李章海，李繼新，潘文杰，梁貴林，朱顯靈

（1.中國科技大學(xué)煙草與健康研究中心，合肥 230051；2.貴州省煙草公司，貴陽 550023；3.貴州省煙草科學(xué)研究所，貴陽 550023）

植物腺毛由一系列斜向的平周分裂所生成，可能由兩個基因位點所決定，能產(chǎn)生分泌物[1-4]。20世紀(jì)50—60年代，Onishi和Chakraborty等對煙草腺毛的化學(xué)成分進(jìn)行了深入研究[5-10]，認(rèn)為烤煙腺毛分泌物等葉表面提取物對煙葉香氣和吃味有重要作用。孔光輝等[11]發(fā)現(xiàn)，同一烤煙品種，隨部位的升高，煙葉腺毛密度增大，腺毛分泌物主要成分的含量也增加。周金仙等[12]研究認(rèn)為，生態(tài)因素和品種對煙葉腺毛密度均有較大的影響，但生態(tài)因素是影響煙葉腺毛密度的主要因素。冀浩等[13]研究認(rèn)為，葉表面提取物缺失對煙葉評吸質(zhì)量產(chǎn)生負(fù)面影響，香氣質(zhì)量下降；將葉表面提取物還原能部分恢復(fù)香氣質(zhì)量。筆者對貴州5個不同生態(tài)條件的煙葉表面物質(zhì)進(jìn)行了提取和測定，對提取后還原以及不同產(chǎn)地?zé)熑~表面提取物交叉還原等進(jìn)行了研究，擬探討煙葉表面提取物對煙葉香氣和風(fēng)格的影響。

1 材料與方法

1.1 樣品來源及產(chǎn)區(qū)生育期氣候資料

2008年采集道真、天柱、威寧、興義和貴定5縣云煙85烤后混合中部煙葉各2 kg，產(chǎn)區(qū)生育期氣候資料見表1。

表1 貴州5個典型產(chǎn)區(qū)烤煙生育期氣候資料Table 1 Climatic data of 5 typical production regions in Guizhou during tobacco growing period

1.2 栽培技術(shù)

選擇土壤肥力中等或中下等煙地，春節(jié)前和移栽前1個月各翻犁1次。采用傳統(tǒng)烤煙一壟雙行栽培法，壟寬1.3 m，溝寬0.5 m，雙行煙間行距0.8 m，溝間行距1.0 m，株距0.5 m，密度1 482株/667 m2。完全采用有機(jī)肥，不施任何無機(jī)化肥、農(nóng)藥和抑芽劑。有機(jī)肥以充分發(fā)酵農(nóng)家肥為主，移栽時施農(nóng)家肥750 kg/667 m2，油枯35 kg/667 m2；栽后每7～10天結(jié)合中耕培土淺施無病蟲害污染的清糞水，共 3次；栽后25～30 d追施油菜籽粉20 kg/667 m2。

1.3 樣品處理

將煙葉在溫度22 ℃和相對濕度65%條件下平衡水分7 d，分別在葉基、葉中間和葉尖取8 cm ×5 cm長方塊，提取葉表面物質(zhì)。

1.4 試驗處理

將處理后的煙葉樣品分為4份，每份1個處理200 g左右，重復(fù)1次。處理方法見表2。

表2 試驗處理Table 2 Experiment treatments

由于水分損失較多，需再進(jìn)行回潮和平衡水分處理）。等量加回處理是指對提取葉表面物，稱取50 g煙絲裝入圓底燒瓶中，按表2處理準(zhǔn)確移取50 g煙葉的葉表面提取濃縮物，加入25 mL 95%酒精中溶解均勻，用噴霧器將提取液按試驗處理要求均勻噴至煙絲上，邊噴邊旋轉(zhuǎn)圓底燒瓶，使提取物與煙絲充分混合，并開口放置讓酒精揮發(fā)掉。各處理卷制40支重量相等煙支用于評吸。

1.5 煙葉表面物質(zhì)提取

稱取用于提取葉表面物煙葉樣品200 g左右，先后在裝有4 000 mL二氯甲烷的3個燒杯中浸洗，在第1只燒杯中浸洗4次，每浸1次在溶劑中停留2 s，二氯甲烷稍揮發(fā)，在第2、3只燒杯中重復(fù)上述過程，但每次提取葉片順序相反。將含有葉面提取物的溶劑過濾到平底燒瓶內(nèi)，在濾紙內(nèi)放無水硫酸鈉50 g，過濾后燒杯及濾紙均用二氯甲烷沖洗2次。浸提液在40 ℃，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至25 mL，移入琥珀色瓶中，燒瓶用二氯甲烷沖洗2次。置于0 ℃左右的暗處備測。

1.6 葉表面提取物的分析

1.6.1 內(nèi)標(biāo)物的配制 準(zhǔn)確稱取0.336 g芳樟醇于500 mL容量瓶中用異丙醇定容，轉(zhuǎn)移到試劑瓶中備用。

1.6.2 樣品分析 準(zhǔn)確移取煙葉葉表面提取濃縮物2 mL，加入1 mL內(nèi)標(biāo)，再濃縮至1 mL，進(jìn)行GC或GC/MS分析。

1.6.3 色譜條件 TRACE GC氣相色譜儀（Finnigan 公司）；色譜柱DB-5 30m×0.25 mmid×0.25 umdf.；初溫100 ℃，恒溫2 min后以4 ℃/min升至180 ℃，保持30 min，以8 ℃/min升至280 ℃，保持25 min；進(jìn)樣口：250 ℃，F(xiàn)ID：280℃；He為載氣，流速為1.5 mL/min；分流流量：60 mL/min；進(jìn)樣量：2.0 μL。

1.6.4 GC-MS條件 TurboMass色質(zhì)聯(lián)用儀（PE公司）；色譜柱：DB-5 30m×0.25mmid×0.25umdf.；載氣：He；流速為1.5 mL/min；傳輸線溫度：250 ℃，離子源溫度：170 ℃；EI能量：70 eV，掃描范圍：35～450 uam，其余色譜條件同GC。

1.7 煙葉評吸

由貴州省級7位評吸專家進(jìn)行評吸，評吸人員經(jīng)過專門的標(biāo)準(zhǔn)芳香參照物的訓(xùn)練，熟悉標(biāo)準(zhǔn)香料的香氣。芳香類型分為花香、木香、蜜甜香、果香、青香、堅果香、藥草香、辛香、焦香、豆香、脂臘香、干草香等。每位評吸人員對單料煙樣品評吸后，確認(rèn)感受到芳香類型（每位可確認(rèn)多種）。以多數(shù)評吸人員（50%以上）確認(rèn)的芳香類型為主要芳香；僅個別評吸人員確認(rèn)的芳香類型為似有芳香；介于二者之間的為次要芳香。并對每個樣品香氣特點的表現(xiàn)和香氣（量）豐富程度進(jìn)行描述。

2 結(jié) 果

2.1 表面提取物含量差異

由表3可見，不同產(chǎn)地有機(jī)煙葉表面提取物總量表現(xiàn)為，道真＞威寧＞天柱＞貴定＞興義，最高與最低相差1.54倍，變異系數(shù)為16.07%。

烷烴類總量（不含新植二烯，下同）表現(xiàn)為，威寧＞道真＞天柱＞興義＞貴定，最高與最低相差1.88倍，變異系數(shù)為26.45%；9種烷烴類物質(zhì)變異系數(shù)為29.37%～69.93%，最高與最低相差2.21～5.25倍，其中，道真和威寧各有4個成分為最高；天柱有1個成分為最高，1個成分為最低；興義有1個成分為最低；貴定有7個成分為最低。萜烯類表現(xiàn)為，貴定＞道真＞天柱＞威寧＞興義，最高與最低相差2.22倍，變異系數(shù)為28.75%；8種萜烯類物質(zhì)變異系數(shù)為8.98%～80.22%，最高與最低相差1.22～5.18倍，其中，天柱有4個成分為最高；道真和貴定各有2個成分為最高，1個成分為最低；威寧和興義各有3個成分為最低。

可見，不同產(chǎn)地有機(jī)煙葉表面提取物總量、烷烴類（葉表面蠟質(zhì)成分）和萜烯類（主要為腺毛分泌物）差異都明顯。

表3 不同產(chǎn)地有機(jī)煙葉表面提取物含量Table 3 Organic tobacco leaf cuticular components from different regions

2.2 香型和芳香類型

從表4可見，香型以中間香型為主，但不同產(chǎn)地之間有香型細(xì)分差異。道真、天柱和興義為中偏清風(fēng)格，威寧為清偏中風(fēng)格。不同產(chǎn)地芳香類型有較大差異，興義煙葉的芳香類型以辛香、豆香、焦香、花香為主，兼有青香、蜜甜香、木香；貴定煙葉芳香類型以豆香、辛香、花香為主，兼有青香、蜜甜香、木香；天柱煙葉的芳香類型以果香、焦香、花香為主，兼有青香、蜜甜香、豆香、木香、辛香；威寧煙葉的芳香類型以木香、堅果香、豆香為主，兼有辛香、焦香、青香、果香；道真煙葉的芳香類型以辛香、堅果香、果香為主，兼有青香、木香、蜜甜香、豆香。

表4 不同產(chǎn)地有機(jī)煙葉香型和芳香類型Table 4 Aroma and flavor styles of organic tobacco leaves from different regions

2.3 表面提取物對煙葉香氣風(fēng)格的影響

將不同產(chǎn)地有機(jī)煙葉表面提取物按相同量滴在濾紙中間，并編號密封，讓不同人員嗅聞，能明顯感覺不同產(chǎn)地?zé)熑~表面提取物的嗅香差異，特別讓長期在生產(chǎn)收購一線工作人員嗅聞，能準(zhǔn)確辨別出滴有當(dāng)?shù)責(zé)熑~葉表面提取物的濾紙。據(jù)他們說“帶有當(dāng)?shù)責(zé)熑~葉表面提取物濾紙散發(fā)出的香味與收購時煙葉散發(fā)出的香味相同”。這在一定程度上，佐證了煙葉葉表面提取物與煙葉散發(fā)的嗅香關(guān)系密切。

提取煙葉表面提取物的處理（X2、G2、T2、W2和D2）與未提取煙葉表面提取物的處理（X1、G1、T1、W1和 D1）相比，煙葉上口時主要芳香類型并無明顯差異，而后段有部分芳香類型缺失（表5）；但多數(shù)香氣（量）豐富程度下降（稍欠）。而提取煙葉表面提取物后再等量加回原提取物的處理（X3、G3、T3、W3和D3）香氣豐富感有一定回復(fù)，但不能完全恢復(fù)，說明這種用溶劑提取后再回復(fù)與原生性（未提取的煙葉）畢竟還是有差異的，這與冀浩等[13]的研究結(jié)果相近。提取葉表面物的煙葉，再加入另一產(chǎn)地?zé)熑~提取物（等量）的處理（X4和G4、T4和W4）則表現(xiàn)為稍帶另一產(chǎn)地?zé)熑~的部分芳香類型，但總體不會改變原產(chǎn)地的芳香類型；且比提取煙葉表面提取物的處理香氣豐富感好，但不及未提取煙葉表面提取物的處理。這一評吸結(jié)果說明煙葉表面提取物主要與煙葉香氣豐富感有關(guān)，而與煙葉芳香類型僅有一定的關(guān)系。

表5 葉表面提取物對煙葉香氣風(fēng)格的影響Table 5 Effect of leaf cuticular components on tobacco leaf aroma style

3 討 論

煙草腺毛分泌物被認(rèn)為對煙草品質(zhì)和香吃味有良好的貢獻(xiàn)，煙草腺毛分泌物的化學(xué)成分及其含量不僅受內(nèi)在遺傳組成的影響，而且受其生長環(huán)境眾多外在因素的影響[10]。本項研究在相同品種和栽培技術(shù)條件下，對貴州省5個不同生態(tài)條件煙葉表面提取物及其風(fēng)格進(jìn)行比較，天柱、興義和威寧是貴州偏清香型煙葉產(chǎn)區(qū)，煙葉表面提取物中萜烯類含量明顯偏低，烷烴類含量偏高；而貴定是貴州典型中間香型煙葉產(chǎn)區(qū)，煙葉表面提取物中萜烯類含量明顯偏高，而烷烴類含量偏低。這種差異與各地降水、溫度和空氣濕度差異不明顯；與當(dāng)?shù)厝照沼幸欢ǖ年P(guān)系，如貴定烤煙生育期內(nèi)云霧天氣較多，日照時數(shù)較短不利于蠟質(zhì)成分的形成，而有利于腺毛分泌物的產(chǎn)生。而威寧、興義和天柱的日照時數(shù)相對較長，則有利于蠟質(zhì)成分的形成，不利于萜烯類物質(zhì)形成。當(dāng)然，煙葉表面提取物中與生態(tài)條件的關(guān)系需進(jìn)一步的研究和探索。

貴州不同產(chǎn)地?zé)熑~芳香類型種類差異不明顯，但主次有一定的差別，這可能是體現(xiàn)不同產(chǎn)地?zé)熑~風(fēng)格特征因素之一。多數(shù)煙葉主要芳香類型與煙葉表面提取物有一定關(guān)系，但不明顯，可能煙葉芳香類型是由煙葉內(nèi)多種致香成分共同作用的結(jié)果。

4 結(jié) 論

（1）不同產(chǎn)區(qū)有機(jī)煙葉表面提取物無論烷烴類，還是萜烯類均存在明顯差異，烷烴類總量表現(xiàn)為，威寧＞道真＞天柱＞興義＞貴定，威寧煙葉烷烴類總量是貴定的1.88倍；而萜烯類表現(xiàn)為，貴定＞道真＞天柱＞威寧＞興義，貴定煙葉萜烯類總量是興義的2.22倍。

（2）不同產(chǎn)區(qū)煙葉表面提取物的嗅香有明顯差異，與各地?zé)熑~自然散發(fā)出的香氣相近。煙葉表面提取物對煙葉芳香類型有一定的影響，對香氣（量）豐富程度影響較大。缺少煙葉表面提取物部分芳香類型會缺失，香氣豐富感下降。

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