk.未抽花莖植株的干燥根，能解表祛風(fēng)，勝濕止痙，用于感冒頭痛、風(fēng)濕痹痛、風(fēng)疹瘙癢及破傷風(fēng)等癥[1]。防風(fēng)中的化學(xué)成分包括色原酮、揮發(fā)油、香豆素、雜多糖等類物質(zhì)，藥理實驗表明，其具有解熱、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗炎、抗過敏、抗驚厥和增強機體非特異性免疫功能的作用[2-3]?！吨袊幍洹?010年版中以防風(fēng)中的升麻苷及5-O-甲基維斯阿米醇苷為主要成分進行含量測定，近年來也有人根據(jù)實際需要建議測量其中的多種有效成分以完善防風(fēng)藥材的質(zhì)量控制[4-5]。本文參考《中國藥典》2010年版標準，對黑龍江省大慶市不同地區(qū)防風(fēng)中升麻苷及5-O-甲基維斯阿米醇苷的含量進行對比分析，旨在建立大慶地區(qū)的防風(fēng)質(zhì)量標準，為防風(fēng)藥材的質(zhì)量評價及合理使用提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-20A型高效液相色譜儀（日本島津公司），配有紫外檢測器，色譜柱為 Inertsil ODS-SP（4.6 mm×150 mm，5 μm）；Model C3860 超聲儀（CBL Photoelectron Technology Co.Lid.）；ESJ萬分之一電子天平（沈陽龍騰電子有限公司）。

1.2 試藥

升麻苷（批號：111522-201005）及5-O-甲基維斯阿米醇苷（批號：111523-201005）均購自中國藥品生物制品檢定所；甲醇為分析純，水為吉林產(chǎn)娃哈哈純凈水；防風(fēng)所有樣品經(jīng)哈爾濱醫(yī)科大學(xué)大慶校區(qū)藥學(xué)系劉金杰教授鑒定，均為傘形科植物防風(fēng)Saposhnikovia divaricata （Turcz.）Schischk.的根。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

流動相：甲醇-水（40∶60），流速：1 ml/min，檢測波長：254 nm，進樣量：10 μl。理論塔板數(shù)按升麻苷計算，不低于2000。按5-O-甲基維斯阿米醇苷計算，不低于2500。

2.2 對照品溶液的制備[6]

精密稱取升麻苷對照品4.6 mg置于10 ml容量瓶中，加甲醇超聲溶解并稀釋至刻度；精密稱取5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品5.5 mg置于10 ml容量瓶中，加甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取防風(fēng)藥材0.25 g精密稱定，置于50 ml圓底燒瓶中，加入甲醇10 ml，稱重，水浴回流2 h，甲醇補足失重，過0.45 μm 微孔濾膜，進樣 10 μl。

按上述條件分別進樣，得升麻苷對照品、5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品、防風(fēng)樣品的HPLC色譜圖。見圖1。

2.4 標準曲線的繪制

分別準確量取升麻苷對照品和5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品溶液各 0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml置于同一 5 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，取10 μl進樣，按上述色譜條件進行分析測定，以峰面積Y（mv）為縱坐標，對照品溶液濃度X（mg/ml）為橫坐標，進行回歸計算。結(jié)果得升麻苷的標準曲線為 Y=23659X-3276.6，r=0.9999 （n=6）， 線性范圍為 18.4～92.0 μg/ml。5-O-甲基維斯阿米醇苷的標準曲線為 Y=21217X-8217.8，r=0.9998（n=6），線性范圍為 22.0～110.0 μg/ml。表明兩種成分在檢測范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗

分別精密量取升麻苷及5-O-甲基維斯阿米醇苷的對照品溶液各0.5 ml，置于同一5 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，取10 μl進樣，重復(fù)進樣6次，記錄峰面積，計算RSD分別為0.87%和1.04%，RSD均小于3%，表明儀器精密度良好。

圖1 防風(fēng)對照品及樣品HPLC色譜

2.6 重復(fù)性試驗

精密稱取同一產(chǎn)地的防風(fēng)藥材6份，按照“2.3”項下方法制備供試品溶液并進行測定，得到相應(yīng)的峰面積，計算RSD分別為2.67%和2.23%，RSD均小于3%，表明方法的重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液，在上述色譜條件下，分別于0、2、4、6、8、10、12 h測量，結(jié)果在 12 h內(nèi)樣品中的升麻苷及 5-O-甲基維斯阿米醇苷的峰面積RSD均小于3%，表明樣品在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗

精密稱取6份已知含量的防風(fēng)藥材粉末0.25 g，分別加入對照品溶液適量，按“2.3”項下方法制備供試液并分析，結(jié)果顯示，樣品加樣回收率在98.6%～104.3%，RSD小于3.0%。

2.9 樣品含量測定

按“2.3”項下方法制備樣品，每份樣品測量3次，取平均值。見表1。

表1 防風(fēng)含量測定結(jié)果（n=3）

3 討論

3.1 前期處理方法的考察

對比了回流提取法及超聲提取法對于有效成分含量的影響，結(jié)果表明，回流提取法優(yōu)于超聲提取法，故選擇前者作為提取方法。

3.2 色譜條件的建立

流動相的選擇：對比了乙腈-水及甲醇-水對于色譜峰的影響，采用乙腈-水為流動相得到的色譜峰雜峰較多，很難實現(xiàn)分離；而采用經(jīng)典的甲醇-水為流動相得到的色譜峰峰形簡潔明了，主要成分分離度高，十分理想，故選用甲醇-水為流動相。

流速的選擇：分別考察了0.8、1.0、1.2 ml/min流速下峰形的變化，以1.0 ml/min得到的色譜峰最為理想。

色譜柱的選擇：綜合考察了安捷倫色譜柱Eclipse XDBC18（4.6mm×150mm，5μm）及島津色譜柱InertsilODS-SP（4.6 mm×150 mm，5 μm）的出峰率、分離度等情況，最終選擇島津色譜柱開展實驗。

3.3 實驗結(jié)果的分析

由表1含量測定結(jié)果可知，大慶市各個地區(qū)所產(chǎn)防風(fēng)均符合《中國藥典》2010年版標準（藥典規(guī)定升麻苷及5-O-甲基維斯阿米醇苷總含量不得低于0.24%），其中，杜爾伯特及肇源地區(qū)所產(chǎn)防風(fēng)中有效成分總含量偏高，可作為質(zhì)量參考的依據(jù)。

[1]國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:102.

[2]楊震,孫黎,王煒佳.防風(fēng)成分的藥理活性研究進展[J].黑龍江醫(yī)藥,2005,18(1):36-37.

[3]王成章,張崇禧.防風(fēng)國內(nèi)外研究進展[J].人參研究,2008,15(1):35.

[4]曾麗君,孫啟時,賈凌云.RP-HPLC法同時測定不同產(chǎn)地及不同部位防風(fēng)中4種有效成分的含量[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報,2009,26(2):127-130.

[5]馬力杰,楊濱,馮學(xué)峰,等.野生與栽培防風(fēng)中升麻苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的含量測定及指紋圖譜分析[J].中國中藥雜志,2010,35(13):1731-1734.

[6]李悅悅,王慧,陳俊,等.HPLC法測定防風(fēng)中升麻苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷和亥茅酚苷的含量[J].藥學(xué)實踐雜志,2010,28(6):445-447.