俞建芬，顧建明，張新民

江蘇省吳江市中醫(yī)醫(yī)院，吳江 215221

復方苦參乳膏是本院藥劑科會同皮膚科研制的中藥外用型乳膏制劑，主要用于治療濕疹、瘙癢、過敏性皮炎。其處方由苦參、蛇床子、白鮮皮、黃柏、土荊皮、地膚子、紫草等中藥材組成。蛇床子素作為該方中君藥之一的蛇床子的主要成分，其含量將直接影響該藥的療效。目前蛇床子素的含量測定方法有薄層掃描法[1]、分光光度法[2]、氣相色譜法[3]和高效液相色譜法[4-5]等。本課題組采用高效液相色譜法對復方苦參乳膏中蛇床子素的含量進行測定，以便對該制劑的質量進行控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

美國Waters 2695-UV2489液相色譜儀；Mettler Toledo XS105電子分析天平；Q/BKYY32-2000電熱恒溫水浴鍋；HU-6150F超聲波清洗器。

1.2 試藥

復方苦參乳膏（吳江市中醫(yī)醫(yī)院吳江市第二人民醫(yī)院，規(guī)格:20g/盒，每克乳膏含生藥0.06g，批號:20101008、20110117、20110120、20110125、20110410、20110421、20110427）；蛇床子素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號:110822-200407）。乙腈為色譜純；其他試劑均為分析純；水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Turner C18柱（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相:乙腈-水（65∶35）；流速:1.0 mL·min-1；柱溫:30℃；檢測波長:322 nm；進樣量:10μL。理論塔板數(shù)按蛇床子素峰計算應不低于3000。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取蛇床子素對照品4.9 mg置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液，濃度為 49μg·mL-1。

2.2.2 供試品溶液 取復方苦參乳膏1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，60℃水浴回流30 min使樣品溶化，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，冰箱（0～4℃）放置過夜，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.2.3 陰性供試品溶液 按照復方苦參乳膏的處方和制法，制備不含有蛇床子的乳膏作為陰性樣品；取陰性樣品約1 g，精密稱定，按供試品溶液的制備方法制備，即得陰性供試品溶液。

2.3 方法學考察

2.3.1 干擾試驗 精密吸取蛇床子素對照品溶液（1.96μg·mL-1）、供試品溶液及陰性供試品溶液各10μL，按照“2.1”色譜條件進樣測定。結果表明，陰性供試品色譜中在與蛇床子素對照品保留時間相應的位置無色譜峰，說明處方中其他藥味對測定無干擾。見圖1。

圖1 對照品（A）、樣品（B）及陰性供試品（C）色譜圖

2.3.2 線性范圍的考察 分別精密量取上述蛇床子素儲備液 1 mL 置 10、25、50、100 mL 量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，得濃度為4.9、1.96、0.98、0.49μg·mL-1的對照品溶液；精密量取上述對照品溶液系列及對照品儲備液各10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標，以對照品濃度為橫坐標，繪制標準曲線，回歸方程為 Y=3.028×104X-5.699，r=0.9999。結果表明，蛇床子素在 0.49～49μg·mL-1的濃度范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.3.3 精密度試驗 在上述色譜條件下，精密吸取上述蛇床子素對照品溶液10μL，連續(xù)進樣5次，測得蛇床子素峰面積平均值為61891，RSD為0.61%。表明儀器精密度良好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一樣品溶液10μL，分別在 0、1、2、4、6、8 h 進樣，結果表明，樣品溶液在8 h內穩(wěn)定性良好，蛇床子素的峰面積平均值為85682，RSD為0.86%。

2.3.5 重復性試驗 精密稱取同一批樣品6份，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液。按上述色譜條件測定，計算。結果平均含量為 48.49μg·g-1，RSD 為1.68%。表明此法重復性良好。

2.3.6 加樣回收率試驗 精密稱取已測知含量（48.49μg·g-1）的樣品約 0.5g，共 6 份，分別置具塞錐形瓶中，精密加入蛇床子素對照品溶液（0.98μg·mL-1）25 mL，照“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定，外標法計算。測得平均回收率（n=6）為96.33%，RSD為2.80%。

2.3.7 樣品含量測定 取7批復方苦參乳膏樣品，按擬定方法測定所含蛇床子素的含量，每批樣品取2份，每份溶液進樣2次，并計算平均含量。結果，7批樣品中蛇床子素的平均含量分別為79.13、48.49、61.78、65.22、50.96、43.97、43.21μg·g-1。

3 討 論

3.1 提取溶劑的選擇

本實驗比較了甲醇提取與無水乙醇提取該制劑中的蛇床子素，結果顯示，以無水乙醇作溶劑，提取不完全，去除基質效果不佳；用甲醇提取，提取完全，去除基質效果較好。

3.2 供試品溶液制備方法的確定

由于本品為O/W型乳膏劑，含白凡士林、脂肪酸甘油酯、羊毛脂、液體石蠟等基質，約占樣品總量的2/3，嚴重影響高效液相色譜含量測定。為了更好地除去基質，保證蛇床子素提取完全，采用超聲前60℃水浴回流30 min，使樣品溶化，超聲后冷藏（0～4℃）放置過夜，經(jīng)試驗考察，該提取方法能去除大量基質，從而不影響蛇床子素的含量測定。

3.3 提取時間與方法的選擇

對甲醇超聲提取時間（30、45、60min）進行了考察，顯示甲醇提取的三個時間結果無明顯區(qū)別；另外，通過甲醇超聲處理0.5 h與加熱回流0.5 h進行比較，提取結果相近，因此采用前者進行乳膏蛇床子素的提取。

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