余小燕，黃飛燕，吳雙鳳，趙守仁，沈報春

(1.昆明醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，云南昆明650500;2.云南民族大學(xué)化學(xué)與生物技術(shù)學(xué)院，云南昆明650500;3.云南白藥集團(tuán)研究院，云南昆明650118)

普萘洛爾在1－萘萬古霉素手性柱上的對映體分離

余小燕1，黃飛燕2，吳雙鳳1，趙守仁3，沈報春1

(1.昆明醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，云南昆明650500;2.云南民族大學(xué)化學(xué)與生物技術(shù)學(xué)院，云南昆明650500;3.云南白藥集團(tuán)研究院，云南昆明650118)

在自制的1－萘萬古霉素手性色譜柱上對普萘洛爾進(jìn)行了對映體分離研究.討論了極性流動相中不同濃度的酸、堿添加劑對普萘洛爾對映體分離的影響，并初步探討了其手性識別機理.結(jié)果表明，自制的1－萘萬古霉素手性柱對普萘洛爾對映體具有一定的分離效果，流動相中酸、堿添加劑比例為 0.001%∶0.001%(v/v)時，選擇因子達(dá)到 1.16.

對映體分離;普萘洛爾;極性流動相;手性識別機理;1－萘萬古霉素手性固定相

普萘洛爾(propranolol，PPL)是臨床上常用的非選擇性β－受體阻滯劑，由異丙腎上腺素衍生而來.臨床上常用于治療多種原因引起的心律失常，如竇性心動過速、心房撲動及顫動、早搏等，也可以用于心絞痛、高血壓等的治療.從化學(xué)結(jié)構(gòu)(圖1)來看，普萘洛爾有一個手性碳原子，存在一對旋光異構(gòu)體，但目前藥用的均為其外消旋體.動物實驗表明，S(－)－普萘洛爾［S(－)－PPL］對β受體的阻滯程度比R(+)－普萘洛爾［R(+)－PPL］約大100倍［1］.2個對映體之間不僅存在明顯不同的藥理活性，而且具有較大的動力學(xué)差異.因此，分離普萘洛爾對映體十分必要.

普萘洛爾的高效液相色譜手性拆分目前已有報道，如左文堅［2］用Chiracel OD手性柱對普萘洛爾進(jìn)行了對映體拆分，曾蘇等［3］也曾經(jīng)用Chiracel OD和AD手性柱對鹽酸普萘洛爾進(jìn)行了對映體分離，余細(xì)勇等［4］用柱前衍生化HPLC測定人血漿中的普萘洛爾對映體等.

1994 年 Armstrong 等［5－9］首次使用大環(huán)抗生素制備CSP，在正相和反相模式下拆分了一系列對映體，開辟了手性分離科學(xué)領(lǐng)域一個新的研究熱點.自此以后，短短幾年的時間，大環(huán)抗生素應(yīng)用于高效液相色譜(HPLC)、薄層色譜(TLC)、毛細(xì)管電泳(CE)、毛細(xì)管電泳－質(zhì)譜(CE－MS)和毛細(xì)管電色譜(CEC)，已成功分離了多類光學(xué)異構(gòu)體，分離機理的研究也逐步深入［6－11］.大環(huán)抗生素手性固定相顯示出了高效、高選擇性和大載樣量等獨特的優(yōu)勢，而且可以在多種流動相模式下(正相、極性有機相和反相)進(jìn)行對映體分離，成為目前最具發(fā)展?jié)摿Φ囊活愋滦褪中怨潭ㄏ?萬古霉素是最早作為HPLC手性固定相的大環(huán)抗生素.萬古霉素分子中既含有羥基、又含有肽鍵，對天然藥物及手性氨基酸、醚等表現(xiàn)出良好的立體選擇性［12－16］.眾所周知，手性固定相結(jié)構(gòu)上的細(xì)微改變都會帶來手性識別的極大變化，因此，制備出大環(huán)抗生素及其衍生物手性固定相，不僅可以解決對映體分離的一些實際問題，而且對該類手性固定相的手性機理研究也會有很大幫助.

雖然有較多的文獻(xiàn)報道了普萘洛爾的對映體分離的研究，但手性固定相法對其手性識別機理不是很清楚.為進(jìn)一步探討其分離機理，本文采用自制的1－萘萬古霉素手性固定相(Na－Van)在極性有機模式下，對普萘洛爾進(jìn)行了手性分離研究.1－萘萬古霉素手性固定相是由萬古霉素手性固定相經(jīng)1－萘異氰酸酯衍生得到的一種新型手性固定相.考察了流動相甲醇中冰乙酸和三乙胺對分離的影響，初步探討了此模式下手性識別機理.1－萘萬古霉素手性固定相未見文獻(xiàn)報道.

2 實驗部分

2.1 儀器和試劑

島津LC－2010A高效相色譜儀，島津SPDM 10AVP檢測器.鹽酸普萘洛爾片(常州廣普藥業(yè)有限公司)，甲醇(天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，色譜純)，乙醇(天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司，分析純)，三乙胺(中國醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司)，冰乙酸(北京五二九五二化工廠，分析純).

2.2 色譜條件

1－萘萬古霉素手性柱(實驗室自制，250 mm×4.6 mm);流動相為加入酸堿添加劑的甲醇體系;溫度:室溫;流速:1.0 mL/min;檢測波長:215 nm;進(jìn)樣量:10 μL .

2.3 樣品和流動相的配制

鹽酸普萘洛爾片用乙醇溶解，配成適合濃度，經(jīng)0.2 μm 微孔膜過濾.

流動相為甲醇加入不同比例的酸堿，經(jīng)0.45 μm微孔膜過濾并超聲脫氣后使用.

2.4 手性拆分參數(shù)

以下3項參數(shù)用于手性拆分能力的評價:

k1′(容量因子)=(t1－ t0)/t0，t0為死時間，由甲醇測得，t1為第1個對映體的保留時間;

α(選擇因子)=k2′/k1′;

R(分離度)=2(t2－ t1)/(w1+w2).此處 t1，t2為對映體的保留時間，w1和w2為對映體峰寬.

3 結(jié)果與討論

3.1 流動相中三乙胺和冰乙酸濃度對分離的影響

本文采用甲醇作為流動相，添加冰乙酸和三乙胺進(jìn)行對映體分離研究.表1列出了流動相中三乙胺和冰乙酸濃度對手性分離的影響.

極性有機相中酸/堿的濃度和比例控制著溶質(zhì)在手性固定相上的保留和對映體選擇性.固定極性有機相甲醇中冰乙酸和三乙胺的體積比為1∶1，考察流動相中冰乙酸/三乙胺濃度對手性分離的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)手性溶質(zhì)的保留因子均隨著流動相中冰乙酸/三乙胺含量增加而減弱，分析結(jié)果見表1.

由表1的數(shù)據(jù)可以看出，隨著冰乙酸/三乙胺從0.001%∶0.001%(v/v)增加到 0.05% ∶0.05%(v/v)，普萘洛爾的保留減弱.隨著流動相中酸/堿濃度的增加，流動相的極性也在增加.同時由于冰乙酸和三乙胺分子量和密度的差異，在1∶1的條件下，冰乙酸已經(jīng)2倍于三乙胺的摩爾數(shù)，過量的酸用來質(zhì)子化溶質(zhì)和手性固定相.當(dāng)酸的量超過質(zhì)子化所需的量時，主要作用就變成了增加流動相的極性，使溶質(zhì)較快地被洗脫.

表1 流動相中酸堿添加劑濃度對普萘洛爾對映體分離的影響

隨著三乙胺/冰乙酸從 0.05% ∶0.05%(v/v)減少至0.001%∶0.001%(v/v)，普萘洛爾的選擇因子略有增加，分離度增大.當(dāng)流動相中酸堿添加劑為0.001%∶0.001(v/v)時，得到較好的分離效果(見表1).

在極性有機模式下，手性物質(zhì)的保留和對映體的選擇性呈現(xiàn)出了與傳統(tǒng)正相、反相條件下不同的變化規(guī)律(保留減弱，而選擇性卻增強)［16］.這是因為在這一模式下，手性物與固定相之間主要存在著氫鍵作用、π－π電荷轉(zhuǎn)移作用和偶極疊加作用等.但在自制的1－萘萬古霉素手性固定相上，普萘洛爾對映體分離的趨勢卻有所不同:隨著流動相添加劑濃度的減小，保留增強，選擇因子和分離度也隨之增大，說明強的保留決定了好的分離.此外，普萘洛爾分子結(jié)構(gòu)中有羥基和氨基，流動相中過量的酸會質(zhì)子化固定相和溶質(zhì)，調(diào)節(jié)溶質(zhì)和手性固定相表面所帶電荷，進(jìn)而影響手性固定相與溶質(zhì)之間的氫鍵作用.隨著流動相中酸堿的減少，流動相和溶質(zhì)及固定相之間的作用減弱，溶質(zhì)和固定相之間的作用增強，分離效果變好.

4 結(jié)語

在正相體系下，用自制的1－萘萬古霉素手性固定相對普萘洛爾對映體進(jìn)行了分離研究.改變流動相中添加劑的濃度，普萘洛爾的分離效果也有所不同.隨著流動相添加劑濃度的減小，普萘洛爾的保留增強，選擇因子和分離度也相應(yīng)增加.結(jié)果表明:經(jīng)1－萘衍生的萬古霉素手性固定相對普萘洛爾有一定的分離效果，可以此為參考，開發(fā)其他類似的手性固定相.

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(責(zé)任編輯王 琳)

Enantioseparation of Propranolol on the 1－Naphthalene Vancomycin Chiral Stationary Phase

YU Xiao-yan1，HUANG Fei-yan2，WU Shuang-feng1ZHAO Shou-ren3，SHEN Bao-chun1
(1.School of Pharmaceutical Science，Kunming Medical University，Kunming 650500，China;2.School of Chemistry and Biotechnology，Yunnan University of Nationalities，Kunming 650500，China;3.Research Institute of Yunnan Baiyao Group，Kunming 650118，China)

On the self－made 1－naphthalene vancomycin chiral stationary phase，the enantioseparation of propranolol was studied by using the polar mobile phase.The influence of acid and alkali additive in the polar mobile phase was investigated.The chiral recognition mechanism was also discussed.The result shows that the isomers of propranolol can be separated on the self－made 1－napthalene vancomycin chiral stationary phase in the polar mobile phase.The separation factor was 1.16 while using the acid and alkali additive with the ratio 0.001%:0.001%(v/v).

enantioseparation;propranolol;polar mobile phase;chiral recognition mechanism;1－Naphthalene vancomycin chiral stationary phase

O 657.2

A

1672－8513(2011)02－0099－03

10.3969/j.issn.1672 －8513.2011.02.006

2010－11－01.

云南省自然科學(xué)基金(2007B220M);民族藥資源化學(xué)國家民委－教育部重點實驗室開放基金(MJY090208);昆明醫(yī)學(xué)院2009年大學(xué)生創(chuàng)新性實驗計劃項目.

余小燕(1986－)，女，碩士研究生.主要研究方向:手性化合物分離.

沈報春(1974－)，女，博士，副教授.主要研究方向:手性化合物分離.