蒙健宗，馬少敏

(1.廣西大學生命科學與技術學院，廣西南寧 530004;

2.南寧發(fā)酵與酶工程技術研究中心，廣西南寧 530003;

3.南寧邦爾克生物技術有限責任公司，廣西南寧 530003)

杏鮑菇中海藻糖和多糖含量分析

蒙健宗1，2，馬少敏2，3

(1.廣西大學生命科學與技術學院，廣西南寧 530004;

2.南寧發(fā)酵與酶工程技術研究中心，廣西南寧 530003;

3.南寧邦爾克生物技術有限責任公司，廣西南寧 530003)

采用高效液相色譜法測定了用不同培養(yǎng)基栽培的杏鮑菇中海藻糖的含量，結果表明杏鮑菇具有高于香菇的海藻糖含量，采用含有機質(zhì)豐富的材料栽培杏鮑菇可提高海藻糖和多糖的含量，在基本培養(yǎng)基中添加15%大麥蟲沙栽培時，杏鮑菇鮮品的海藻糖含量可達2.03g/100g，提高了54.9%，添加20%的沼渣時，多糖含量可提高約一倍。

杏鮑菇，海藻糖，多糖

海藻糖(Trehalose)是由兩個葡萄糖分子以α，α，1，1－糖苷鍵構成的非還原糖，它在自然界的生物體內(nèi)既可作為結構組分，也可用于提供能量，還是許多生物的應激代謝物，具有在脫水、冷凍等逆性條件下保護生物膜、蛋白質(zhì)結構和活性的功能［1］。近年來海藻糖在動物實驗中被發(fā)現(xiàn)具有防治骨質(zhì)疏松癥［2］、亨廷頓舞蹈病和眼咽肌營養(yǎng)不良癥等蛋白質(zhì)構象?。?－4］的作用，并具有抗腫瘤的活性［5］，含有海藻糖成分的天然食品受到更多關注。杏鮑菇(Pleurotus eryngii)是一種很有商品價值的藥食兩用菌類，其蛋白質(zhì)、氨基酸等營養(yǎng)成分和保健功效已多有研究［6］，但尚未見杏鮑菇中海藻糖成分的研究報道。本文對不同栽培方法生產(chǎn)的杏鮑菇中海藻糖和多糖含量進行了測定分析。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

杏鮑菇 廣西科學院生物研究所提供;沼渣取自德?？h坡堂村;大麥蟲糞沙 取自廣西大學動物科學與技術學院潘紅平教授實驗基地;桑枝桿、麩皮、石灰、過磷酸鈣等 市售;苯酚、硫酸、D－無水葡萄糖、乙醇等 市售，分析純;乙腈 色譜純;海藻糖標準品 Sigma90208，純度≥99.5%。

JJ－1000精密電子天平，HC－2517高速離心機，721E型可見分光光度計，Waters201DC高效液相色譜儀(含1525二元泵、2414示差折光檢測器)，BM215C食品攪拌器，臥式圓形壓力蒸汽滅菌器，HH－4數(shù)顯恒溫水浴鍋。

1.2 實驗方法

1.2.1 杏鮑菇栽培分組 按照培養(yǎng)基不同分為七組，基本培養(yǎng)基組:80%桑枝桿，8%麩皮，1%石灰，1%過磷酸鈣;5%大麥蟲沙組:95%基本培養(yǎng)基+5%大麥蟲沙;10%大麥蟲沙組:90%基本培養(yǎng)基+10%大麥蟲沙;15%大麥蟲沙組:85%基本培養(yǎng)基+15%大麥蟲沙;10%沼渣組:90%基本培養(yǎng)基+10%沼渣;20%沼渣組:80%基本培養(yǎng)基+20%沼渣;30%沼渣組:70%基本培養(yǎng)基+30%沼渣。

1.2.2 杏鮑菇栽培方法 取正常運行三個月以上的沼氣池中充分腐熟的沼渣，經(jīng)自然瀝水后充分曬干。將粉碎桑枝桿、麩皮及大麥蟲沙或沼渣按配方稱量，加水至65%，充分拌勻，輕輕壓實培養(yǎng)料使之成堆，以薄膜袋覆蓋悶堆發(fā)酵過夜;再加入石膏及過磷酸鈣，充分拌勻，檢查含水量后即裝入 33×17×0.005cm的聚乙烯塑料袋，于0.143MPa，125℃下蒸汽滅菌2.5h，冷卻至室溫后接種。室溫暗培養(yǎng)發(fā)菌，菌絲滿袋后，再維持3d，即可進行出菇管理。杏鮑菇的菇體呈保齡球形，菌蓋平整，邊緣微內(nèi)卷，孢子尚未彈射時即可采收，此時一般可達到:菇蓋直徑4～6cm，菇柄長6～8cm。

表1 杏鮑菇鮮菇中海藻糖含量

表2 杏鮑菇干品中粗多糖含量

1.2.3 海藻糖含量測定 稱取25.0g鮮杏鮑菇，切成小塊，加 100m L去離子水，機械攪拌破碎 2m in，12000r/min離心10m in，取上清液，定容到100m L，用0.45μm微孔濾膜過濾，濾液用于高效液相色譜分析。色譜條件:依利特 Hypersil NH2(4.6mm×300mm，5μm)，柱溫 30℃，流動相為乙腈/純水 (70/30，V/V)，流速 1.0m L/m in，進樣量 10μL，以外標法計算試樣中海藻糖濃度［7］。

1.2.4 多糖含量測定 將杏鮑菇鮮菇子實體在60℃烘干，粉碎，過20mm孔徑篩，稱取1.0g置50m L具塞離心管，用5m L水浸潤樣品，緩慢加入20m L無水乙醇，漩渦振搖使混合均勻，置超聲提取器中提取30m in;4000 r/m in離心10min，棄去上清液。不溶物用80%乙醇溶液10m L洗滌、離心;用水將上述不溶物轉移入圓底燒瓶，加入50m L蒸餾水，裝上磨口冷凝管，于沸水浴中提取2h。冷卻至室溫，過濾，將上清液轉移至100m L容量瓶中，殘渣洗滌3次，洗滌液轉至容量瓶中，加水定容。

吸取以上試液1.0m L于20m L具塞試管中，加入5%苯酚溶液1.0m L，快速加入濃硫酸5.0m L，靜置10m in;使用漩渦振蕩器使反應液充分混合，置30℃水浴中反應顯色20m in，取出在波長490nm下測定吸光度，以蒸餾水代替樣品溶液作為空白。以20～100μg/m L的葡萄糖溶液制作標準曲線［8］。

2 結果與分析

2.1 海藻糖測定圖譜

高效液相色譜測定海藻糖的各種方法中，采用氨基柱和乙腈/純水流動相系統(tǒng)，可很好地分離海藻糖、麥芽糖和葡萄糖等成分，是測定食品中海藻糖含量的適合方法［7］。海藻糖標樣和杏鮑菇樣品中海藻糖的HPLC圖譜如圖1所示。

2.2 杏鮑菇中海藻糖含量

測定不同培養(yǎng)基栽培的杏鮑菇鮮菇中的海藻糖含量，結果如表1所示。

圖1 海藻糖HPLC圖譜

食用菌類由菌絲體轉為子實體生長(即由營養(yǎng)生長轉為生殖生長)階段時供給海藻糖，海藻糖供給越多，子實體越飽滿。國外已有報道在一些食用菌干品中含有較高的海藻糖含量，如香菇(Shiitake)11.5g/100g、真姬菇(Honshimeji)10.4g/100g、雙孢蘑菇(Common mushroom)10.0g/100g、滑菇(Nameko)23.0g/100g［9］，本實驗栽培的各組杏鮑菇鮮品水分含量約92%，折算成干品后海藻糖含量比香菇、真姬菇和蘑菇高，低于滑菇。在基本培養(yǎng)基中添加大麥蟲沙和沼渣栽培均可提高杏鮑菇中海藻糖的含量，添加15%大麥蟲沙栽培時，杏鮑菇鮮品的海藻糖含量可達2.03g/100g，比基本培養(yǎng)基栽培的杏鮑菇中海藻糖含量高54.9%。食用菌類中的海藻糖含量，遠高于羊棲菜(0.27g/100g)等海藻類，與干酵母的海藻糖含量(11.6g/100g)相似［9］，但與干酵母相比，食用菌類可以直接作為食品食用，是天然食品中最豐富的海藻糖來源。

2.3 杏鮑菇多糖含量

3 結論

杏鮑菇子實體肥厚，質(zhì)地脆嫩，味道鮮美，兼具杏仁和鮑魚風味，含有豐富的營養(yǎng)成分，所含的多糖類物質(zhì)具有多種生物活性，是一種很有商品化前景的藥食兩用菌類。除直接食用鮮菇和干品外，將杏鮑菇提取多糖、制備復合保健飲料等深加工產(chǎn)品的開發(fā)也日漸增多。本實驗對生物活性成分海藻糖含量的分析測定結果表明，杏鮑菇中含有高于香菇、真姬菇的海藻糖成分，使杏鮑菇藥食兩用的價值得到進一步的提升，對杏鮑菇栽培和加工利用產(chǎn)業(yè)將起到良好的促進作用。本實驗還初步表明，在基本培養(yǎng)基中添加大麥蟲沙和沼渣等有機質(zhì)豐富的材料，可提高杏鮑菇的海藻糖和多糖含量，對提高杏鮑菇栽培的經(jīng)濟效益提供了一定參考。

［1］Kuwajima K，Goto Y，Hirata F，et al.Water and Biomolecules，physical chemistry of life phenomena［M］.Berlin Heidelberg:Springer－Verlag，2009:219－240.

［2］Ariyasu T，Arai C，Yoshizane C，et al.Trehalose augments osteoprotegerin production in the FHs74Int human intestinal epithelial cell line［J］.In Vitro Cell Dev Biol Anim，2002，38(1):30－34.

［3］Tanaka M，Machida Y，Niu S，et al.Trehalose alleviates polyglutamine－mediated pathology in a mouse model of Huntington disease［J］.Nat Med，2004，10(2):148－1541.

［4］Davies J E，Sarkar S，Rubinsztein D C.Trehalose reduces aggregate formation and delays pathology in a transgenic mouse model of oculopharyngeal muscular dystrophy［J］.Human Molecular Genetics，2006，15(1):23－31.

［5］Ukawa Y，Gu Y，Ohtsuki M，et al.Antitumor effect of trehalose on sarcoma 180 in ICRmice［J］.The Japanese Society of Applied Glycoscience，2005，52:367－368.

［6］王鳳芳.杏鮑菇中營養(yǎng)成分的分析測定［J］.食品科學，2002，23(4):132－135.

［7］馬少敏，韋航，蒙健宗.酶法生產(chǎn)海藻糖的定量分析方法［J］.大眾科技，2008(10):111－112.

［8］邢增濤，門殿英，唐慶九，等.中華人民共和國農(nóng)業(yè)標準食用菌中粗多糖含量的測定 NY/T 1676－2008［M］.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，2008:10.

［9］奧和之，澤谷郁夫，茶園博人，等.食品中のトレハロース含量［J］.日本食品科學工學會誌，1998，45(6):381－384.

［10］鄭素玲，郭立英，范永山.杏鮑菇多糖對老齡小鼠抗疲勞能力的影響［J］.食品科學，2010，31(7):269－271.

Determination of trehalose and polysaccharide in Pleurotus eryngii

MENG Jian－zong1，2，MA Shao－min2，3

(1.College of Life Science and Technology，Guangxi University，Nanning 530004，China;

2.Nanning Fermentation and Enzyme Engineering Research Center，Nanning 530003，China;

3.Nanning Bioclone Biotech Co.，Ltd.，Nanning 530003，China)

The content of trehalose in Pleurotus eryngii was determined with HPLC.The results showed that the content of trehalose in Pleurotus eryngii was higher than that in Shiitake.And higher content of trehalose and polysaccharide occurred on more nutritious medium.Trehalose could enhance to 2.03g/100g by additive of 15%Zophobas morio feces，and polysaccharide could be double by additive of 20%biogas residue.

Pleurotus eryngii;trehalose;polysaccharide

TS255.1

A

1002－0306(2011)08－0174－03

2011－01－04

蒙健宗(1972－)，男，副研究員，主要從事生物工程技術研究。

世行貸款生態(tài)家園應用研究項目(桂201006A)。