俞玉忠 穆斌

用小鼠來(lái)檢測(cè)藥品的異常毒性，是各國(guó)藥品檢驗(yàn)中用得最多的生物檢定方法，我國(guó)從1953年第一部藥典發(fā)行以來(lái)，異常毒性檢測(cè)方法一直被收載在各版藥典中，并且不斷地進(jìn)行了改進(jìn)。從2005年版藥典開始，雖然從很多品種的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中刪去了異常毒性的檢查項(xiàng)目，但一直到2010年版藥典仍然保留了部分品種的異常毒性檢查項(xiàng)目，并且在附錄中也介紹了異常毒性檢查法［1］。此外，在新藥的臨床安全性評(píng)價(jià)試驗(yàn)中，小鼠仍得到了廣泛應(yīng)用［2-3］，有時(shí)還用小鼠做成動(dòng)物模型［4］，對(duì)新開發(fā)藥物的療效進(jìn)行研究。靜脈注射和腹腔注射是小鼠最常見的兩種給藥途徑，小鼠的尾靜脈注射對(duì)初學(xué)者來(lái)說(shuō)，可能有一定難度，但注射是否成功容易判斷，不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響。而腹腔注射雖然看似簡(jiǎn)單，可如果操作不當(dāng)，很容易造成注射失敗，并不被發(fā)現(xiàn)，直接影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果。本文主要對(duì)小鼠腹腔注射的正確方法及注射時(shí)需注意的事項(xiàng)進(jìn)行了介紹。

1 小鼠的選擇

1.1 小鼠應(yīng)同一來(lái)源同品系，雌者無(wú)孕，健康無(wú)傷，毛色光滑，眼睛紅亮，活潑，體重17 ～20 克［5］。

1.2 盡量選擇雌性小鼠，因?yàn)檎猴曫B(yǎng)的雄性小鼠時(shí)常打斗，如確實(shí)需要選擇雄性小鼠則應(yīng)分開籠飼。

2 腹腔注射的方法

2.1 小鼠的抓取 左手握小鼠，用拇指、食指捏住小鼠頸背部，用無(wú)名指及小指固定其尾和后肢，腹部向上，頭呈低位［5］。

2.2 在下腹部離腹白線約0.5 cm處將注射針刺入皮下，沿皮下向前推進(jìn)3～5 cm，然后使針頭與小鼠腹部約成30°角刺入腹腔，針頭刺入的速度要快，剛開始刺時(shí)會(huì)有一種明顯的抵抗力，那是因?yàn)槭笃ぞ哂许g性，后來(lái)突然會(huì)有一種抵抗力消失的感覺，說(shuō)明針頭已刺入腹腔內(nèi)，此時(shí)就可以開始進(jìn)藥。

2.3 注射完畢后，輕輕將針頭旋轉(zhuǎn)一定角度，緩慢拔出針頭，防止藥液外漏。

2.4 注射成功與否的判斷 刺入腹腔后可輕拉針筒，如確認(rèn)無(wú)血液或腸內(nèi)容物流入，說(shuō)明注射成功。

3 試驗(yàn)技巧

3.1 小鼠腹腔類似于小氣球，扎針前有阻力，扎穿后可直接進(jìn)入，里面空空的。

3.2 如以前沒(méi)有腹腔注射經(jīng)驗(yàn)，則在做實(shí)驗(yàn)前應(yīng)先練習(xí)幾次，可以選已做完實(shí)驗(yàn)需淘汰的小鼠來(lái)練習(xí)，如果條件允許，最好選跟試驗(yàn)條件要求一致的健康小鼠，用純化水替代藥品進(jìn)行注射，注射后再觀察一段時(shí)間。這樣不僅能體驗(yàn)手感，還可以判斷出針頭是否刺入內(nèi)臟。

3.3 針頭刺入小鼠腹腔內(nèi)一般不超過(guò)1 cm，如刺入過(guò)淺，不易刺破腹腔壁，過(guò)深的話就容易刺破內(nèi)臟。

4 注意事項(xiàng)

4.1 注射時(shí)，小鼠頭部一定呈低位，尾部稍稍提起，使內(nèi)臟前移。

4.2 有的實(shí)驗(yàn)人員為了避免針頭刺入內(nèi)臟，針頭剛插入皮膚就向上挑起，這是一種不正確的操作手法。首先，針頭剛插入皮膚時(shí)可能還沒(méi)刺破腹腔壁，此時(shí)挑起注射往往只是將藥液注射在皮下，而皮下注射和腹腔注射是兩種不同的給藥途徑。另外，針頭挑起后，一不小心就容易從皮膚上掉出，致使注射不能成功。

5 結(jié)論

5.1 腹腔注射成功的關(guān)鍵在于個(gè)人手法，只要按操作規(guī)程要求進(jìn)行操作，不擅自創(chuàng)新或改變注射方法，就能順利完成實(shí)驗(yàn)。

5.2 實(shí)驗(yàn)人員膽子要大，心要細(xì)，注射時(shí)應(yīng)做到穩(wěn)、準(zhǔn)、狠，這樣操作起來(lái)就會(huì)更順利。

［1］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典.第2部.北京，中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:98-99，附錄XI C.

［2］ 劉冬戀，馬松濤，曾仁勇，等.肉桂揮發(fā)油對(duì)小鼠的半數(shù)致死量測(cè)定.西南國(guó)防醫(yī)藥，2010，20(5):481-482.

［3］ 吳正平.一枝黃花皂苷對(duì)小鼠腹腔注射半數(shù)致死量(LD50)的測(cè)定.黑龍江中醫(yī)藥，2009，(3):41-42.

［4］ 石丹萍，陳小嬌，陳銀寶，等.腹腔注射七氟烷對(duì)小鼠鎮(zhèn)痛及催眠作用的影響.中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2010，5(3):1-2.

［5］ 中國(guó)藥品生物制品鑒定所.中國(guó)藥品檢驗(yàn)總所.中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范.北京，中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:304-306.