高 羽 ，李榮秀，?；勖?，范國榮，高亞萍，呂麗華

1.河北省計(jì)劃生育科學(xué)技術(shù)研究院，河北石家莊 050071；2.河北省承德市雙灤區(qū)人民醫(yī)院，河北承德 0670003.河北省行唐縣計(jì)劃生育技術(shù)服務(wù)站，河北行唐 050600

國內(nèi)外許多研究報(bào)道，由于環(huán)境污染和不良飲食習(xí)慣所致的一些營養(yǎng)素缺乏等因素會(huì)使精液質(zhì)量下降[1]。一些有害化學(xué)物質(zhì)，如鉛、鎘、一氧化氮，電磁輻射和鋅元素缺乏等因素介導(dǎo)機(jī)體的組織細(xì)胞脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，產(chǎn)生過多的氧自由基和脂質(zhì)降解產(chǎn)物丙二醛（MDA）損傷精子，使精液質(zhì)量降低。有關(guān)研究資料表明[2-3]，使用具有抗氧化作用的營養(yǎng)素，可拮抗氧自由基、汞、砷、鉛、隔等有害物質(zhì)對(duì)精子的損傷，提高精子質(zhì)量。為了觀察一些營養(yǎng)素的復(fù)方制劑改善精子質(zhì)量的效果，本文選擇精液質(zhì)量低下的不育男性患者服用營養(yǎng)素，以觀察服用營養(yǎng)素前后不育患者精液質(zhì)量、血清及精漿中MDA含量的變化。

1 材料與方法

1.1 樣品的采集與處理

1.1.1 精液標(biāo)本的收集 標(biāo)本來源于2009年1月～2010年12月前來河北省計(jì)劃生育科學(xué)技術(shù)研究院和青縣計(jì)劃生育技術(shù)服務(wù)站男科門診就診的患者176例，不育時(shí)間為1年以上，年齡22～35歲。受試者禁欲3～7 d，取樣前3個(gè)月內(nèi)未服用對(duì)精子有影響的食物或藥物，6個(gè)月內(nèi)未使用過激素，除去精液中白細(xì)胞異常增多、精索靜脈曲張、輸精管梗阻和嚴(yán)重的全身性疾病患者。手淫法收集精液，標(biāo)本置37℃液化后作精液常規(guī)檢查，余下精液3000 r/min離心5 min，分離精漿用于MDA檢測。按照世界衛(wèi)生組織（WHO）的精液分析標(biāo)準(zhǔn)，選擇精子活力（a+b）級(jí)<50%、精子活率<60%、精子形態(tài)畸形率>30%的患者。本試驗(yàn)受試者自身對(duì)照分為服用營養(yǎng)素前組和服用營養(yǎng)素后組。男性不育患者在服用營養(yǎng)素前半個(gè)月內(nèi)進(jìn)行2次精液常規(guī)檢查，在服用營養(yǎng)素后的1、2、3個(gè)月末時(shí)各進(jìn)行1次精液常規(guī)檢查。

1.1.2 血樣采集 取肘內(nèi)側(cè)靜脈血，采血區(qū)皮膚依次經(jīng)過碘酒、酒精棉球消毒，用一次性真空采血管取靜脈血約2 ml，室溫靜置20 min后,2000 r/min離心5 min，取血清于塑料具塞離心管中，-20℃保存?zhèn)溆?。在服用營養(yǎng)素前7 d內(nèi)和服用營養(yǎng)素后1個(gè)月末時(shí)各采血1次，進(jìn)行MDA含量測定。

1.1.3 營養(yǎng)素服用法與用量 溢德生牌營養(yǎng)素膠囊由石家莊經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)利生技術(shù)開發(fā)有限公司提供，組成成分為維生素C、維生素E、鋅和硒，規(guī)格0.25 g/粒。用法：口服，3粒/次，1次/d，飯后半小時(shí)后用溫水送服。男性不育患者在第二次精液常規(guī)檢測后開始服用，連續(xù)服用3個(gè)月。

1.2 方法

精液常規(guī)檢驗(yàn)使用計(jì)算機(jī)輔助精子分析儀（CASA北京偉力精液分析系統(tǒng)）進(jìn)行精液常規(guī)檢查。MDA含量采用硫代巴比妥酸比色法測定，試劑盒均購自上海源葉生物科技有限公司，按說明書嚴(yán)格操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 10.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，服用營養(yǎng)素前后所有均數(shù)的比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 男性不育患者服用營養(yǎng)素前后精子參數(shù)各項(xiàng)均值比較

服用營養(yǎng)素后精子密度和精子活力明顯高于服用前（P＜0.05），精子畸形率明顯下降（P＜0.05），精子活率高于服用前，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），表明服用營養(yǎng)素后精子質(zhì)量有明顯改善。見表1。

2.2 服用營養(yǎng)素后血清和精漿中MAD水平

服用營養(yǎng)素后血清和精漿中MAD均明顯降低，與服用前比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表1 服用營養(yǎng)素前后精子質(zhì)量的變化（）

表1 服用營養(yǎng)素前后精子質(zhì)量的變化（）

注：與服用營養(yǎng)素前比較，*P<0.05

時(shí)間 例數(shù) 精子密度（×106/ml）服用營養(yǎng)素前服用營養(yǎng)素后1個(gè)月服用營養(yǎng)素后2個(gè)月服用營養(yǎng)素后3個(gè)月17617617617631.96±11.0946.35±12.01*50.75±10.56*51.25±11.09*精子活力（a+b）（%）27.31±11.9131.01±12.65*33.06±10.86*35.02±13.35*精子活率（%）57.09±6.3163.31±9.8666.27±9.7967.61±8.73精子畸形率（%）39.85±8.4723.79±8.65*24.29±9.36*20.89±9.67*

表2 服用營養(yǎng)素前后血清和精漿中MAD含量的變化（，nmol/ml）

表2 服用營養(yǎng)素前后血清和精漿中MAD含量的變化（，nmol/ml）

注：與服用營養(yǎng)素前比較，*P<0.05

時(shí)間 例數(shù)176176服用營養(yǎng)素前服用營養(yǎng)素后血清0.166±0.0810.105±0.016*精漿0.186±0.0870.091±0.013*

3 討論

環(huán)境污染、鉛鎘含量升高、鋅含量的降低[4]和病原體的侵襲等因素可使組織細(xì)胞產(chǎn)生過多的活性氧（ROS）和MDA，精子細(xì)胞對(duì)這些物質(zhì)較為敏感，因此易受到損傷。精液中ROS主要來源有2種途徑，白細(xì)胞和未成熟或形態(tài)異常的精子，ROS增高可使脂質(zhì)降解產(chǎn)物MDA增多，MDA的增多標(biāo)志著過氧化反應(yīng)程度的增加。本試驗(yàn)排除了精液中白細(xì)胞增多、生殖器和全身性疾病因素的影響，結(jié)果表明，不育癥患者M(jìn)DA升高是造成精子質(zhì)量下降的主要原因，也是男性不育的主要因素，營養(yǎng)素能使MDA含量迅速下降，精子質(zhì)量迅速提高。

營養(yǎng)素中的維生素C存在于細(xì)胞外液中，抑制羥氫氧基、過氧化物和過氧化氫自由基，防止精子凝集，并且有助于維生素E重復(fù)利用。維生素E在細(xì)胞膜上發(fā)揮作用，抑制H2O2，保護(hù)精子膜免受脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的攻擊。鋅參與組成過氧化物歧化酶，鋅的缺乏還可影響下丘腦—垂體—性腺軸，使垂體分泌的促性腺激素減少，導(dǎo)致性腺功能減退，睪酮下降，精子數(shù)量減少，質(zhì)量降低，蛋白質(zhì)合成障礙，精子形成停滯，精子活動(dòng)受到影響。硒是谷胱甘肽過氧化物酶復(fù)合體的必要組成部分，具有抗精子脂肪酸過氧化功能，它可協(xié)同維生素E發(fā)揮作用，使少精癥、精子活力低下，嚴(yán)重精子畸形癥得到改善。

ROS對(duì)精子的危害已成為公認(rèn)的事實(shí)，使用營養(yǎng)素能夠改善精液質(zhì)量的文章已有人報(bào)道[5-6]。根據(jù)營養(yǎng)素的上述作用，其可能是通過拮抗ROS對(duì)精子細(xì)胞的損傷，使MDA含量下降，使精液質(zhì)量得到改善。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，營養(yǎng)素能夠迅速、有效提高精子密度、精子活力和降低精子畸形率，MDA含量的減少表明脂質(zhì)過氧化程度降低，從而對(duì)精子的損傷減少。

本研究結(jié)果為男性不育者和接受輔助生殖技術(shù)治療前及欲求優(yōu)生的男性補(bǔ)充營養(yǎng)素提供了依據(jù)，MDA的測定可作為男性不育癥和過氧化反應(yīng)增強(qiáng)的一個(gè)診斷指標(biāo)。

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[2]劉容菊,李志凌.輔助生殖技術(shù)中預(yù)防活性氧對(duì)精子的損傷[J].生殖與避孕,2007,27(3):213-217.

[3]Yentilmen E,Yildirmis S,Yulug E,et al.Ham’s F-10 medium and Ham’s F-10 medium plus vitamin E have protective effect against oxidative stress in human semen[J].Urology,2006,67(2):384-387.

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[5]李紅,楊學(xué)農(nóng),趙萌,等.不育男性的精子DNA完整性與活性氧及尿酸的關(guān)系[J].中國計(jì)劃生育學(xué)雜志,2010,3(174):149-151.

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