張舒錦，程媛，李涓，郭蓉曉

小兒支氣管哮喘是臨床上的常見病、多發(fā)病，發(fā) 病率逐年上升，嚴(yán)重影響患兒的身心健康，危害患兒及其家庭的生活質(zhì)量。西醫(yī)認(rèn)為哮喘是以氣道炎癥、氣道高反應(yīng)性為特征的疾病，治療藥物包括吸入型皮質(zhì)激素、支氣管擴(kuò)張劑等［1］。由于應(yīng)用西藥后會(huì)出現(xiàn)一些不良反應(yīng)［2］，故許多患者仍希望采用中藥治療。

“射干麻黃湯”是臨床上治療小兒支氣管哮喘的古方，為了優(yōu)化其療效，我院劉小凡教授根據(jù)中藥理論，以其為基礎(chǔ)，針對(duì)嬰幼兒生理病理特點(diǎn)優(yōu)化組方，研制出哮寧口服液，并作為醫(yī)院制劑在臨床應(yīng)用，取得了較好的療效［3］。本課題通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(抗變態(tài)反應(yīng)、平喘、止咳和化痰實(shí)驗(yàn))，對(duì)射干麻黃湯和哮寧口服液的藥理作用進(jìn)行比較。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥物

哮寧口服液(批準(zhǔn)文號(hào):川藥制字Z20070639)，每毫升相當(dāng)于生藥2.0 g;射干麻黃湯，每毫升相當(dāng)于生藥3 g，均由成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科提供。地塞米松片，0.75 mg/片，廣東華南藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào)060801;氨茶堿注射液，0.25 g/2mL，陜西省西安婦幼制藥廠，批號(hào)060419;氯化銨，0.3 g/片，天津力生制藥廠，批號(hào)061202;磷酸可待因，15 mg/片，青海制藥廠出品，批號(hào)060907。

1.2 試劑

酚紅，25 g/瓶，鄭州中天實(shí)驗(yàn)儀器有限公司，批號(hào)061107;磷酸組織胺，1 g/瓶，上海三杰生物技術(shù)有限公司，批號(hào)060511;氨水，分析純，成都化學(xué)試劑廠，批號(hào) 060212，500 mL/瓶。

1.3 動(dòng)物

豚鼠，400～500 g，四川省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物專委會(huì)養(yǎng)殖場(chǎng)提供(合格證:SCXK(川)2006－14);昆明種小鼠，成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供(合格證:SCXK(川)2006－11)。

1.4 方法

1.4 .1 對(duì)卵蛋白致敏豚鼠的保護(hù)作用

豚鼠36只，雌雄兼有，按體重、性別隨機(jī)分為4組:生理鹽水組、地塞米松組(3 mg·kg－1)、哮寧口服液組(40 g生藥/kg)、射干麻黃湯組(45 g生藥/kg)。其中哮寧口服液和射干麻黃湯均為臨床給藥量的20倍。每鼠后腿肌注5%卵蛋白液1 mL/只，同時(shí)腹腔注射相同劑量以致敏［4］。致敏后第4天灌胃給藥，每天一次，連續(xù)10天。于末次給藥后1 h，分批放入噴霧裝置，用5%卵蛋白液持續(xù)噴霧10 min，每批4只，每組1只。記錄豚鼠出現(xiàn)呼吸困難的潛伏期及發(fā)生跌倒休克的動(dòng)物數(shù)，10分鐘未出現(xiàn)喘息的動(dòng)物按10分鐘計(jì)。噴霧完后，擊昏豚鼠，股動(dòng)脈放血，氣管插管，用0.9%氯化鈉液(37℃，pH=7.4)5 mL緩緩從氣管注入，停留3分鐘，回抽灌注液，重復(fù)一次，混合灌注液，用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定白蛋白含量。豚鼠出現(xiàn)呼吸因難的潛伏期和白蛋白含量結(jié)果以t檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較;發(fā)生跌倒休克的動(dòng)物數(shù)用卡方檢驗(yàn)進(jìn)行組間差異比較。

1.4 .2 對(duì)豚鼠離體氣管平滑肌的影響

木棰猛擊豚鼠頭部致死，迅速切開頸部皮膚，分離氣管，從甲狀軟骨下至氣管下端分叉處將整段氣管剪下，放入盛有營(yíng)養(yǎng)液的培養(yǎng)皿中，將氣管剪成螺旋條狀，然后固定在盛有Krebs－Henseleit溶液的麥?zhǔn)先懿蹆?nèi)，37℃保溫供氧，以肌張力倍感器通過二導(dǎo)生理記錄儀描記［時(shí)間常敏［S］DC，濾波(HZ)10，靈敏度(mv·cm－1)0.5，走紙速度 0.5 mm·s－1］。調(diào)節(jié)初始張力為2 g，穩(wěn)定30 min后開始實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分為4組:生理鹽水組、氨茶堿組(3.12×10－4g·mL－1)、哮寧口服液組(2.00×10－2g·mL－1)、射干麻黃湯組(3.00×10－2g·mL－1)。分別觀察藥液對(duì)正常氣管平滑肌和加入磷酸組織胺(終濃度為1.67×10－6g·mL－1)后的氣管平滑肌張力的影響，記錄給藥后 1、2、3、4、6、8、10、12分鐘曲線下降幅度，以曲線下降mm數(shù)進(jìn)行組間顯著性比較。

1.4 .3 對(duì)氨水誘發(fā)小鼠咳嗽的影響

昆明種小鼠一批，雌雄各半，體重20±2 g。實(shí)驗(yàn)裝置自制。實(shí)驗(yàn)前一天進(jìn)行篩選，將小鼠置于玻璃罩內(nèi)，迅速加入0.8 mL濃氨水加熱蒸發(fā)，1 min后將小鼠取出，觀察2 min內(nèi)各鼠咳嗽次數(shù)，選出咳嗽5～30次的小鼠48只，按其咳嗽次數(shù)多少隨機(jī)分為4個(gè)組:生理鹽水組、可待因組(0.03 g·kg－1)、哮寧口服液組(40 g生藥/kg)、射干麻黃湯組(45 g生藥/kg)。其中哮寧口服液和射干麻黃湯均為臨床給藥量的20倍。灌胃給藥，每天一次，連續(xù)3天。末次給藥后1 h，同法進(jìn)行引咳試驗(yàn)(分批進(jìn)行，每批每組各1只)，比較各組小鼠咳嗽次數(shù)，結(jié)果以t檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較。

1.4 .4 祛痰作用研究

昆明種小鼠48只，雌雄各半，體重20±2 g，按性別，體重隨機(jī)分為4個(gè)組:生理鹽水組、氯化銨組(1 g·kg－1)、哮寧口服液組(40 g生藥/kg)、射干麻黃湯組(45 g生藥/kg)。其中哮寧口服液和射干麻黃湯均為臨床給藥量的20倍。禁食不禁水12 h后，灌胃給藥，40 min后腹腔注射0.5%酚紅溶液0.5 mL。30 min后處死小鼠，分離氣管，將7號(hào)針插入氣管約0.6 cm，結(jié)扎固定，用注射器吸取5%NaHCO3溶液0.8 mL，來回抽洗三次，同法再灌洗兩次，將三次灌洗液合并，取此灌洗液1.5 mL，加入適量40%三氯醋酸沉淀蛋白，離心，取上清液加入10%NaOH 0.15 mL堿化顯色，置721型分光光度計(jì)510 nm比色，測(cè)定灌洗液的OD值，結(jié)果以t檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)卵蛋白致敏豚鼠的保護(hù)作用

表1結(jié)果顯示，哮寧口服液40 g生藥/kg和射干麻黃湯45 g生藥/kg灌胃給予豚鼠，均能明顯延長(zhǎng)卵蛋白致敏豚鼠出現(xiàn)呼吸困難的潛伏期，與對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.05)，圖1顯示射干麻黃湯還能顯著降低氣道白蛋白含量，與對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.05)。哮寧口服液組和射干麻黃湯組發(fā)生跌倒休克的動(dòng)物數(shù)與對(duì)照組比較均無(wú)顯著性差異，但跌倒的動(dòng)物數(shù)有減少的趨勢(shì)。表明兩藥可以減少炎癥狀態(tài)時(shí)氣道微血管的滲漏，減輕哮喘發(fā)作的程度，對(duì)過敏性哮喘的動(dòng)物有一定保護(hù)作用。

哮寧口服液與射干麻黃湯相比，出現(xiàn)呼吸困難潛伏期時(shí)間、白蛋白含量和發(fā)生跌倒休克的動(dòng)物數(shù)均無(wú)顯著性差異(p＞0.05)，說明哮寧口服液對(duì)卵蛋白致敏豚鼠的保護(hù)作用與射干麻黃湯相當(dāng)。

表1 對(duì)卵蛋白致敏豚鼠的保護(hù)作用

圖1 對(duì)卵蛋白致敏豚鼠的保護(hù)作用

2.2 對(duì)豚鼠離體氣管平滑肌的影響

圖2、圖3結(jié)果顯示，哮寧口服液和射干麻黃湯可明顯使正常和組胺致痙的豚鼠氣管螺旋條松馳，與對(duì)照組相比均有顯著性差異(p＜0.01)。在1～4 min內(nèi)隨時(shí)間的延長(zhǎng)，哮寧口服液使正常和組胺致痙的豚鼠氣管螺旋條松馳的作用增強(qiáng);在4～12min內(nèi)松弛作用達(dá)到并一直維持在閾值。表明兩藥均能降低氣管平滑肌緊張度。

圖2 對(duì)未經(jīng)組胺作用的豚鼠離體平滑肌張力的影響

哮寧口服液和射干麻黃湯在相同時(shí)間點(diǎn)對(duì)豚鼠離體氣管平滑肌的松弛作用無(wú)顯著性差異。

圖3 對(duì)經(jīng)組胺作用的豚鼠離體平滑肌張力的影響

2.3 對(duì)氨水誘發(fā)小鼠咳嗽的影響

圖4 結(jié)果顯示，哮寧口服液(40 g生藥/kg)和射干麻黃湯(45 g生藥/kg)灌胃給予小鼠，均能明顯減少氨水引咳小鼠的咳嗽次數(shù)，與對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.05、0.01)，表明哮寧口服液具有止咳作用。

哮寧口服液與射干麻黃湯相比，對(duì)氨水刺激小鼠2 min內(nèi)咳嗽次數(shù)的影響無(wú)顯著性差異，說明哮寧口服液的止咳作用與射干麻黃湯相當(dāng)。

圖4 對(duì)氮水刺激小鼠咳嗽的止咳作用

2.4 祛痰作用研究

圖5結(jié)果顯示，哮寧口服液(40 g生藥/kg)能使小鼠呼吸道粘膜酚紅的分泌量顯著增加，與對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.05)。表明哮寧口服液具有祛痰作用。哮寧口服液與射干麻黃湯相比，對(duì)呼吸道分泌的酚紅濃度無(wú)顯著性差異，說明哮寧口服液和射干麻黃湯的祛痰作用相當(dāng)。

圖5 對(duì)小鼠的社痰作用

3 討論

支氣管哮喘是小兒常見的變態(tài)反應(yīng)性疾病，誘因多為呼吸道感染。中醫(yī)稱哮病，多因感受外邪，或飲食情志等失調(diào)，誘動(dòng)內(nèi)伏于肺的痰飲，痰氣阻塞，使肺氣不得宣降，以突然出現(xiàn)呼吸喘促，喉間哮鳴有聲為主要表現(xiàn)的肺系發(fā)作性疾病。

射干麻黃湯，出自《金匱要略》，為仲景首創(chuàng)，主治寒飲郁肺結(jié)喉證?，F(xiàn)代可用于治療哮喘、小兒支氣管炎、支氣管哮喘等，是化瘀、降氣、平喘的良方。射干麻黃湯作為中藥古方，采用劑型為傳統(tǒng)湯劑，有吸收快、療效好、應(yīng)用歷史悠久、應(yīng)用范圍廣泛等優(yōu)點(diǎn)。但是隨著社會(huì)的進(jìn)步，傳統(tǒng)湯劑熬制過程費(fèi)時(shí)、攜帶不方便、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不明確等弊端日益明顯，制約了中醫(yī)藥現(xiàn)代化的發(fā)展。

哮寧口服液以經(jīng)方“射干麻黃湯”為基礎(chǔ)，另加入地龍、枳殼、杏仁、黃芩、葶藶子等。方中麻黃、細(xì)辛解表溫肺化飲，射干、紫菀、款冬花化痰平喘，枳殼降逆，地龍解痙平喘［6］。作為我院院內(nèi)制劑應(yīng)用多年，療效顯著。我們通過豚鼠致敏實(shí)驗(yàn)、豚鼠離體氣管條實(shí)驗(yàn)、小鼠氨水引咳實(shí)驗(yàn)和小鼠酚紅排出量測(cè)定實(shí)驗(yàn)證實(shí)了哮寧口服液具有明顯的抗變態(tài)反應(yīng)、平喘、止咳、祛痰的藥理作用，且在劑量同為臨床用量20倍的情況下，其動(dòng)物試驗(yàn)的藥效作用與射干麻黃湯相比無(wú)明顯差異。與射干麻黃湯相比，哮寧口服液的制備過程操作簡(jiǎn)便、工藝穩(wěn)定、質(zhì)量可控。

綜上所述，哮寧口服液與射干麻黃湯相比，抗變態(tài)反應(yīng)、平喘、止咳、祛痰作用療效相當(dāng)，且體積小，服用、存儲(chǔ)及運(yùn)輸方便，具有質(zhì)量可控等優(yōu)點(diǎn)，滿足中藥現(xiàn)代化的發(fā)展要求，很有發(fā)展前途。

［1］ 沈華浩，應(yīng)英華．新版全球哮喘防治創(chuàng)議(GINA)方案的評(píng)價(jià)和解讀［J］．臨床內(nèi)科雜志，2007，24(4):221．

［2］ 方雪娟，江遜，汪定成．哮喘兒童治療依從性的調(diào)查分析與干預(yù)對(duì)策［J］．解放軍護(hù)理雜志，2007，27(4):41．

［3］ 劉小凡，趙霞，郭蓉曉，等．哮寧口服液治療小兒哮喘的臨床觀察——附:55例病例報(bào)告［J］．成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，1999，22(4):12．

［4］ 徐叔云，卞如濂，陳修．藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］．第3版，北京:人民衛(wèi)生出版社，2002:1417．

［5］ 徐叔云，卞如濂，陳修．藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］．第3版，北京:人民衛(wèi)生出版社，2002:1368．

［6］ 劉小凡，郭蓉曉，孟曉露，等．哮寧口服液治療小兒哮喘的臨床與實(shí)驗(yàn)研究［J］．上海中醫(yī)藥雜志，2001，9:24．