劉玉峰，劉洋，潘明輝，段洪云，陳立江(遼寧大學(xué)藥學(xué)院，沈陽市110036)

赤芍為毛茛科植物芍藥Paeonia lactifloraPall.或川赤芍Paeonia veitchiiLynch.的干燥根[1]，有抑制血小板和紅細(xì)胞聚集、抗凝和抗血栓、抗動(dòng)脈粥樣硬化、保護(hù)心臟和肝臟、抗腫瘤等作用，具有廣泛的藥理活性[2]。芍藥科植物在全世界共約35種，分為3個(gè)組(Sect.Moutan、Sect.Paeonia、Sect.Onaepia)，我國共有11種。芍藥原產(chǎn)我國，栽培歷史悠久，其根供藥用亦有久遠(yuǎn)的歷史。自古以來，芍藥在醫(yī)家的眼里一直是具有多種功效的傳統(tǒng)中藥。

赤芍的主要化學(xué)成分為芍藥苷、沒食子酸和揮發(fā)油等。對于赤芍的揮發(fā)油成分，國內(nèi)外報(bào)道較少。筆者采用水蒸氣蒸餾法提取赤芍揮發(fā)油，并用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)法鑒定其化學(xué)成分，以為有關(guān)赤芍揮發(fā)油的研究奠定基礎(chǔ)；同時(shí)將揮發(fā)油分析的結(jié)果與白芍揮發(fā)油成分進(jìn)行比較，為科學(xué)鑒別赤芍與白芍方法提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

TRACE MS氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國Finnigan公司)；AL104電子天平(瑞士Mettler Toledo公司)。

赤芍生藥來自遼寧大連市售，2004年10月采收，經(jīng)遼寧省食品藥品檢驗(yàn)所王維寧副主任藥師鑒定為毛茛科植物赤芍P.lactifloraPall.的干燥根，憑證標(biāo)本(20090301)存于遼寧大學(xué)藥學(xué)院藥物化學(xué)二室；水為二次蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 揮發(fā)油的制備

稱取赤芍樣品(粉碎后)42.6572 g，加水0.7 L，按2010版《中國藥典》(一部)附錄ⅩD方法[1](不加二甲苯)提取揮發(fā)油。提取5 h后，用無水硫酸鈉干燥后得淡黃色油狀物0.0261 g，收油率為0.0612%(W/W)。

2.2 揮發(fā)油的GC-MS分析

2.2.1 GC-MS條件色譜柱:DB-5 MS(30 m×0.25 mm×0.2 μm)；汽化溫度:270℃；程序升溫:初始溫度50℃，以升溫速率8℃·min-1升至90℃，再以4℃·min-1升至260℃(10 min)；進(jìn)樣量:0.5 μL；分流比:40∶1。EI電離源:70 eV；溶劑延遲:3 min；流速:1.0 mL·min-1；離子源溫度:200℃；加速電壓:250 eV；質(zhì)量掃描范圍:35～650 amu。

2.2.2 揮發(fā)油化學(xué)成分分析對總離子流圖(見圖1)中各峰經(jīng)MS掃描后得到MS圖，通過Xcalibur工作站NIST標(biāo)準(zhǔn)MS圖庫進(jìn)行檢索，確認(rèn)各化合物；通過Xcalibur工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，按峰面積歸一化法計(jì)算各化合物在揮發(fā)油中的百分含量。赤芍揮發(fā)油的化學(xué)成分及其含量見表1。

圖1 赤芍揮發(fā)油的總離子流圖Fig 1Total ion current chromatogram of volatile oil from Paeoniae Radix Rubra

2.3 結(jié)果

表1 赤芍揮發(fā)油的化學(xué)成分及其含量Tab 1Chemical constituents and contents of volatile oil from Paeoniae Radix Rubr

從赤芍揮發(fā)油中檢出134個(gè)色譜峰，鑒定了其中的35個(gè)組分，占揮發(fā)油總量的74.90%。其中n-十六酸(43.46%)、(Z，Z)-9，12-十八碳烯酸(6.78%)、油酸(2.82%)、十五烷酸(2.43%)、[1S-(1α，2α，5α)]-6，6-二甲基-二環(huán)[3.1.1]庚烷-2-甲醇(2.18%)、十六酸乙酯(1.56%)、9，12-十八碳烯酸乙酯(1.49%)、Z-β-松油基苯甲酸脂(1.42%)、1-(2-羥基-4-甲氧基苯基)-乙酮(1.25%)、(R)-1-甲烯基-3-1-(甲基-乙烯基)-環(huán)己烷(1.15%)是主要成分，占揮發(fā)油總量的64.54%。

3 討論

對赤芍揮發(fā)油進(jìn)行成分鑒定，所用藥材多來自四川、內(nèi)蒙古、甘肅等地，且主要成分存在差異。李曉如等[3]采用GC-MS法分離測定赤芍的揮發(fā)油成分，其中赤芍藥材購自赤峰市百草中草藥資源開發(fā)公司，測定其揮發(fā)性化學(xué)成分主要是:(Z，Z)-9，12-Octadecadienoic acid、n-Hexadecanoic acid、2-hydroxy-benzaldehyde、1-(2-Hydroxy-4-methoxyphenyl)-ethanone及6，6-Dimethyl-bicyclo[3.1.1]heptane-2-methanol。呂金順等[4]采用甘肅天水小隴山林區(qū)川赤芍根，用水蒸氣蒸餾及蒸餾后的水殘液用乙醚萃取法提取，經(jīng)GC-MS進(jìn)行分離和檢測，測得川赤芍揮發(fā)性成分中主要成分為2-羥基苯甲醛、苯甲酸、十六酸、油酸、水楊酸甲酯、糠醛、苯酚、2，2-二甲基-3-辛烯、丁香酚類、烯類及烷烴等。趙金堯等[5]運(yùn)用微波輔助萃取，從赤芍及其相關(guān)藥對中提取揮發(fā)油，通過GC-MS檢測，確定赤芍揮發(fā)油的主要成分是鄰羥基苯甲醛、2-呋喃甲醛、單萜化合物、苯的同系物以及脂肪烴等。

筆者檢測到的一些成分已有文獻(xiàn)報(bào)道，主要是:(Z，Z)-9，12-十八碳烯酸(6.78%)，n-十六烷酸(43.46%)，油酸(3.13%)，6，6-二甲基-二環(huán)[3.1.1]庚烷-2-甲醇(2.18%)，1-(2-羥基-4-甲氧基苯基)-乙酮(1.25%)、6，6-二甲基-2-羥甲基-二環(huán)[3.1.1]庚烷(2.18%)。同時(shí)，本研究還檢測出一些未見報(bào)道的赤芍揮發(fā)油成分，如:十五烷酸(2.43%)、十六烷酸乙酯(1.56%)、9，12-十八碳烯酸乙酯(1.49%)、(R)-1-甲烯基-3-1-(甲基-乙烯基)環(huán)己烷(1.15%)，可為赤芍揮發(fā)油的進(jìn)一步研究提供依據(jù)。

目前主流商品藥材的赤芍、白芍屬于芍藥屬，源于同一種植物，但因?yàn)樯L環(huán)境及加工方法的不同，二者在化學(xué)成分上存在很大差異，各自的功能主治相差甚遠(yuǎn)。2010年版《中國藥典》(一部)規(guī)定，赤芍具清熱涼血、散瘀止痛之功效，用于治療溫毒發(fā)斑、吐血衄血、目赤腫痛、肝郁脅痛、經(jīng)閉痛經(jīng)、徵瘕腹痛、跌撲損傷、痛腫瘡瘍[1]；白芍具養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、斂陰止汗、柔肝止痛、平抑肝陽之功效，用于治療血虛萎黃、月經(jīng)不調(diào)、自汗盜汗、脅痛、腹痛、四肢攣痛、頭痛眩暈[1]。對于二者的劃分一直是研究的熱點(diǎn)。

現(xiàn)代中藥學(xué)對赤芍和白芍從不同角度進(jìn)行了劃分。文獻(xiàn)[6]報(bào)道從地域分布這一角度探討赤、白芍劃分的相關(guān)性。有學(xué)者[7]通過芍藥內(nèi)酯苷與氧化芍藥苷含量的比值和丹皮酚的含量來對赤、白芍加以區(qū)別。周紅濤等[8]應(yīng)用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)技術(shù)，對有代表性的芍藥樣品進(jìn)行了聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增，揭示了芍藥群的遺傳分化，在分子水平上為赤芍和白芍道地性的形成找到依據(jù)。野生與栽培的不同被視為赤、白芍的又一區(qū)別:一般認(rèn)為白芍多為芍藥的栽培品加工而成，赤芍多為野生品曬干而成。但各地認(rèn)同方法不一，并且隨著赤、白芍價(jià)格的變化，栽培品作赤芍入藥、野生品作白芍入藥的情況皆有。發(fā)現(xiàn)二者混用在一定程度上會影響臨床療效，因此明確赤、白芍之間的劃分具有重要的意義。本文經(jīng)與白芍揮發(fā)油的成分進(jìn)行分析比較，二者揮發(fā)油中均是酸類及酯類成分居多，但主要成分仍有不同之處。白芍揮發(fā)油中含有異丙基乙醇酯、2-羥基丙酸丙酯、豆蔻酸等成分，而在赤芍揮發(fā)油中并未檢出；本研究所測赤芍揮發(fā)油中n-十六烷酸、油酸、Z-β-松油基苯甲酸脂、(R)-1-甲烯基-3-1-(甲基-乙烯基)-環(huán)己烷等主要成分，在白芍中尚未測得。因此，通過比較上述主要成分的差異，可以用于白芍與赤芍的鑒別，為二者的科學(xué)鑒定提供一種新的方法。

本研究是在中醫(yī)藥學(xué)理論和實(shí)踐指導(dǎo)下，將天然藥物化學(xué)提取分離技術(shù)與新型分析檢測手段相結(jié)合，為中藥材的成分分析和同屬藥材鑒別研究提供示范，為中藥現(xiàn)代化作了有意的探索。當(dāng)然，隨著科學(xué)技術(shù)的不斷完善和進(jìn)步，本研究工作有待朝著更深入、更具體的方面進(jìn)行。

(致謝:北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部醫(yī)藥衛(wèi)生分析中心陶海燕老師代測氣相色譜-質(zhì)譜數(shù)據(jù)，在此表示感謝！)

[1]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典(一部)[S].2010年版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄63，147、97.

[2]沈愛宗.赤芍提取物對實(shí)驗(yàn)性腦缺血大鼠的保護(hù)作用研究[J].中國藥房，2008，19(12):894.

[3]李曉如，梁逸曾，楊輝，等.中藥藥對的化學(xué)成分研究——川芎-赤芍揮發(fā)油的GC/MS分析[J].高等學(xué)校化學(xué)學(xué)報(bào)，2006，27(3):443.

[4]呂金順，王新風(fēng)，薄瑩瑩.川赤芍根的揮發(fā)性和半揮發(fā)性成分及其抗菌活性[J].林業(yè)科學(xué)，2009，45(1):161.

[5]趙金堯，陳春保，楊輝.赤芍及其相關(guān)藥對中揮發(fā)油成分的研究[J].廣州化學(xué)，2005，30(3):35.

[6]黃璐琦，王敏，格小光，等.赤、白芍藥的劃分和地域分布的相關(guān)性探討[J].中國中藥雜志，1998，23(4):204.

[7]Chuang WC，Lin WC，Shen SS，et al.A comparative study on commercial samples of the roots ofPaeonia VitchiiandP.lactiflora[J].Planta Med，1996，62(4):347.

[8]周紅濤，胡世林，郭寶林，等.芍藥野生與栽培群體的遺傳變異研究[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，2002，37(5):383.