邢建國(guó)， 趙 媛， 王新春，， 薛桂蓬， 袁 勇，， 馬建紅， 陳衛(wèi)軍

(1．新疆維吾爾自治區(qū)藥物研究所，新疆 烏魯木齊830004;2．石河子大學(xué)藥學(xué)院，新疆 石河子832002;3．石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院一附院，新疆石河子832008)

復(fù)方卡力孜然是維吾爾民族用于治療白癜風(fēng)的經(jīng)典名方［1-3］，由補(bǔ)骨脂、蛇床子、驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊、何首烏等十味藥材組成。具有祛風(fēng)燥濕、活血化瘀、舒經(jīng)活絡(luò)之功效［4-6］。凝膠劑作為中藥制劑的外用劑型具有性能穩(wěn)定、質(zhì)量可控、黏附性強(qiáng)、易于清潔、不污染衣物等特點(diǎn)，適合用于皮膚、黏膜及腔道給藥［7-8］。本實(shí)驗(yàn)以補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素和蛇床子素的累積透過(guò)量和透皮速率為指標(biāo)，考察不同基質(zhì)凝膠劑的體外透皮特性，為凝膠劑基質(zhì)處方研究的合理性提供一定的依據(jù)。

1 儀器與試藥

補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素和蛇床子素(批號(hào)分別為:110739-200613，110738-200511，110822-200406均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供);復(fù)方卡力孜然提取物浸膏(新疆自治區(qū)要物研究所提供);卡波姆940(Cp，武漢銀河化工有限股份公司);羧甲基纖維素鈉(CMC-Na，山東聊城阿華制藥有限公司)聚乙烯吡咯烷酮(PVP，德國(guó)BASF，批號(hào):061010);甲醇為色譜純，其余試劑為分析純;水為超純水;皮膚來(lái)源:昆明種小鼠(新疆醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，新醫(yī)動(dòng)字第2003-0001號(hào))。

SPD-10AVP型高效液相色譜儀(日本島津);BP211D型十萬(wàn)分之一電子天平(Sartorius);Millipore simplicity-185超純水器(美國(guó)密理博公司);KQ-100DE型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);ZTY智能透皮試驗(yàn)儀TP3A(鞏義市英峪予華儀器廠)。

2 方法和結(jié)果

2．1 凝膠劑的制備 分別稱取處方量的提取物浸膏與巴布劑基質(zhì)混合后過(guò)100目篩，加入處方量的甘油、無(wú)水乙醇及適量蒸餾水，攪拌均勻后放置過(guò)夜，最后加入氮酮、吐溫-80等其他輔料，攪拌均勻后即得。(以卡波姆為基質(zhì)的凝膠最后用適量的三乙醇胺，調(diào)節(jié)pH至6～7即得)。

2．2 補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素及蛇床子素分析方法的建立

2．2．1 色譜條件［9］色譜柱:SHIMADZU VP-ODS(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流動(dòng)相為甲醇(A)-0．4%磷酸(B)，梯度洗脫(0 min，51%A;15 min，51%A;21 min，74%A;40 min，74%A);雙波長(zhǎng)檢測(cè):245 nm(檢測(cè)補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素)，322 nm(檢測(cè)蛇床子素);體積流量:1 mL/min;柱溫為35℃;進(jìn)樣量:10μL。色譜圖見(jiàn)圖1～2。

圖1 對(duì)照品A、樣品B及陰性C(缺補(bǔ)骨脂)

圖2 對(duì)照品D(蛇床子素)、樣品E及陰性F(缺蛇床子)

2．2．2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密吸取含有11．5μg/mL補(bǔ)骨脂素和9．6μg/mL異補(bǔ)骨脂素的混合對(duì)照品貯備液 1、3、5、7、10 mL，分別置 10 mL 棕色量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得補(bǔ)骨脂素及異補(bǔ)骨脂素系列對(duì)照品溶液。精密吸取10．2μg/mL蛇床子素對(duì)照品貯備液 1、2．5、5、7．5、10 mL，分別置10 mL棕色量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，即得蛇床子素系列對(duì)照品溶液。分別精密吸取上述溶液10 μL，注入高效液相色譜儀，以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，分別得到補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素及蛇床子素的線性回歸方程:Y補(bǔ)骨脂素=70 771X+3 335(r=0．999 9)，Y異補(bǔ)骨脂素=87 318X+5 963．3(r=0．999 6);Y蛇床子素=39 080X+7 326(r=0．999 5)。補(bǔ)骨脂素1．15 ～11．50 μg/mL、異補(bǔ)骨脂素0．96～9．60 μg/mL、蛇床子素 1．02 ～10．20 μg/mL與峰面積線性關(guān)系良好。

2．2．3 供試品溶液制備 取凝膠劑約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2．2．4 陰性對(duì)照溶液制備 按凝膠劑制備方法分別制備不含補(bǔ)骨脂和蛇床子的樣品凝膠劑，按2．2．3項(xiàng)的方法制成相應(yīng)的陰性樣品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣，記錄色譜圖。

2．3 體外透皮擴(kuò)散試驗(yàn)

2．3．1 離體鼠皮的制備 體質(zhì)量(20±2)g健康小鼠，用剪刀小心剪去小鼠腹部的絨毛，再用剃須刀刮干凈，注意別弄破皮膚。脫頸處死小鼠，迅速剝離小鼠腹部皮膚，清理殘余的皮下組織和脂肪，浸在生理鹽水中，備用。

2．3．2 試驗(yàn)方法 采用透皮擴(kuò)散試驗(yàn)儀的立式玻璃擴(kuò)散池，容積為 17．0 mL，擴(kuò)散面積為 1．3 cm2，將鼠皮置于擴(kuò)散池與接收池之間，皮膚真皮面向接收池。接收液為40%乙醇生理鹽水，透皮擴(kuò)散試驗(yàn)儀溫度為(37±0．2)℃，磁攪拌子轉(zhuǎn)速為(300．0±1．0)r/min。將凝膠劑均勻涂抹于皮膚角質(zhì)層上，分別于2、4、6、8、10、12 h 吸取接收液 1．0 mL，0．45 μm微孔濾膜濾過(guò)，同時(shí)于接受池中補(bǔ)充1．0 mL接收液。用2．2項(xiàng)下方法分別測(cè)定補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素和蛇床子素。按下式計(jì)算累積滲透量Q和透皮速率J。

其中:Qn為累積滲透量，Cn，Ci為第n和i次取樣點(diǎn)藥物濃度(μg/mL)，V為擴(kuò)散池體積，Vi為取樣液體積，A為滲透面積。

2．3．3 基質(zhì)材料的篩選 以成型性為指標(biāo)，進(jìn)行單因素試驗(yàn)，確定制備凝膠劑的基質(zhì)材料分別為2%CP、8%HPMC、2%CMC-Na、2%CP+1%PVP。分別配制4種基質(zhì)材料的復(fù)方卡力孜然凝膠劑。將制得的凝膠劑分別按2．3．2項(xiàng)中的方法進(jìn)行體外滲透實(shí)驗(yàn)，計(jì)算12 h累積滲透量Q，將累積滲透量對(duì)t進(jìn)行回歸，繪制Q-t曲線，得復(fù)方卡力孜然凝膠劑中補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素和蛇床子素的體外透皮動(dòng)力學(xué)方程及滲透速率。結(jié)果，補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素和蛇床子素3種有效成分從4種凝膠基質(zhì)中的透皮特性均符合Higuchi方程，其中以2%CP和2%CP+1%PVP的凝膠中透皮速度較快，8%HPMC透皮速度次之，而2%CMC-Na的透皮速度最慢。4種凝膠基質(zhì)中3種有效成分的累積滲透量Q均與t1/2呈良好線性關(guān)性，提示體外滲透藥動(dòng)學(xué)均符合符合Higuchi方程。見(jiàn)表1～表3。

表1 不同基質(zhì)材料對(duì)補(bǔ)骨脂素滲透率的影響

表2 不同基質(zhì)材料對(duì)異補(bǔ)骨脂素滲透率的影響

表3 不同基質(zhì)材料對(duì)蛇床子素滲透率的影響

3 討論

3．1 卡波姆是一種由丙烯酸與烯丙基蔗糖交聯(lián)而成的高分子聚合物，是一種多用途的高分子材料和藥用輔料。其中卡波姆940是外用凝膠劑的理想材料，具有釋藥快、無(wú)油膩性、易于涂展、對(duì)皮膚及黏膜無(wú)刺激性等特點(diǎn)［10-11］。PVP具有吸水膨脹性，與卡波姆伍用可以使生成的凝膠網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)相對(duì)疏松，孔道增多，從而增加藥物溶出［12］，本實(shí)驗(yàn)的研究與文獻(xiàn)報(bào)道一致，2%CP940與1%PVP伍用，較單用CP940更能提高3種有效成分的經(jīng)皮透過(guò)率。結(jié)合該實(shí)驗(yàn)結(jié)果，兼顧成本、制備工藝等其他因素，最終選用卡波姆為復(fù)方卡力孜然凝膠劑的基質(zhì)材料。

3．2 凝膠劑常用基質(zhì)包括:卡波姆(CP)、羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)、羥丙甲纖維素(HPMC)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙烯醇(PVA)等。各種基質(zhì)的性質(zhì)不同，對(duì)藥物從凝膠中釋放的影響不同。弱酸弱堿藥物以分子和離子的形式存在，決定于基質(zhì)的酸堿性，以分子形式存在，有利于藥物的體外釋放和透皮吸收［12］。本實(shí)驗(yàn)所用原料藥浸膏粉pH值約為4．2，在弱酸性卡波姆基質(zhì)中，3種有效成分大多以分子形式存在，因此，與基質(zhì)HPMC和CMC-Na相比，具有較高的累積釋放量和透皮速率。

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