王鵬飛，許樹坡，張志勇，趙建莊，魏朝俊，陳信友，李福新北京農(nóng)學(xué)院植物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，北京006;北京市南口農(nóng)場(chǎng)，北京00

葡萄斑葉蟬Erythroneura apicalis(Nawa)屬于同翅目葉蟬科害蟲，近年來(lái)在北京地區(qū)發(fā)生比較嚴(yán)重。啶蟲脒作為一種煙堿類殺蟲劑，在防治同翅目等害蟲上被廣泛應(yīng)用，并具有較好的防治效果(魏書娟等，2009;申洪利等，2009;于清磊等，2008;胡志煥等，2007)，其中20%啶蟲脒10000倍液對(duì)葡萄斑葉蟬若蟲1～3 d的防效可達(dá)到80% ～96%(沙麗米古麗·艾力和熱依汗，2010)。有關(guān)啶蟲脒在蔬菜、茶葉等作物上的殘留消解動(dòng)態(tài)和檢測(cè)方法，已有一些研究(王英華等，2010;王瑞等，2010;左海根和占春瑞，2010;Park et al.，2011;Seccia et al.，2008;Gupta et al.，2008;Sanyal et al.，2008)，但在葡萄上的殘留動(dòng)態(tài)尚未見報(bào)道。本試驗(yàn)結(jié)合葡萄斑葉蟬的發(fā)生規(guī)律，對(duì)啶蟲脒在葡萄不同物候期施用的殘留趨勢(shì)進(jìn)行分析，以期為該藥在葡萄上的安全使用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

材料包括3%啶蟲脒微乳劑(河北承德市灤平農(nóng)藥廠)、98%啶蟲脒標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院)、露地栽培巨峰葡萄(北京農(nóng)學(xué)院科技實(shí)驗(yàn)園)。儀器包括美國(guó)安捷倫公司Agilent1200液相色譜儀(DAD檢測(cè)器，Agilent色譜工作站)、德國(guó)Heidolph公司LABOROTA 4001 efficient旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀等。

1.2 田間試驗(yàn)設(shè)計(jì)

蟲害觀察:單獨(dú)選取葡萄種植小區(qū)，采用5點(diǎn)取樣法，每點(diǎn)調(diào)查4株，共20株，每株樹分基部、中部、梢部各取5片葉，從展葉開花前期至果實(shí)完全成熟，每3 d調(diào)查1次，記載蟲態(tài)和數(shù)量。

1.2.1 3%啶蟲脒微乳劑在葡萄葉片與果實(shí)上的消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn) 2009年6月上旬(第1代若蟲發(fā)生期)，在葉片上進(jìn)行第1次消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)。采用一次施藥多次采樣的方法，將藥均勻噴灑于葡萄植株上。施藥劑量為推薦濃度(稀釋3000倍)和加倍濃度(稀釋1500倍)2種處理，有效成分用量分別為22.5 和45 g·hm－2。每個(gè)處理設(shè) 3 次重復(fù)，每次重復(fù)2株葡萄樹，并設(shè)空白對(duì)照小區(qū)，不同處理小區(qū)間設(shè)保護(hù)區(qū)。在施藥后的 1 h 和 1、3、5、7、10、14、17、21、28 d隨機(jī)多點(diǎn)采集樣品，帶回實(shí)驗(yàn)室按四分法留樣，果實(shí)1 kg、葉片0.1 kg，所有樣品均貯存于－20℃冰箱中待測(cè)。第2次消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)于2009年7月上旬(第2代若蟲發(fā)生期)在葉片上進(jìn)行，第3次消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)于2009年8月上旬(果實(shí)著色期)在果實(shí)上進(jìn)行，每次試驗(yàn)單獨(dú)選取小區(qū)，試驗(yàn)小區(qū)設(shè)計(jì)與采樣方法同上。

1.2.2 3%啶蟲脒微乳劑在葡萄葉片與果實(shí)上的最終殘留試驗(yàn) 最終殘留試驗(yàn)施藥劑量分別為22.5和45 g·hm－2(a.i.)。于 2009 年 8 月上旬(果實(shí)著色期)開始施藥，連施3次，間隔期7 d，在末次施藥后的第7、14 d分別采集葡萄葉片與果實(shí)樣品，同時(shí)采集對(duì)照樣品，試驗(yàn)小區(qū)設(shè)計(jì)與采樣方法同1.2.1。

1.3 分析方法

參照行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(SN/T 1902－2007)(中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，2007)，對(duì)凈化洗脫過(guò)程進(jìn)行了一些改進(jìn)，提高了本試驗(yàn)的回收率。

1.3.1 提取 稱取勻漿后的樣品25 g，置于250 mL具塞錐形瓶中，加入50.0 mL乙腈并放置2 h，振蕩提取30 min后用濾紙過(guò)濾。將濾液收集到裝有5～7 g氯化鈉的100 mL具塞量筒中，蓋上塞子，劇烈振蕩1 min，在室溫下靜置10 min，使乙腈相和水相分層。從100 mL具塞量筒中吸取10.0 mL乙腈溶液，移入125 mL梨形瓶中，于50℃水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至近干。加入10 mL丙酮/正己烷(1∶9)溶解。

1.3.2 凈化 將弗羅里矽柱用2 mL正己烷預(yù)淋洗，當(dāng)溶劑液面到達(dá)柱吸附層表面時(shí)，立即倒入樣品溶液，棄去流出液。用5 mL丙酮/正己烷(1∶9)涮洗梨形瓶后淋洗弗羅里矽柱，棄去流出液。用10 mL丙酮分2次淋洗弗羅里矽柱，用15 mL刻度離心管接收洗脫液。將盛有洗脫液的離心管置于氮吹儀上，在50℃水浴下，氮吹至近干，用乙腈/水(3∶7)定容至2.0 mL，在漩渦混合器上混勻，經(jīng) 0.45 μm濾膜過(guò)濾后，待測(cè)。

1.3.3 液相色譜測(cè)定條件 色譜柱:ODS-C18，5 μm，250 mm×4 mm(內(nèi)徑)或相當(dāng)柱。色譜柱溫度40℃，流動(dòng)相為乙腈+水。梯度:0 min，(5+95);15 min，(25+75);20 min，(5+95)。流速 1.0 mL·min－1，檢測(cè)波長(zhǎng) 258 nm，進(jìn)樣量 20 μL。

1.3.4 定量測(cè)定 采用外標(biāo)法定量，樣品回收率用單點(diǎn)校正法定量，樣品最終殘留及消解動(dòng)態(tài)用標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。將啶蟲脒標(biāo)準(zhǔn)品配置成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣量20 μL，啶蟲脒的峰面積(y)與標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度(x)在 0.02 ～5.0 mg·L－1的線性關(guān)系方程為 y=81.239x+1.9071，相關(guān)系數(shù) r=0.9995(n=9)，標(biāo)準(zhǔn)曲線呈良好的線性關(guān)系。

2 結(jié)果與分析

2.1 添加回收率

在葡萄果實(shí)與葉片樣品中，添加 0.05、0.2、2 mg·kg－1啶蟲脒標(biāo)準(zhǔn)液，然后按照上述方法提取、凈化并定容檢測(cè)，結(jié)果見表1。啶蟲脒在葡萄果實(shí)中的平均回收率為86.20% ～92.57%，標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.29～5.49;在葡萄葉片中的平均回收率為86.36% ～91.01%，標(biāo)準(zhǔn)偏差為 2.71 ～6.04。本試驗(yàn)的分析方法符合農(nóng)藥殘留分析要求(中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部，2004)。本方法最低檢出量0.5 ng，最低檢出濃度0.01 mg·kg－1。

表1 啶蟲脒在葡萄果實(shí)與葉片中的添加回收率Table 1 The recoveries of acetamiprid in grape fruits and leaves

2.2 3%啶蟲脒在葡萄上的消解動(dòng)態(tài)

于2009年不同葡萄物候期施藥后，啶蟲脒在果實(shí)與葉片上的消解動(dòng)態(tài)見圖1。受葉片表面粗糙、氣孔較多以及著藥面積較大的影響，不同物候期處理下，在葡萄葉片上的原始沉積量明顯大于果實(shí)上的原始沉積量。在同一物候期葉片或果實(shí)的處理中，加倍施藥的原始沉積量明顯大于推薦劑量的原始沉積量。3次施藥分別選在第1、2代成蟲高發(fā)期前，藥后3 d的防治效果均可達(dá)到80%以上。啶蟲脒在開花期與漿果生長(zhǎng)期葉片上的降解趨勢(shì)基本一致。受到光照、雨水、植物分解和生長(zhǎng)稀釋等因素的影響，啶蟲脒降解較快，除果實(shí)加倍劑量施藥后第14天的降解率為86.09%以外，其余5種處理藥后14 d降解率均達(dá)到90%以上。各處理的原始沉積量均小于日本允許的啶蟲脒在葡萄果實(shí)中的最大殘留限量(MRL)值(5 mg·kg－1)與韓國(guó)的MRL值(1 mg·kg－1)。在8月果實(shí)著色期，推薦劑量處理當(dāng)天果實(shí)上的原始沉積量即小于美國(guó)允許的 MRL 值(0.2 mg·kg－1)，而加倍劑量處理果實(shí)的殘留量要等到藥后 3 d 才低于 0.2 mg·kg－1。

圖1 啶蟲脒的殘留消解動(dòng)態(tài)Fig.1 Residual dynamics of acetamiprid on grape leaves and fruit，in relation to safety standards in South Korea and the USA，with an indication of the seasonal dynamics of the grape leafhopper

對(duì)消解動(dòng)態(tài)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，不同處理下的消解動(dòng)態(tài)曲線均符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程Ct=Coe－kt，啶蟲脒在葡萄各物候期的降解方程、半衰期和相關(guān)系數(shù)見表2。啶蟲脒在葉片上的降解半衰期為3.55～3.93 d，果實(shí)上的降解半衰期為 4.14 ～5.60 d，在葉片上的降解速度比果實(shí)上稍快。此外還將2008年果實(shí)上的消解動(dòng)態(tài)模型與2009年的做了比較，相同劑量處理的原始沉積量相差較少，只是受溫濕度等氣候因子的影響，2008年半衰期稍微長(zhǎng)些。

表2 啶蟲咪在葡萄果實(shí)與葉片中的降解方程Table 2 Degradation equation of acetamiprid in grape fruits and leaves

2.3 3%啶蟲脒在葡萄上的最終殘留量

為了有效防治斑葉蟬第2代成蟲的危害，確保著色期至成熟期果實(shí)糖分的充分積累，于8月上旬(果實(shí)著色期)開始，連續(xù)施藥3次，間隔為7 d，末次施藥后第7、14天的最終殘留量見表3。末次施藥后 7 d 果實(shí)上的殘留量均低于0.2 mg·kg－1，14 d均低于0.1 mg·kg－1。同時(shí)，加倍濃度的殘留量均比推薦濃度高，藥后7 d的殘留量均比藥后14 d高，但果實(shí)上的殘留量均未超出 0.2 mg·kg－1。

表3 啶蟲脒在葡萄果實(shí)與葉片中的最終殘留量Table 3 Residual amount of acetamiprid in grape fruits and leaves

3 討論

啶蟲脒作為一種新型的煙堿類殺蟲劑，不僅具有觸殺和胃毒作用，還具有較強(qiáng)的滲透作用，能顯示出速效的殺蟲力，且持效期長(zhǎng)達(dá)20 d左右，對(duì)人畜也有低毒作用(馮楠等，2008;劉新剛等，2007;李慧冬等，2007)，如果使用不正確，可能會(huì)引發(fā)果品安全與環(huán)境安全問(wèn)題。本試驗(yàn)的3次施藥分別選在第1、2代成蟲高發(fā)期前，對(duì)葡萄斑葉蟬具有較好的防治作用，且通過(guò)追蹤監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)，啶蟲脒在葡萄不同物候期，經(jīng)過(guò)14 d后都降解85%以上，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于美國(guó)、韓國(guó)及日本的MRL值，達(dá)到了安全要求水平。同時(shí)，在最終殘留試驗(yàn)的各種處理下，末次施藥后7 d果實(shí)均是安全的。

我國(guó)尚未制定啶蟲脒在葡萄果實(shí)中的MRL值，參照美國(guó)允許啶蟲脒在葡萄果實(shí)中的MRL值(0.2 mg·kg－1)，3%啶蟲脒微乳劑按推薦劑量 22.5 g·hm－2(a.i.)和加倍劑量 45 g·hm－2(a.i.)施藥，連施3次，間隔期7 d，最后一次施藥距采收期7 d，果實(shí)是安全的。建議用3%啶蟲脒微乳劑在葡萄開花期防治斑葉蟬的第1代若蟲、成蟲，硬核期至著色期防治第2代若蟲、成蟲，最多使用3次，用量為22.5 g·hm－2(a.i.)，安全間隔期為 7 d，這樣既可達(dá)到較好的防治效果又可保證采收的安全性。

馮楠，李淑娟，蔡會(huì)霞，李建中，安娟，李剛.2008.固相萃取—?dú)庀嗌V法測(cè)定蔥中啶蟲脒的殘留量.農(nóng)藥，47(10):759－761.

胡志煥，馬淑艷，許俊平，吳志忠.2007.啶蟲脒粉劑對(duì)梨木虱的防治效果.河北果樹，(5):5.

李慧冬，陳子雷，王文博，杜紅霞，李瑞菊，丁蕊艷.2007.啶蟲脒在西蘭花中的殘留測(cè)定.農(nóng)藥，46(6):403－404.

劉新剛，董豐收，王淼，鄭永權(quán)，姚建仁.2007.不同劑型啶蟲脒在棉花和土壤中的殘留及降解研究.農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào)，26(5):1772－1775.

沙麗米古麗·艾力，熱依汗.2010.20%啶蟲脒防治葡萄斑葉蟬若蟲田間藥效試驗(yàn).農(nóng)村科技，(11):32.

申洪利，韓玉臻，魯民芳，王永新，宋福泉，朱學(xué)勇.2009.3%啶蟲脒防治棉蚜田間藥效試驗(yàn)研究.北京農(nóng)業(yè)，(7):43－45.

王瑞，林敏霞，吳淳，林其達(dá)，顧亞萍.2010.氣相色譜—質(zhì)譜法測(cè)定黃瓜中的啶蟲脒農(nóng)藥殘留.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，38(31):17538－17539.

王英華，鄔元娟，張慧，姜國(guó)華，嵇儉.2010.啶蟲脒在梨中的殘留檢測(cè)與消解動(dòng)態(tài)研究.山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，(7):70－73.

魏書娟，宗建平，王海迎，羅萬(wàn)春.2009.啶蟲脒不同施藥方法在甘藍(lán)中的殘留及其對(duì)蚜蟲的防效.農(nóng)藥研究與應(yīng)用，13(2):25－28.

于清磊，許愷，劉玉霞，范項(xiàng)英，張鳳云.2008.10.5%啶蟲脒乳油防治黃瓜蚜蟲藥效試驗(yàn).河北農(nóng)業(yè)科學(xué)，12(9):40－41.

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.2007.中華人民共和國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)——水果蔬菜中吡蟲啉、吡蟲清殘留量的測(cè)定高效液相色譜法.北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社.

中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部.2004.中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)——農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則.北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社.

左海根，占春瑞.2010.茶葉中啶蟲脒殘留量氣相色譜分析方法研究.現(xiàn)代測(cè)量與實(shí)驗(yàn)室管理，(1):6－10.

Gupta S，Gajbhiye V T and Gupta R K.2008.Effect of light on the degradation of two neonicotinoids viz acetamiprid and thiacloprid in soil.Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology，(2):185 －189.

Park J Y，Choi J H and Kim B M.2011.Determination of acetamiprid residues in zucchini grown under greenhouse conditions:application to behavioral dynamics.Biomedical Chromatography，25(1 －2):136 －146.

Sanyal D，Chakma D and Alam S.2008.Persistence of a neonicotinoid insecticide，acetamiprid on chili(Capsicum annum L.).Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology，(4):365 －368.

Seccia S，F(xiàn)idente P and Montesano D.2008.Determination of neonicotinoid insecticides residues in bovine milk samples by solid-phase extraction clean-up and liquid chromatography with diodearray detection.Journal of Chromatography A，1214(2):115－120.