蔣 玲 左梅方

(1廣西桂林食品藥品檢驗(yàn)所，廣西桂林市轄區(qū)西城路22號(hào)，541002;2桂林醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系)

竹瀝止咳液由竹瀝、黃芩、化橘紅等9味中藥組成，具有清熱化痰，止咳平喘之功效，用于治療風(fēng)熱咳嗽，咳痰不爽等癥。竹瀝止咳液現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)目［1］，該制劑中的黃芩含黃芩苷［2］，化橘紅含柚皮苷［3］，我們采用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定竹瀝止咳液中黃芩苷和柚皮苷的含量，結(jié)果較為滿意。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 PE－200高效液相色譜儀(美國(guó)珀金埃尓默公司)，包括低壓四元泵、UV/VIS檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣器、在線脫氣機(jī)、柱溫箱及Tcnav色譜工作站;A＆D GR－202電子分析天平(日本 A＆D公司);島津 UV－2450紫外分光光度計(jì)(日本島津公司)。

1.2 試藥 黃芩苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110715－200815，質(zhì)量分?jǐn)?shù)95.2%);柚皮苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110722－200309);竹瀝止咳液(由桂林市某醫(yī)院提供，批號(hào)20080710，20081010，20081217);乙腈、磷酸為色譜純，其他試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:phenomenex C18柱，(250mm×4.6mm，5μm);流動(dòng)相:乙腈 －1mL·L－1磷酸(21∶79);流速:1.0mL·min－1;檢測(cè)波長(zhǎng):283nm;柱溫35℃;進(jìn)樣量 10μL。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取黃芩苷對(duì)照品10.20mg，置50mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為黃芩苷對(duì)照品儲(chǔ)備液。取儲(chǔ)備液3mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度搖勻，以0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得(含黃芩苷58.2624μg·mL－1)。精密稱取柚皮苷對(duì)照品12.60mg，置50mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為柚皮苷對(duì)照品儲(chǔ)備液。取儲(chǔ)備液2mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，以0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得(含柚皮苷50.4μg·mL－1)。

2.3 供試品溶液的制備 精密吸取樣品2mL，置50mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，以0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4 空白溶液的制備 按處方比例，分別制備缺黃芩或化橘紅的陰性樣品，依2.3項(xiàng)下制備空白溶液。

2.5 專屬性實(shí)驗(yàn) 取上述供試品溶液、對(duì)照品溶液和空白溶液，照色譜條件測(cè)定，結(jié)果空白溶液在與黃芩苷對(duì)照品和柚皮苷對(duì)照品保留時(shí)間相應(yīng)的位置無(wú)色譜峰出現(xiàn)，表明處方中其他藥味對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

2.6 線性范圍考察 分別取黃芩苷對(duì)照品儲(chǔ)備液3mL和柚皮苷對(duì)照品儲(chǔ)備液2mL置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。以0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，分別進(jìn)樣1、5、10、15 和 20μL，進(jìn)行測(cè)定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得黃芩苷線性方程:Y=3046512.5X+61516.3，r=0.9999，和柚皮苷線性方程:Y=1633465.5X+38875.4，r=0.9997。結(jié)果表明黃芩苷和柚皮苷分別在0.05826～1.16525μg和0.05040～1.00800μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一份供試品溶液，室溫放置0、5、10、15 和20h，按2.1 項(xiàng)下色譜條件，分別進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，黃芩苷峰面積RSD為0.5%;柚皮苷峰面積RSD為0.9%，說(shuō)明供試品溶液在20h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 精密度實(shí)驗(yàn) 分別取黃芩苷對(duì)照品溶液和柚皮苷對(duì)照品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，峰面積的RSD分別為0.4%和0.3%，說(shuō)明精密度良好。

2.9 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 精密量取同一樣品(批號(hào)20080710)6份，按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按色譜條件測(cè)定，以峰面積外標(biāo)法計(jì)算。結(jié)果平均含量為黃芩苷2.3037mg·mL－1，RSD=0.7%;柚皮苷 0.5721mg·mL－1，RSD=0.7%，表明重復(fù)性良好。

2.10 回收率實(shí)驗(yàn) 精密量取已知含量的樣品(批號(hào)20080710)1mL，精密加入 0.21877mg·mL－1的黃芩苷對(duì)照品溶液10mL和0.25200mg·mL－1的柚皮苷對(duì)照品溶液3mL，按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定并計(jì)算回收率。結(jié)果，黃芩苷平均回收率為99.6%，RSD=1.3%，柚皮苷平均回收率為100.8%，RSD=0.7%(n=6)，見(jiàn)表1。

表1 黃芩苷和柚皮苷回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.11 樣品測(cè)定 取批號(hào)為 20080710、20081010、20081217的三批樣品，分別按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以峰面積外標(biāo)法計(jì)算，結(jié)果3批樣品中黃芩苷含量分別為2.3037、1.3953 和 2.2916mg·mL－1，柚皮苷含量分別為 0.5721、0.7028 和0.5593mg·mL－1。

3 討論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 分別以黃芩苷對(duì)照品及柚皮苷對(duì)照品的甲醇溶液作紫外光譜掃描，黃芩苷在278nm處有最大吸收，柚皮苷在283nm處有最大吸收，考慮到樣品中柚皮苷含量較小，選擇283nm為測(cè)定波長(zhǎng)，以獲得較大的響應(yīng)值。

3.2 流動(dòng)相的選擇 筆者比較了乙腈－磷酸水溶液、乙腈－乙酸水溶液、甲醇－磷酸水溶液、甲醇－乙酸水溶液等不同的組分和比例，結(jié)果選定乙腈－1mL·L－1磷酸(21∶79)為流動(dòng)相，在此條件下，2個(gè)待測(cè)組分峰形良好、分離效果佳，其他成分無(wú)干擾，流動(dòng)相配制也簡(jiǎn)單。

3.3 本方法操作簡(jiǎn)便，精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性和回收率較好，可用于竹瀝止咳液的質(zhì)量控制。

［1］廣西壯族自治區(qū)食品藥品監(jiān)督管理局.醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑注冊(cè)批件［S］.桂 C060035，2006，11，8.

［2］肖培根.新編中藥志第一卷［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2002:862－875.

［3］肖培根.新編中藥志第二卷［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2002:156－161.