姜英輝 雷質(zhì)文 馬維興 張健 韓麗娟 許艷麗

(1.山東出入境檢驗檢疫局 山東青島 266002;2.榮成出入境檢驗檢疫局)

嬰幼兒食品微生物及微生物毒素調(diào)查分析

姜英輝1雷質(zhì)文1馬維興1張健1韓麗娟2許艷麗1

(1.山東出入境檢驗檢疫局 山東青島 266002;2.榮成出入境檢驗檢疫局)

對嬰幼兒食品(配方乳粉、補充谷物、餅干和罐頭)分別進行微生物污染以及微生物毒素調(diào)查。調(diào)查結(jié)果表明:357份嬰幼兒食品均未檢出沙門氏菌和單核細胞增生李斯特氏菌;11份嬰幼兒配方乳粉、1份補充谷物和1份餅干食品中檢出坂崎腸桿菌,檢出率分別為4.2%,2.4%和2.5%;檢出1份補充谷物菌落總數(shù)超過國家標(biāo)準(zhǔn)最高安全限量值。13份嬰幼兒配方乳粉和3份補充谷物檢出腸桿菌科細菌,檢出率分別為32.5%和7.1%;14份(嬰幼兒)配方乳粉、2份嬰幼兒罐頭檢出蠟樣芽孢桿菌,檢出率分別為35%和20%;1份嬰幼兒配方乳粉檢出黃曲霉毒素M1超標(biāo)。嬰幼兒食品存在微生物及其微生物毒素污染的風(fēng)險,應(yīng)加強對嬰幼兒食品的致病微生物及其毒素的監(jiān)測和監(jiān)管。

嬰幼兒食品;微生物污染;微生物毒素;調(diào)查;分析

1 前言

初生到3歲年齡階段的嬰幼兒,由于身體的特殊條件決定了配方乳粉、米粉、餅干等食品是其主要輔助食物。嬰幼兒食品不同于一般食品,有其特殊的營養(yǎng)和衛(wèi)生要求,必須符合相應(yīng)的法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)的要求。近年來,由于食用了劣質(zhì)食品而導(dǎo)致危害嬰幼兒健康的事件時有發(fā)生[1,2],這是因為嬰幼兒食品在生產(chǎn)、加工、貯存、流通和消費的諸多過程中,都有可能受到有毒、有害、化學(xué)物質(zhì)的污染,進而發(fā)生食品安全問題,尤其是嬰幼兒食品營養(yǎng)豐富,容易受到微生物的污染,因此,在眾多食品安全相關(guān)項目中,由微生物引起的污染備受重視。為全面了解我國嬰幼兒食品的衛(wèi)生情況,保證嬰幼兒食品安全,筆者對我國嬰幼兒食品微生物以及微生物毒素的污染情況進行了調(diào)查并對其進行風(fēng)險分析,可為預(yù)防和控制嬰幼兒食源性疾病提供參考依據(jù)。

根據(jù)嬰幼兒食品的特點,調(diào)查分析將嬰幼兒食品分為嬰幼兒配方乳粉、補充谷物、餅干和罐頭共計4大類,分別對其進行微生物和微生物毒素的調(diào)查及污染水平分析。

2 材料與方法

2.1 材料

2.1.1 樣品來源

國內(nèi)超市和市場購買的嬰幼兒食品樣品,以及部分青島口岸進口送檢的樣品,共計357份,見表1。

表1 嬰幼兒食品匯總表

2.1.2 培養(yǎng)基和試劑

平板計數(shù)瓊脂、10%氯化鈉胰蛋白胨大豆肉湯、甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂、胰胨大豆肉湯、緩沖蛋白陳水、氯化鎂孔雀綠增菌液、亞硒酸鹽胱氨酸增菌液、亞硫酸鉍瓊脂、HE瓊脂、改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯-萬古霉素、李氏增菌肉湯、PALCAM瓊脂等:購自北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司;沙門氏菌顯色培養(yǎng)基、李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基、阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基等:購自科瑪嘉公司;GNI鑒定卡:購自法國生物梅里埃公司。

2.1.3 儀器

VITEK II(全自動微生物鑒定和藥敏分析儀):由法國生物梅里埃公司生產(chǎn);HP1200高效液相色譜儀:由美國惠普公司生產(chǎn);免疫親和凈化處理設(shè)備:由美國VICAM公司生產(chǎn)。

2.2 方法

菌落總數(shù)按GB 4789.2-2010規(guī)定的方法執(zhí)行;腸桿菌科按照SN/T 0738-1997規(guī)定的方法執(zhí)行;金黃色葡萄球菌按GB 4789.10-2010規(guī)定的方法執(zhí)行;蠟樣芽孢桿菌按GB/T 4789.14-2003規(guī)定的方法執(zhí)行;阪崎腸桿菌按GB 4789.40-2010規(guī)定的方法執(zhí)行;沙門氏菌按GB 4789.4-2010規(guī)定的方法執(zhí)行;單核細胞增生李斯特氏菌按GB 4789.30-2010規(guī)定的方法執(zhí)行;黃曲霉毒素B1按GB/T 5009.23-2006規(guī)定的方法進行;黃曲霉毒素M1按GB/T 18980-2003規(guī)定的方法進行。

3 結(jié)果及分析

3.1 嬰幼兒配方乳粉

3.1.1 菌落總數(shù)、蠟樣芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌和腸桿菌科細菌的檢測

對265份嬰幼兒配方乳粉樣品中的40份樣品進行了菌落總數(shù)、蠟樣芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌和腸桿菌科細菌的定量檢測,結(jié)果見表2。

表2 嬰幼兒配方乳粉菌落總數(shù)、蠟樣芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌和腸桿菌科細菌檢測結(jié)果

(續(xù)表)

結(jié)果顯示:40份嬰幼兒配方乳粉樣品均未檢出金黃色葡萄球菌;34份樣品菌落總數(shù)含量＜1000 cfu/g(其中9份樣品菌落總數(shù)＜10cfu/g),未超過GB 10765-2010《嬰兒配方食品》[3]的可接受水平限量值(m值),其余6份樣品菌落總數(shù)＞1000cfu/g(其中最高為6300cfu/g),也均未超過GB 10765-2010最高安全限量值(M值);13份樣品檢出腸桿菌科細菌(代替大腸菌群計數(shù)),檢出率32.5%;14份樣品檢出蠟樣芽孢桿菌,檢出率35%。

3.1.2 致病菌檢測

(1)對265份嬰幼兒配方乳粉樣品進行致病菌的檢測,共檢出阪崎腸桿菌11份,檢出率4.2%;沙門氏菌和單核細胞增生李斯特氏菌均未檢出。

(2)265份嬰幼兒配方乳粉樣品中,在國內(nèi)市場上購買了50個品牌244份樣品,檢出阪崎腸桿菌10份,檢出率4.1%;口岸送檢原料乳粉及原裝乳粉21份,檢出阪崎腸桿菌1份,檢出率4.8%。國內(nèi)市場上購買樣品和口岸送檢樣品,阪崎腸桿菌的檢出率基本一致。

(3)265份嬰幼兒配方乳粉樣品中,牛乳粉260份,檢出阪崎腸桿菌11份;羊乳粉5份,均未檢出阪崎腸桿菌。

3.1.3 黃曲霉毒素檢測

265份嬰幼兒配方乳粉樣品中,口岸送檢的21份樣品未檢出黃曲霉毒素;國內(nèi)市場上購買的樣品中有3份檢出黃曲霉毒素。其中NF027樣品為羊乳粉,檢出黃曲霉毒素B1含量為0.32μg/kg;NF022樣品和NF029樣品為牛乳粉,分別檢出黃曲霉毒素M1含量為0.57μg/kg和0.22μg/kg;其余樣品中均未檢出黃曲霉毒素M1和黃曲霉毒素B1。

2005年歐盟新的限量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定:在包括谷類食物在內(nèi)的嬰幼兒食品以及在具有特別醫(yī)療目的的嬰兒食品中,黃曲霉毒素B1的最大限量均為0.1 μg/kg。2010年我國國家衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)[3-5]規(guī)定嬰兒配方食品、嬰幼兒谷類輔助食品中黃曲霉毒素M1或B1最大限量為0.5μg/kg。本次采集調(diào)查的嬰幼兒配方乳粉樣品中檢出3份樣品含有黃曲霉毒素,其中1份樣品黃曲霉毒素M1含量為0.57μg/kg,超過我國國家衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。其余2份樣品分別有檢出黃曲霉毒素B1和黃曲霉毒素M1,雖然符合國家衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定,但超過歐盟2005年的限量標(biāo)準(zhǔn)。

3.2 補充谷物食品

42份補充谷物食品樣品中包括38份國內(nèi)生產(chǎn)樣品(編號MF001-MF038),4份口岸送檢樣品(編號MF039MF042),主要為嬰幼兒即食的各類米粉、麥粉以及強化添加各類蔬菜、肉類、魚類和強化因子的米粉和麥粉。

3.2.1 菌落總數(shù)、蠟樣芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌和腸桿菌科細菌的檢測

對42份補充谷物食品樣品進行了菌落總數(shù)、蠟樣芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌和腸桿菌科細菌的定量檢測,結(jié)果見表3。

表3 嬰幼兒補充谷物食品菌落總數(shù)、蠟樣芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌和腸桿菌科檢測結(jié)果

結(jié)果顯示,所有補充谷物食品樣品均未檢出蠟樣芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌;3份樣品檢出腸桿菌科細菌,檢出率7.1%;42份樣品中編號為MF042的進口嬰兒米粉被檢出菌落總數(shù)數(shù)量最高,為170000 cfu/g,遠遠超過嬰幼兒輔助谷類食品國家標(biāo)準(zhǔn)10000cfu/g的最高安全限量要求。

3.2.2 致病菌檢測

對42份補充谷物食品樣品進行致病菌的檢測,檢出阪崎腸桿菌1份,檢出率2.4%,檢出樣品為國內(nèi)生產(chǎn)的嬰兒米粉(MF005);沙門氏菌和單核細胞增生李斯特氏菌均未檢出。

3.2.3 黃曲霉毒素檢測

42份補充谷物食品樣品中均未檢出黃曲霉毒素B1和黃曲霉毒素M1。

3.3 餅干食品

40份餅干樣品中包括30份國內(nèi)生產(chǎn)樣品和10份進口及口岸抽檢樣品,主要有嬰幼兒食用的磨牙棒、手指餅、嬰兒餅干等。

3.3.1 菌落總數(shù)、蠟樣芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌和腸桿菌科細菌的檢測

40份餅干樣品中都未檢出蠟樣芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌和腸桿菌科細菌;有22份樣品的菌落總數(shù)＜10 cfu/g,其余樣品均不超過500 cfu/g。

3.3.2 致病菌檢測

對40份餅干食品進行致病微生物檢測,檢出阪崎腸桿菌1份,檢出率為2.5%,樣品為國內(nèi)生產(chǎn)的餅干樣品(MYB009);所有餅干食品均未檢出沙門氏菌和單核細胞增生李斯特氏菌。

3.3.3 黃曲霉毒素檢測

40份餅干樣品中均未檢出黃曲霉毒素B1和黃曲霉毒素M1。

3.4 罐頭食品

嬰幼兒罐頭食品樣品共計10份,全部為國內(nèi)生產(chǎn)的產(chǎn)品,主要包括各種蔬菜泥、水果泥以及蔬菜肉制品混合食品。

3.4.1 菌落總數(shù)、蠟樣芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌和腸桿菌科細菌的檢測

罐頭食品的菌落總數(shù)、蠟樣芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌和腸桿菌科結(jié)果見表4。

表4 嬰幼兒罐頭食品的菌落總數(shù)、蠟樣芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌和腸桿菌科檢測結(jié)果

表4結(jié)果顯示,10份嬰幼兒罐頭食品樣品的菌落總數(shù)含量最高為360cfu/g,均滿足GB 10770-2010《嬰幼兒罐裝輔助食品》[6]規(guī)定的限量要求;金黃色葡萄球菌和腸桿菌科計數(shù)都小于3.0 MPN/g;從樣品FZ004和FZ010中檢出一定數(shù)量的蠟樣芽孢桿菌,檢出率為20%。

3.4.2 致病菌檢測

由于嬰幼兒罐頭食品的需求量較小,嬰幼兒罐頭食品與乳粉、米粉以及餅干相比,其市場銷售的品牌和品種較少,因此本次調(diào)查所取的嬰幼兒罐頭食品的樣品數(shù)較少。從所取的10份樣品中均未檢出阪崎腸桿菌、沙門氏菌和單核細胞增生李斯特氏菌。

3.4.3 黃曲霉毒素檢測

10份嬰幼兒罐頭食品樣品中均未檢出黃曲霉毒素B1和黃曲霉毒素M1。

4 討論

2004年FAO/WHO制定嬰幼兒配方乳粉標(biāo)準(zhǔn)時,在日內(nèi)瓦召開了嬰幼兒配方乳粉的專家研討會。研討會專家根據(jù)嬰幼兒配方乳粉中有關(guān)微生物或微生物毒素在嬰幼兒配方乳粉中存在和引起嬰幼兒疾病的證據(jù),將微生物危害分為3類[7]。

(1)阪崎腸桿菌和沙門氏菌屬于A類,它們與嬰兒疾病之間有確定的因果關(guān)系,都能引起嬰幼兒疾病(如全身感染、壞死性小腸結(jié)腸炎和嚴(yán)重的腹瀉),并且它們都能在乳粉中檢出。

1)阪崎腸桿菌主要對新出生嬰兒,尤其是對發(fā)育不良、免疫功能低下的嬰幼兒最具感染性[8]。受到污染的嬰幼兒配方乳粉,是嬰幼兒感染傳播的媒介和來源[8]。陸崢等人[9]調(diào)查了179份北京市售國產(chǎn)嬰幼兒配方奶粉及嬰幼兒食品,共檢出11株阪崎腸桿菌,其中82份牛配方乳粉的陽性檢出率為1.22%,6份羊配方乳粉的陽性檢出率為66.67%,嬰幼兒配方米粉的檢出率為8.45%;2004年,我國阜陽劣質(zhì)奶粉樣品中污染陽性率為12.6%[10]。本次調(diào)查結(jié)果表明,我國嬰幼兒配方乳粉、補充谷物食品等存在阪崎腸桿菌的污染,嬰幼兒配方乳粉的阪崎腸桿菌檢出率為4.2%,補充谷物食品的檢出率為2.4%,餅干食品中也首次報道檢出阪崎腸桿菌。

2)在本次調(diào)查中未檢出沙門氏菌陽性樣品,配方乳粉和其他嬰幼兒食品中檢出沙門氏菌的報道也很少,來自FAO/WHO資料也顯示極少在終產(chǎn)品中檢測到沙門氏菌[7]。由于某些沙門氏菌血清型有可能以很低劑量致病,這對嬰兒來說可能要求給予特別關(guān)注,尤其是對那些高度易感的嬰幼兒,如早產(chǎn)兒、低體重兒和免疫受損的嬰幼兒。

(2)腸桿菌科的細菌被FAO/WHO定為B類危害的微生物[7],已確認可引起嬰幼兒致病(如全身感染、壞死性小腸結(jié)腸炎和嚴(yán)重的腹瀉),并且可在嬰幼兒食品中檢出,但是從流行病學(xué)或微生物學(xué)上,并不能確認受到腸桿菌科污染的嬰幼兒食品是引起嬰幼兒疾病的傳播媒介和來源。本次調(diào)查對分離到的腸桿科菌細菌進行鑒定,確認檢出陰溝腸桿菌、泛菌屬、非脫羧勒克氏菌、解鳥氨酸拉烏爾菌和產(chǎn)酸克雷伯氏菌等。

(3)蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和單核細胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)等被FAO/WHO列為C類微生物[7],這些菌雖然在嬰幼兒食品中檢出,但沒有確認引起嬰幼兒相應(yīng)的病癥。本次調(diào)查從嬰幼兒食品中檢出蠟樣芽孢桿菌16份,其中配方乳粉中檢出14份,檢出率為35%;罐頭食品檢出2份,檢出率為20%。蠟樣芽孢桿菌可產(chǎn)生致吐毒素和致腹瀉毒素,致吐毒素耐熱,是引起食物中毒的主要成分,從原料乳中分離出的83株菌中85%是致腹瀉毒素陽性菌株[11]。目前,尚未見蠟樣芽孢桿菌污染嬰幼兒食品引起致病的研究和報道,也未見相關(guān)的國家衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)對蠟樣芽孢桿菌的限量要求,但近年來對我國部分地區(qū)原料奶中微生物污染調(diào)查的結(jié)果表明[12],蠟樣芽孢桿菌在原料乳中的污染不容樂觀,因此有必要對加強對我國嬰幼兒配方乳粉中蠟樣芽孢桿菌的監(jiān)測和監(jiān)管。

(4)對3份檢出黃曲霉毒素的樣品進行霉菌檢測,其中從NF027中分離到青霉菌,NF022和NF029號樣品沒有檢出任何霉菌生長,因此可以推斷出配方乳粉中的霉菌、黃曲霉和黃曲霉毒素之間不存在必然的聯(lián)系。嬰幼兒配方乳粉中的黃曲霉毒素可能主要來自飼料中黃曲霉毒素的污染,通過奶牛乳汁的分泌而最終污染到產(chǎn)品。

[1] 劉秀梅,裝曉燕,郭云昌.中國安徽阜陽劣質(zhì)嬰兒配方粉中阪崎腸桿菌的污染[J].中國食品衛(wèi)生雜志,2005,11(1):10-12.

[2] 吳雅兒.因喂服染有蠟樣芽胞桿菌奶粉引起嬰兒腹瀉1例[J].海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2003,9(5):4.

[3] GB 10765-2010嬰兒配方食品[S].

[4] GB 10767-2010較大嬰兒和幼兒配方食品[S].

[5] GB 10769-2010嬰幼兒谷類輔助食品[S].

[6] GB 10770-2010嬰幼兒罐裝輔助食品[S].

[7] Joint FAO/WHO workshop on Enterobacter sakazakii and othermicroorganisms in powdered infant formula,Geneva,2004-02-02-05.

[8] Van Acker J,De Smet F,Muyldermans G,et al.Outbreak of necrotizing enterocolitis associated with Enterobacter sakazakiiin powdered milk formula[J].Journal of Clinical Microbiology,2001,39(1):293-297.

[9] 陸崢,王麗麗,王迪,等.北京市售國產(chǎn)嬰幼兒配方奶粉及嬰幼兒食品帶染阪崎腸桿菌調(diào)查[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2008,18(1):140-141.

[10] 劉秀梅,裝曉燕,郭云昌.中國安徽阜陽劣質(zhì)嬰兒配方粉中阪崎腸桿菌的污染[J].中國食品衛(wèi)生雜志,2005,11(1):10-12.

[11] GR IFFTHS M W.Toxin production by psychotropic Bacillus spp.present in milk[J].Food Protect,1990,53(9):790-792.

[12] 吳海清,陳慶森,龐廣昌,等.津晉豫魯部分地區(qū)原料奶中微生物污染情況調(diào)查[J].食品科學(xué),2008,29(5):373-377.

Survey and Analysis of Contamination Level of Microorganism and Microbial Toxin in Infant Foods

Jiang Yinghui1,Lei Zhiwen1,MaWeixing1,Zhang Jian1,Han Lijuan2,Xu Yanli1

(1.Shandong Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,Qingdao,Shandong,266002;2.Rongcheng Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau)

To survey and assay the contamination level of microorganism and microbial toxin in infant food,which includ formula milk powder,added cereal,biscuits and canned food.The results showed that Salmonella spp and Listeria monocytogenes were not detected in 357 kinds of infant food samples.Eleven strains of E.sakazakii were detected in infant formula milk powder,one in added cereals and one in biscuits,the detection rate was 4.2%,2.4%and 2.5%respectively.The aerobic plate count in one added cereal was exceeded the limit of national food safety standard.Thirteen of 40(32.5%)infant formula milk powders and 3 of 42(7.1%)added cereals were contaminated with bacteria of Enterobacteriaceae.Fourteen of 40(35%)infant formula milks and 2 of 10(20%)canned food were detected contaminated with Bacillus cereus.Aflatoxin M1 was excessive in one infant formula milk powder.Infant foods have the risks in microbial and microbial toxin contamination,the monitoring and supervision of pathogenic microorganisms and toxins in infant food should be strengthened.

Infant Food;Contamination;Toxin;Survey;Assay

R187

國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局課題(2006IK138)