付言濤,孫 輝,鄭海波,趙吉生

(1.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院甲狀腺外科,吉林長春 130033;2.吉林大學(xué)第二臨床學(xué)院麻醉科）

應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),可從整體上定性和定量檢測分析甲狀腺腫瘤細(xì)胞經(jīng)化療藥物作用前后細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)分子的變化,在蛋白水平進(jìn)一步探討藥物作用的機(jī)制及尋找新藥靶點(diǎn)有重要的意義。泰索帝是一種紫杉類抗腫瘤藥物,臨床研究提示它能夠改善甲狀腺未分化癌的預(yù)后,但尚無從整體蛋白質(zhì)水平上對其作用的機(jī)制進(jìn)行相關(guān)研究。

本實(shí)驗擬從蛋白質(zhì)組學(xué)水平觀察泰索帝作用甲狀腺未分化癌細(xì)胞前后蛋白表達(dá)譜的變化,探討泰索帝對人甲狀腺未分化癌細(xì)胞的作用機(jī)制,從蛋白質(zhì)組學(xué)角度進(jìn)一步深化對泰索帝抗腫瘤作用機(jī)制的認(rèn)識。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞及試劑 人甲狀腺未分化癌細(xì)胞系(TA-K）由日本東北大學(xué)醫(yī)學(xué)部第二外科惠贈;變性劑UREA(尿素）,Thiourea(硫脲）,表面活性劑CHAPS,載體兩性電解質(zhì)ampholyte,還原劑TBP(三丁基膦）,還原劑DTT(二硫蘇糖醇）,Iodoacetamide(碘乙酰胺）,SDS(十二烷基磺酸鈉）,Arc(丙烯酰胺）,PDA(哌嗪雙丙烯酰胺）,TEMED(催化劑）,APS(過硫酸胺）,礦物油,低熔點(diǎn)瓊脂糖,ReadyStripTM IPG膠條(17 cm）均購自美國Sigma-Aldrich公司;Bio-Rad AC DC蛋白定量試劑盒購自BIO-RAD公司;IPG膠條購自BIO-RAD公司;泰索帝購自法國安萬特公司。

1.1.2 主要儀器有PROTEAN IEF系統(tǒng)組件(BIORAD公司）;PROTEANⅡxi系統(tǒng)組件(BIO-RAD公司）;4700TOF-TOF質(zhì)譜儀(ABI公司）;GS-800校準(zhǔn)型光密度掃描成像系統(tǒng)(BIO-RAD公司）等。

1.1.3 主要溶液有細(xì)胞培養(yǎng)液(WE,10%胎牛牛血清）;細(xì)胞樣品裂解液(7 M UREA,2 M thiourea,4%w/v CHAPS,40 mM Tris堿,與1%v/v蛋白酶抑制劑的混合液）;水化液(8 M urea,2%w/v CHAPS,20 mM DTT,0.2%v/v Bio-lyte 3-10,0.002%痕量溴酚藍(lán)）。平衡緩沖母液(50 mM Tris-HCl,pH 8.8,6 M urea,30%甘油,2%SDS）;12%SDS-PAGE凝膠緩沖液(12%Arc,0.38 mmol/L Tris(pH 8.8）,0.1%SDS,0.08%APS,0.04%TEMED）。

1.2 蛋白質(zhì)組學(xué)研究

1.2.1 樣品制備 當(dāng)貼壁生長于WE培養(yǎng)液中的TA-K細(xì)胞處于生長對數(shù)期時,將泰索帝以0.01 μ g/mL的濃度加入細(xì)胞培養(yǎng)液,共同培養(yǎng)72 h.對溶媒組加入等體積的0.002 6%乙醇濃度溶液。胰蛋白酶消化細(xì)胞,收集,磷酸緩沖液(PBS）洗滌、離心(1 500×g,10 min）3次。加入裂解緩沖液(1.5×106個細(xì)胞大約加入 100 μ L裂解液）,吹打混勻.液氮中反復(fù)凍融3次,在室溫下融化。加 50 μ g/ml RNase及200 μ g/ml Dnase,4℃放置 15 min。經(jīng)高速離心 15 000轉(zhuǎn),15 min,取上清,采用Bio-Rad RC DC蛋白定量試劑盒進(jìn)行蛋白定量。分裝至 Eppendof管里保存在-80℃?zhèn)溆?/p>

1.2.2 膠條溶脹與水化 17 cm水化盤中加入含有100 μ g蛋白的 400 μ L水化液,將IPG 膠條覆蓋到液面上,水化盤置于PROTEAN IEF電泳儀中,被動水化,20℃過夜(＞12 h）.

1.2.3 第一向等電聚焦 將充分溶脹的 IPG膠條取出,置于聚焦盤的相應(yīng)聚焦槽中,再將聚焦盤置于PROTEAN IEF電泳儀中,20℃、60 kVh進(jìn)行等電聚焦.

1.2.4 第二向SDS-PAGE取出聚焦好的IPG膠條,經(jīng)含有1%DDT和5%碘乙酰胺的平衡緩沖液平衡30分鐘,以還原蛋白巰基,移至預(yù)先灌注好的12%SDS-PAGE凝膠頂端,與膠面完全接觸,將凝膠移至垂直電泳槽內(nèi).起始電流為10 mA/gel,30分鐘后,加大電流至24 mA/gel,待指示劑達(dá)到底部邊緣時停止電泳.取出凝膠,切角做記號.

1.2.5 銀染 程序設(shè)置如下

1.2.6 圖像掃描與分析 凝膠經(jīng)膠體銀染色后,使用PowerLook 2100XL型光密度掃描儀和PHOTOSHOP CS軟件對凝膠進(jìn)行掃描成像。在PDQuest雙向電泳分析軟件的輔助下,對圖像進(jìn)行背景消減、斑點(diǎn)檢測、匹配、獲取斑點(diǎn)位置坐標(biāo)等分析。蛋白質(zhì)點(diǎn)的量表示為該點(diǎn)的所有像素強(qiáng)度值的總和,并將各點(diǎn)含量表示為相對含量,即單個蛋白質(zhì)點(diǎn)的量占該塊膠內(nèi)所有蛋白質(zhì)點(diǎn)總量的百分?jǐn)?shù)。

1.2.7 差異蛋白質(zhì)點(diǎn)的選擇 實(shí)驗共重復(fù)3次,每次均采用相同實(shí)驗條件,以保證較好的可重復(fù)性。實(shí)驗組與對照組各選定一塊“平均膠”作為基準(zhǔn)膠。所謂“平均膠”即通過對組內(nèi)各塊凝膠進(jìn)行匹配分析,蛋白質(zhì)點(diǎn)顯示比較均勻,雜質(zhì)斑點(diǎn)少,最能體現(xiàn)該組蛋白質(zhì)點(diǎn)分布狀態(tài)的一塊凝膠。差異蛋白質(zhì)點(diǎn)的選擇借助圖像分析軟件,以平均膠為基準(zhǔn),參考其它膠,選擇組間表達(dá)差異明顯,組內(nèi)表達(dá)含量穩(wěn)定、位置恒定的點(diǎn)作為目標(biāo)點(diǎn)。確定差異點(diǎn)后在凝膠上切取相應(yīng)的點(diǎn),去離子水洗滌,甲醇固定,-80℃凍干保存。

1.2.8 蛋白質(zhì)分子的檢測 采用MALDI-TOF-S進(jìn)行蛋白質(zhì)肽質(zhì)量指紋譜的分析,蛋白質(zhì)的鑒定、質(zhì)譜打分結(jié)果和肽段匹配信息等以MASCOT為搜索引擎在NCBInr數(shù)據(jù)庫檢索(www.matrixscience.com）。

1.3 相關(guān)分子的免疫組化研究

根據(jù)質(zhì)譜分析、蛋白鑒定結(jié)果,選取兩種與細(xì)胞凋亡或藥物作用相關(guān)的蛋白質(zhì),購買抗體,進(jìn)行免疫組化染色。每種蛋白質(zhì)染色分三組,正常細(xì)胞,乙醇對照組細(xì)胞,加泰索帝組細(xì)胞。細(xì)胞培養(yǎng)72 h,胰蛋白酶消化,PBS沖洗3次,離心收集細(xì)胞鋪片,用冷丙酮固定10 min,Triton-X 100洗10 min,PBS洗5min×3次;用3%H2O2孵育25 min,阻斷內(nèi)源性氧化酶,PBS洗 5 min×3;正常羊血清50 μ l/片滴于組織片上,室溫下孵育20 min,封閉非特異性位點(diǎn);倒去多余血清,分別滴加選定的蛋白抗體,50 μ l/片,室溫 1小時,PBS洗5 min×3;滴加生物素化羊抗兔IgG與玻片上 ,50 μ l/片 ,37℃30min,PBS 洗5 min×3;滴加辣根過氧化物酶(HRP）標(biāo)記的親和素,50 μ l/片,37℃30分鐘,PBS洗5分鐘×3;DAB顯色,蒸餾水終止反應(yīng),蘇木素復(fù)染核,弱氨水中分化/鹽酸返藍(lán),酒精逐級脫水,二甲苯透明,樹膠封片。顯微鏡下觀察其表達(dá)情況。

1.4 Western blot檢測蛋白表達(dá)

各取50 μ g蛋白 ,上樣于12%SDS-PAGE,再轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜,5%脫脂奶粉封閉1小時,加入蛋白抗體,4℃過夜,次日用TBS洗滌3次(每次15分鐘）,加入ECL顯色液,X光膠片曝光沖洗,以β-actin做內(nèi)參照。

2 結(jié)果

2.1 雙向電泳凝膠圖

實(shí)驗共重復(fù)3次,泰索帝0.01 μ g/mL作用TA-K細(xì)胞72 h后的實(shí)驗組與對照組分別得到3幅雙向電泳凝膠圖(圖1）,以平均膠為參考標(biāo)準(zhǔn),凝膠圖像匹配率分別為80.5%(泰索帝組）和78.5%(溶媒組）。目前認(rèn)為,凝膠圖像匹配率在75%以上即可判定圖像重復(fù)性較好。由PHOTOSHOP CS軟件和PDQuest雙向電泳分析軟件2.2質(zhì)譜分析,質(zhì)譜分析結(jié)果見表1。

圖1 泰索帝作用前后2-DE凝膠圖

表1 差異蛋白質(zhì)譜分析結(jié)果

實(shí)驗組與對照組相比較,經(jīng)泰索帝處理后,表達(dá)明顯上調(diào)的蛋白有:多聚(ADP-核糖）聚合酶[poly(ADP-ribose）polymerase,PARP],ADP-核糖焦磷酸酶(ADP-ribose pyrophosphatase）,matrin 3,細(xì)胞凋亡易感蛋白(cellular apoptosis susceptibility protein,CAS）。表達(dá)下降蛋白有:熱休克蛋白27(heat shock proteins 27,HSP27）,未命名蛋白質(zhì)(unnamed protein product）。

2.2 PARP與HSP27免疫組化染色

選取PARP抗體TBX2與HSP27抗體,對正常組,乙醇對照組,泰索帝組細(xì)胞進(jìn)行免疫組化染色比較。PARP染色顯示,正常組和乙醇對照組PARP變化不大,泰索帝組較乙醇對照組棕色顆粒明顯明顯增多(見圖2、圖3）。HSP27染色顯示應(yīng)用泰索帝作用后,HSP27棕色顆粒較正常組和乙醇組減少(見圖4,圖5）,與2-DE灰度變化相一致。

2.3 PARP與HSP27蛋白水平分析

應(yīng)用PARP抗體與HSP27抗體,對乙醇對照組、泰索帝組蛋白質(zhì)進(jìn)行Western blot檢測(重復(fù)2次）,檢測結(jié)果顯示,泰索帝能夠增加PARP的表達(dá),降低HSP27的表達(dá)(圖6）。

圖2 溶媒組PARP染色(×40）

圖3 泰索帝組PARP染色圖片(×40）

圖4 溶媒組 HSP染色(×40）

圖5 泰索帝組HSP染色(×40）

圖6 PARP與HSP27免疫印跡檢測

3 討論

甲狀腺未分化癌(ATC）是高度惡性的腫瘤,其化療在腫瘤局部控制與延緩遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移上具有重要的意義。但目前的化療藥物與化療方案,效果欠佳,并不能明顯的改善ATC的預(yù)后。泰索帝是最應(yīng)用臨近床的一種紫杉類化療藥物,在體外對多種細(xì)胞系顯示細(xì)胞毒性作用,可以直接誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,其對非小細(xì)胞肺癌、晚期乳腺癌、卵巢癌、胃癌等臨床效果顯著,化療效果明顯優(yōu)于不含泰索帝藥物的方案。曾有臨床試驗證實(shí),紫杉醇較其它化療藥物能夠延長ATC的生存期[2-4]。且有研究證實(shí),ATC之所以耐藥,是因為他能夠合成P-gp和MRP[5],這兩種蛋白能夠把化療藥物排出細(xì)胞外,泰索帝細(xì)胞內(nèi)濃度是紫杉醇的3倍,應(yīng)當(dāng)是一個比較有希望的化療藥物。既往研究證實(shí)對ATC有明顯的抑制作用[6-7]。

本實(shí)驗通選擇最佳藥物作用濃度0.01μ g/mL,作用時間72小時,與對照組進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)研究。2-DE顯示有9個蛋白差異點(diǎn),應(yīng)用質(zhì)譜分析,6個蛋白點(diǎn)質(zhì)譜顯示陽性。灰度分析結(jié)合質(zhì)譜結(jié)果顯示,上調(diào)的蛋白質(zhì)有PARP,ADP-核糖焦磷酸酶,matrin 3,CAS;下調(diào)的蛋白質(zhì)有HSP27,unnamed protein product。免疫組化與Western blot證實(shí)PARP和HSP27的變化與2-DE、質(zhì)譜分析蛋白鑒定結(jié)果相一致。

3.1 多聚(ADP-核糖）聚合酶(PARP）

在細(xì)胞受到外界損傷因素作用時,DNA發(fā)生斷裂,PARP結(jié)合到DNA斷裂口,其催化活性被激活,以尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide-adenine dinucleotide,NAD+）為底物,催化其裂解為二磷酸腺苷核糖(ADP-ribose）和尼克酰胺兩部分,并將ADP-ribose轉(zhuǎn)移至受體蛋白谷氨酸殘基上,對多種受體蛋白進(jìn)行修飾,如染色質(zhì)蛋白多聚(ADP-核糖）基化后,活性受抑制并與DNA分離、組蛋白多聚(ADP-核糖）基化后,可使染色質(zhì)結(jié)構(gòu)松散修飾后受體蛋白,進(jìn)而發(fā)生一系列級聯(lián)反應(yīng),使細(xì)胞對外界刺激作出應(yīng)答。如果PARP本身發(fā)生多聚(ADP-核糖）基化后,因電荷排斥作用從DNA斷口脫落,與DNA分離。PARP可作為細(xì)胞內(nèi)有效監(jiān)測DNA損傷的分子感受器(molecular sensor）,修復(fù)損傷或誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

Caspase指的是半胱天冬酶,被認(rèn)為是凋亡的中心實(shí)施者,其執(zhí)行凋亡的功能依賴于底物蛋白的酶解活性,在Caspase的級聯(lián)反應(yīng)中,最終均有Caspase-3的活化。PARP是活化了的Caspase-3的底物之一。在細(xì)胞凋亡過程中,Capase-3酶解PARP,使其裂解為2個片段(89 kDa和24 kDa）。24 kDa的PARP片段含有PARP的結(jié)合區(qū)域,結(jié)合到DNA鏈的斷口,因24 kDa的片段缺乏自身修飾域,不能被殘存的PARP多聚(ADP-核糖）基化,因此,24 kDa片段將不容易從DNA鏈的斷口釋放出來,凍結(jié)了DNA斷口,使DNA修復(fù)酶不能接近,不能對破裂的DNA片段進(jìn)行修復(fù),促進(jìn)凋亡的發(fā)生。裂解PARP形成的89 kDa片段,因不含結(jié)合域,斷裂的DNA不能使其活化,防止了細(xì)胞內(nèi)NAD和ATP的過度消耗,為細(xì)胞凋亡保存了能量。因此PARP裂解可作為凋亡早期的敏感指標(biāo)。當(dāng)大量DNA損傷得不到有效修復(fù)時,大量PARP進(jìn)行自身修飾,集聚的PARP激發(fā)caspase對其進(jìn)行剪切,即緊隨PARP核糖化之后PARP便發(fā)生了蛋白水解作用,其機(jī)制為聚ADP-核糖可增加caspase與PARP的結(jié)合力,促進(jìn)PARP蛋白酶的水解,從而推動細(xì)胞凋亡的發(fā)生,PARP的”細(xì)胞保護(hù)”功能便發(fā)生了變化[8-9]。這一作用形式,使細(xì)胞根據(jù)受損程度作出反應(yīng),損傷不嚴(yán)重時,誘導(dǎo)細(xì)胞進(jìn)入生長休止?fàn)顟B(tài),修復(fù)損傷,以利于細(xì)胞功能的恢復(fù);損傷嚴(yán)重時則放棄修復(fù),使細(xì)胞進(jìn)入凋亡。

另有研究顯示PARP可以抑制P53的降解誘發(fā)細(xì)胞凋亡。許多實(shí)驗已證明在幾種不同的生理條件下通過表達(dá)P53可啟動細(xì)胞凋亡,但P53蛋白半衰期極短,在細(xì)胞內(nèi)迅速降解,因而正常細(xì)胞內(nèi)濃度極低。DNA的斷裂激活PARP,細(xì)胞內(nèi)爆發(fā)大量的核糖化反應(yīng),PARP誘發(fā)P53基因mRNA蛋白使之發(fā)生聚ADP核糖化反應(yīng),減少了 P53的降解。另外Malanga等[10]研究顯示PARP與P53在胞內(nèi)分布具有相關(guān)性,PARP可調(diào)控P53與DNA的結(jié)合力,調(diào)節(jié)P53的功能。

本實(shí)驗研究顯示在泰索帝的作用下,甲狀腺未分化癌細(xì)胞系中PARP表達(dá)上升,這與Negri等研究VP16誘導(dǎo)Hela細(xì)胞凋亡過程中,胞內(nèi)被自身修飾的PARP大量增加相一致,考慮可能與泰索帝的藥物作用,使細(xì)胞DNA受損,促使PARP的大量自身修飾,促進(jìn)凋亡的發(fā)生有關(guān)。

3.2 熱休克蛋白27(HSP27）

HSP27分子量(27kDa）,是小分子熱休克蛋白(small HSPs）sHSPs亞家族中的重要一員,參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化和細(xì)胞凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等。研究證實(shí)HSP27與抗腫瘤凋亡和腫瘤耐藥有關(guān)。

本組實(shí)驗證實(shí),泰索帝作用后HSP27蛋白下調(diào),同時有研究顯示,ATC的耐藥機(jī)制和P-gp有關(guān),HSP27還可降低細(xì)胞內(nèi)P-gp的表達(dá),降低細(xì)胞的耐藥性,對HSP27的研究,有可能改善ATC對化療藥物的耐受性。

3.3 ADP-核糖焦磷酸酶

ADP-核糖焦磷酸水解酶亞家族可水解ADP-核糖,調(diào)控體內(nèi)ADP-核糖的水平,維持細(xì)胞正常代謝。ADP-核糖是 NAD+、環(huán)形ADP-核糖和聚ADP-核糖的酶催化代謝物。細(xì)胞內(nèi)高水平的ADP-核糖使體內(nèi)蛋白質(zhì)產(chǎn)生非催化型的ADP-核糖化,從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)功能的失活,此外高水平的ADP-核糖還會干擾正常ADP-核糖依賴型酶的生理功能。例如肌動蛋白的聚合可通過在半胱氨酸的ADP-核糖化而被抑制;ADP-核糖化的組蛋白H1的可作為聚ADP-核糖聚合酶的延長識別位點(diǎn)。此外,酶催化的ADP-核糖化也具有某些毒害作用,如在某些系統(tǒng)中的導(dǎo)致凋亡作用和介導(dǎo)細(xì)菌性毒素的細(xì)胞毒害作用。

本組研究中泰索帝藥物作用后ADP-核糖焦磷酸酶的升高,可能是由于多聚藥物作用后PARP明顯升高,繼發(fā)ADP酶的升高有關(guān)。

3.4 Matrin 3

matrin 3是一個高度保守的核基質(zhì)DNA結(jié)合蛋白,具有正電荷的N末端和高度的帶負(fù)電荷的C末端[14]。它在信使核糖的與其它核基質(zhì)蛋白的相互作用中,形成細(xì)胞核內(nèi)相互作用[15]。據(jù)報道,在細(xì)胞核內(nèi),matrin3與肌苷特異性RNA結(jié)合蛋白p54和剪接因子PSF形成了一個復(fù)合體,形成的復(fù)合體可以把超編輯RNA固定核基質(zhì)上,同時有選擇性地釋放剪輯mRNAs。matrin3同其它基質(zhì)蛋白相同,可能參與前體mRNA剪接。在生理情況下matrin 3上的絲氨酸-208,絲氨酸-596,絲氨酸-598,絲氨酸-604可被磷酸化[15],事實(shí)上在小鼠腦內(nèi)N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA）受體激活后,蛋白激酶A將matrin3磷酸化,誘導(dǎo)其降解。蛋白激酶A抑制劑H-89可防止NMDA誘導(dǎo)matrin 3磷酸化和降解,以及神經(jīng)元死亡。即蛋白激酶A介導(dǎo)的matrin 3磷酸化,作為一種快速的方式傳遞信息,在生理情況下從突觸含有NMDA受體傳遞到細(xì)胞核,并在病理情況下誘導(dǎo)神經(jīng)元死亡。最近應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)研究發(fā)現(xiàn)[16],Matrin-3是鈣調(diào)素結(jié)合蛋白與caspase-3的下游底物,功能受與細(xì)胞分裂有關(guān)的鈣調(diào)蛋白和caspase的調(diào)節(jié)。

本組研究中發(fā)現(xiàn),TA-K細(xì)胞經(jīng)泰索帝藥物作用后matrin 3蛋白表達(dá)上調(diào),matrin 3參與RNA的代謝,與細(xì)胞凋亡有關(guān),具體藥物作用后matrin 3是否有促進(jìn)凋亡的作用或抑制凋亡的作用,還有待于進(jìn)一步研究。另外matrin 3能夠使神經(jīng)元壞死,matrin 3的變化是否與泰索帝具有神經(jīng)系統(tǒng)毒性作用有關(guān),尚待進(jìn)一步研究證實(shí)。

3.5 細(xì)胞凋亡易感蛋白(CAS）

CAS是由hCAS/CSE1L基因編碼的一種酵母基因CSE1人源性同系物。在研究乳腺癌細(xì)胞對抗藥物毒性引起的細(xì)胞凋亡中首次被克隆發(fā)現(xiàn),和細(xì)胞增殖和凋亡的多種過程有關(guān)[17-18]。CAS在增殖細(xì)胞中高表達(dá),在靜止細(xì)胞和組織中處于低水平。研究顯示CAS的表達(dá)能夠促進(jìn)細(xì)胞的凋亡,抑制細(xì)胞生長增殖,可作為腫瘤細(xì)胞的一種”保護(hù)機(jī)制”[19]。

Tanaka等[17]研究證實(shí)CAS(hCAS/CSE1L）與P53的一個靶啟動子亞群有關(guān),其中包括PIG3。CAS的降解使P53靶啟動子的轉(zhuǎn)錄減少,啟動子所引起的凋亡相關(guān)的激活減少,對細(xì)胞凋亡具有抑制作用。另外hCAS/CSE1L活性抑制增加PIG3基因的的組蛋白H3賴氨酸27的甲基化。CAS是一種核質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)因子,與染色質(zhì)相關(guān),是異染色質(zhì)延伸的阻遏蛋白。因此CAS能夠選擇性的激活P53凋亡相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄,促進(jìn)凋亡的發(fā)生。

綜合分析以上結(jié)果,泰索帝在分子水平上可能在以下方面對甲狀腺未分化癌細(xì)胞系TA-K細(xì)胞系產(chǎn)生作用:①泰索帝可能導(dǎo)致細(xì)胞DNA損傷,大量PARP積聚,產(chǎn)生細(xì)胞凋亡或死亡。同時PARP的集聚導(dǎo)致ADP-核糖增多,ADP-焦磷酸酶繼發(fā)性升高。②通過PARP,CAS,HSP調(diào)節(jié)P53的表達(dá)與代謝,促進(jìn)細(xì)胞凋亡。③下調(diào)HSP27使DAXX的活性升高,促進(jìn)細(xì)胞凋亡。④泰索帝影響細(xì)胞核內(nèi)外物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn),以及細(xì)胞核基質(zhì)的蛋白的調(diào)節(jié),影響細(xì)胞核內(nèi)核糖核酸的代謝。⑤HSP27與抗腫瘤耐藥有關(guān),泰索帝能夠下調(diào)HSP27,改善ATC抗腫瘤藥物的敏感性。另外泰索帝作用后Matrin-3升高,Matrin-3與NMDA信號途徑有關(guān),是否與化療藥物的神經(jīng)毒性有關(guān),尚需進(jìn)一步研究。

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