張 靜，于三科，王 新*，喬明宇，周 婷，夏效東，楊保偉，席美麗，孟江洪

(1.西北農(nóng)林科技大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，陜西 楊凌 712100；2.西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，陜西 楊凌 712100)

嬰幼兒奶粉和米粉中金黃色葡萄球菌的分離鑒定及其毒素基因檢測(cè)

張 靜1,2，于三科2，王 新1,*，喬明宇1，周 婷2，夏效東1，楊保偉1，席美麗1，孟江洪1

(1.西北農(nóng)林科技大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，陜西 楊凌 712100；2.西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，陜西 楊凌 712100)

目的：了解嬰幼兒奶粉和米粉中金黃色葡萄球菌的污染及其毒素基因的攜帶情況。方法：采集陜西省18個(gè)地區(qū)不同品牌的嬰幼兒奶粉143份和米粉224份，按國(guó)標(biāo)法和PCR方法進(jìn)行金黃色葡萄球菌分離鑒定；采用PCR方法檢測(cè)ses基因、ets基因、tsst-1基因和pvl基因。結(jié)果：367份樣品中檢測(cè)出30個(gè)金黃色葡萄球菌污染樣品，檢出率為8.17%，其中奶粉11.19%(16/143)、米粉6.25%(14/224)，分別從中分離鑒定出29株和25株金黃色葡萄球菌；從54株金黃色葡萄球菌中共檢測(cè)到有64.8%(35/54)的菌株攜帶有毒素基因，其中奶粉72.4%(21/29)、米粉56.0%(14/25)；奶粉分離株中檢測(cè)到的毒素基因型有pvl、sea、seb、sed、seg、sea＋pvl、seb＋seg、seb＋sed＋seg、sec＋pvl、sec＋seg＋pvl和seg＋pvl，其檢出率分別為10.3%(3/29)、3.4%(1/29)、3.4%(1/29)、3.4%(1/29)、6.9%(2/29)、6.9%(2/29)、6.9%(2/29)、3.4%(1/29)、3.4%(1/29)、13.8%(4/29)和 10.3%(3/29)；米粉分離株中檢測(cè)到的毒素基因型有pvl、sed、seg、sea＋seg＋pvl、sec＋pvl、sec＋seg、sec＋see＋seg、sec＋see＋seg＋pvl、see＋pvl和seg＋pvl，其檢出率分別為8%(2/25)、4%(1/25)、4%(1/25)、4%(1/25)、4%(1/25)、8%(2/25)、4%(1/25)、4%(1/25)、4%(1/25)和12%(3/25)。奶粉和米粉中都沒(méi)有檢測(cè)到ets、tsst-1和seh、sei、sej基因。結(jié)論：嬰幼兒奶粉和米粉中均存在一定程度的金黃色葡萄球菌的污染，且多數(shù)菌株都攜帶一定的毒素基因，這對(duì)消費(fèi)這些產(chǎn)品的嬰幼兒身體健康構(gòu)成潛在的危險(xiǎn)。

奶粉；米粉；金黃色葡萄球菌；毒素基因

金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，S. aureus)是一種重要的食源性致病菌，在很多國(guó)家，它被認(rèn)為是第二大食源性致病菌，僅次于沙門氏菌，占細(xì)菌性食物中毒的33%[1]；該菌在加拿大引起食物中毒的發(fā)生率更高，占45%[2]。金黃色葡萄球菌在自然界很常見(jiàn)，在土壤、空氣、動(dòng)物及健康人群等均可存在。食品從農(nóng)田到餐桌過(guò)程中均可能受到污染。嬰兒食品如奶粉、米粉等食品的加工過(guò)程雖受到嚴(yán)格的控制，但還是可能會(huì)受到不同程度的污染，這些被金黃色葡萄球菌污染的食物，可能會(huì)引起嬰兒對(duì)該菌的感染或食物中毒。

金黃色葡萄球菌產(chǎn)生多種外毒素，主要有腸毒素(staphylococcal enterotoxins，Ses)，剝脫毒素(exfoliative toxins，Ets)，中毒休克毒素-1(toxic-shock syndrome toxin-1，Tsst-1)和殺白細(xì)胞素(paton-valentine leukocidin，Pvl)等[3-7]。腸毒素是引起食物中毒的主要致病因子，除Sea、Seb、Sec和Sed這4種早已被鑒定的血清型外，近幾年還發(fā)現(xiàn)了See、Seg、Seh、Sei、Sej等新型腸毒素[8-10]。剝脫毒素大約5%的金黃色葡萄球菌產(chǎn)生，該毒素主要引起皮散熱功能失調(diào)，最嚴(yán)重的是引起金黃色葡萄球菌散熱性皮膚灼傷綜合癥，對(duì)嬰幼兒和兒童危害嚴(yán)重[11-12]。中毒休克毒素-1是中毒休克毒素中最重要的一種，它對(duì)女性危害嚴(yán)重，可產(chǎn)生高水平的抗體，從而引起局部或全身的中毒休克綜合癥[13]。大約5%的金黃色葡萄球菌存在殺白細(xì)胞素，該毒素可引起皮膚、軟組織感染和嚴(yán)重的壞死性肺炎[14]。

近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外對(duì)雞肉、豬肉、冰激凌、涼拌菜等各種食品中金黃色葡萄球菌污染狀況和毒素基因攜帶情況有較多的調(diào)查報(bào)道，但國(guó)內(nèi)外對(duì)嬰幼兒奶粉和米粉中金黃色葡萄球菌的報(bào)道較少。奶粉和米粉已成為嬰幼兒必備的輔助食物或主要食物，鑒于其原料的易污染性，嬰幼兒食品中可能存在被金黃色葡萄球菌污染。本研究采用國(guó)標(biāo)培養(yǎng)法和PCR方法進(jìn)行分離鑒定S. aureus及其毒素基因檢測(cè)，初步了解嬰幼兒奶粉和米粉中S.aureus的流行狀況及毒素基因分布情況，為嬰幼兒食品的安全評(píng)估提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 培養(yǎng)基和主要試劑

緩沖蛋白胨水(BPW)、胰蛋白胨大豆肉湯(TSB)、Barid-Parker培養(yǎng)基(BP)、LB營(yíng)養(yǎng)瓊脂 北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司；TaqDNA聚合酶、dNTPs、2000bp DNA marker、引物 大連寶生物公司；瓊脂糖(agarose)美國(guó)Sigma公司；甘油、氯化鈉 西安化學(xué)試劑廠。

1.2 樣品采集及S. aureus分離

2010年7、8月采集陜西省18個(gè)地區(qū)不同品牌的嬰幼兒奶粉和米粉樣品共計(jì)367份，其中奶粉143份、米粉224份。依據(jù)GB/T 4789.10—2008《金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)》方法，取25g奶粉或米粉樣品接種于225mL的BPW培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24h，取增菌培養(yǎng)液3mL接種于30mL 7.5% NaCl TSB肉湯中，37℃培養(yǎng)24h。用棉簽從增菌液中劃到Baird-Parker Agar平板中，37℃培養(yǎng)24h，每個(gè)可疑樣品挑取1～2個(gè)菌落，進(jìn)行純化培養(yǎng)。nuc基因的PCR反應(yīng)條件，參照文獻(xiàn)[12]執(zhí)行，最后取5μL PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測(cè)，進(jìn)行S. aureus確證。

1.3 基因組 DNA的提取

用棉簽蘸取純培養(yǎng)細(xì)菌，置入裝有500μL蒸餾水的離心管中，混勻。加熱煮沸30min后，13000r/min離心5min，取上清液。于－30℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 PCR擴(kuò)增及引物設(shè)計(jì)

按照Brakstad等[15]的報(bào)道，執(zhí)行nuc基因的引物合成和擴(kuò)增條件，以確定金黃色葡萄球菌。按照王琴等[16]報(bào)道執(zhí)行pvl基因引物合成和擴(kuò)增條件。按照Peles等[6]的報(bào)道執(zhí)行ses和tsst-1引物合成和擴(kuò)增條件。按照Noguchi等[17]的報(bào)道執(zhí)行剝落毒素基因(eta、etb基因)引物合成和擴(kuò)增條件。以上引物均由大連寶生物公司合成，引物序列及片段長(zhǎng)度見(jiàn)表1。

1.5 電泳

PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，凝膠量為1%，利用標(biāo)準(zhǔn)大小的DNA Marker，觀察電泳完成后的凝膠，并記錄PCR擴(kuò)增的結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1S. aureus分離鑒定

367份樣品中檢測(cè)出30個(gè)金黃色葡萄球菌污染樣品，檢出率為8.17%，其中奶粉143份當(dāng)中有16份(11.19%)金黃色葡萄球菌陽(yáng)性，并從中分離鑒定出29株金黃色葡萄球菌；米粉224份當(dāng)中有14份(6.25%)金黃色葡萄球菌陽(yáng)性，從中分離鑒定出25株金黃色葡萄球菌，結(jié)果如表2所示。

表1 PCR擴(kuò)增引物Table 1 Oligonucleotide primers used in PCR

表2 嬰幼兒奶粉和米粉中金黃色葡萄球菌分離情況Table 2 Prevalence of S.aureus in infant milk powder and rice cereal

2.2 毒素基因的檢測(cè)

本研究對(duì)54株金黃色葡萄球菌菌株進(jìn)行毒素基因檢測(cè)，結(jié)果如表3所示。共檢測(cè)到35株(64.8%)細(xì)菌攜帶有毒素基因，其中奶粉21株(72.4%)、米粉14株(56.0%)；pvl的檢出率為40.57%(22/54)，奶粉和米粉分離株的檢出率分別為44.83%(13/29)和36%(9/25)。奶粉分離株中攜帶的毒素基因型有pvl、sea、seb、sed、seg、sea＋pvl、seb＋seg、seb＋sed＋seg、sec＋pvl、sec＋seg＋pvl基因和seg＋pvl基因，其檢出率分別為10.3%(3/29)、3.4%(1/29)、3.4%(1/29)、3.4%(1/29)、6.9%(2/29)、6.9%(2/29)、6.9%(2/29)、3.4%(1/29)、3.4%(1/29)、13.8%(4/29)和10.3%(3/29)。奶粉分離株腸毒素基因攜帶率最高的是seg基因占41.4%(12/29)；米粉分離株中攜帶的毒素基因型分別為p v l、s e d、seg、se a＋se g＋pv l、sec＋pv l、se c＋se g、sec＋see＋seg、sec＋see＋seg＋pvl、see＋pvl基因和seg＋pvl基因，檢出率分別為8%(2/25)、4%(1/25)、4%(1/25)、4%(1/25)、4%(1/25)、8%(2/25)、4%(1/25)、4%(1/25)、4%(1/25)和 12%(3/25)；米粉分離株腸毒素基因攜帶率最高的是seg基因，占41.4%(12/29)。奶粉和米粉中都沒(méi)有檢測(cè)到ets、tsst-1、seh、sei基因和sej基因。

表3 54株金黃色葡萄球菌ets、tsst-1、pvl和ses毒素基因檢測(cè)結(jié)果Table 3 PCR detection of ets, tsst-1,pvl and ses genes from 54 Staphylococcus aureus isolates

3 討 論

金黃色葡萄球菌是重點(diǎn)監(jiān)測(cè)的人畜共患致病菌，原則上不允許在食品中檢出。但從本研究結(jié)果可以看出，嬰幼兒奶粉和米粉中均存在金黃色葡萄球菌的污染，污染率分別是11.19%和6.25%。與印伯星等[18]報(bào)道的從生牛奶中金黃色葡萄球菌的污染率為16.27%基本一致；而與雷云瑞等[19]報(bào)道食品中的金黃色葡萄球菌的污染率66.7%存在較大差異，這可能與采集的樣品種類、采樣地點(diǎn)及包裝方式等有關(guān)。此外，近年來(lái)，由于“劣質(zhì)奶粉”事件的頻發(fā)，使政府加強(qiáng)了對(duì)嬰幼兒食品的監(jiān)管，這可能也是此次檢出率較低的原因之一。

從表3可以看出，嬰幼兒奶粉和米粉中金黃色葡萄球菌攜帶毒素基因型存在的種類眾多，但兩者菌株所攜帶的毒素基因的類型不同，其中奶粉和米粉的毒素基因的陽(yáng)性率分別為72.4%(21/29)和56%(14/25)，表示同一地區(qū)不同食品中可能污染的來(lái)源及途徑可能不同，流行株也有可能不同，因此，毒素基因的檢出率和菌株攜帶毒素基因的類型也不同。pvl的檢出率為40.57%(22/54)，奶粉和米粉分離株的檢出率分別為44.83%(13/29)和36%(9/25)，這都與Gillet等[14]報(bào)道的檢出率小于4.5%有較大差異，說(shuō)明不同國(guó)家和地區(qū)pvl的檢出率不同，提示食品中pvl毒素基因的流行可能具有地域性，也說(shuō)明了陜西省市售嬰幼兒奶粉和米粉中S. aureus菌株攜帶pvl毒素基因較高，應(yīng)加強(qiáng)該毒素的檢測(cè)。

章樂(lè)怡等[8]通過(guò)用PCR法測(cè)定食物中毒及食品中金黃色葡萄球菌的腸毒素基因(sea-sej)研究表明，腸毒素基因檢測(cè)率84.41%，其中在食品樣品分離株中，腸毒素基因攜帶率最高的是seh基因，而食物中毒標(biāo)本分離株中，腸毒素基因攜帶率最高的是sea基因。李婉芬報(bào)道[9]生牛奶中金黃色葡萄球菌腸毒素基因(sea-seq)檢測(cè)率為56.36%，腸毒素基因攜帶率最高的是50.9%sej，其次為seg和sem，分別為23.63%和18.8%。本研究中腸毒素基因(sea-sej)的檢出率為55.6%(30/54)，其中在奶粉樣品分離株中，腸毒素基因攜帶率最高的是seg基因占41.4%(12/29)，而米粉分離株中腸毒素基因攜帶率最高的也是seg基因占36%(9/25)。這可能與菌株來(lái)源不同、不同食品加工處理過(guò)程中程序不同，以及操作人員的攜帶情況不同等有關(guān)，也進(jìn)一步說(shuō)明了不同地區(qū)，不同食品中金黃色葡萄球菌腸毒素基因流行情況不同。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)PCR方法檢測(cè)到這些腸毒素基因的存在，可能存在這些腸毒素基因不表達(dá)[20]，但是現(xiàn)在腸毒素的檢測(cè)僅限制在傳統(tǒng)腸毒素Sea、Seb、Sec、Sed和See上，現(xiàn)在越來(lái)越多的報(bào)道證實(shí)除Sea-See以外的新型腸毒素也可以引起食物中毒[10]。而PCR方法不僅可以檢測(cè)傳統(tǒng)腸毒素基因還可以檢測(cè)許多新型腸毒素基因[8-10]，這樣可以快速檢測(cè)到這些腸毒素基因的存在，可以快速判定這些腸毒素可能存在，降低由金黃色葡萄球菌腸毒素引起食物中毒的風(fēng)險(xiǎn)。

有人認(rèn)為傳統(tǒng)腸毒素Sea、Seb、Sec、Sed和See占金黃色葡萄球菌引起食物中毒的95%，而新型腸毒素僅占5%[8]。本次研究發(fā)現(xiàn)，新型腸毒素seg基因也廣泛存在于金黃色葡萄球菌中，并且比較有趣的是在本次檢驗(yàn)的樣品中新型腸毒素seg基因最多，占38.9%(21/54)。國(guó)內(nèi)王贊信等[10]對(duì)一起食物中毒金黃色葡萄球菌腸毒素基因(sea-sej基因)進(jìn)行檢測(cè)，僅檢測(cè)到了seg基因和sei基因，說(shuō)明seg基因和sei基因的存在可能與中毒有關(guān)。在本研究中也檢測(cè)到了傳統(tǒng)腸毒素sea、seb、sed基因和see基因的存在，進(jìn)一步說(shuō)明陜西省市售嬰幼兒奶粉和米粉中存在一定的安全隱患。嬰幼兒作為一個(gè)特殊的抵抗力弱的群體，對(duì)于其食品的安全性，更應(yīng)時(shí)刻引起注意。相關(guān)企業(yè)應(yīng)嚴(yán)格按照國(guó)家有關(guān)的規(guī)定進(jìn)行生產(chǎn)，確保嬰幼兒的身體健康提供良好的保證。同時(shí)相關(guān)部門也應(yīng)加強(qiáng)監(jiān)管的力度，確保嬰幼兒食品的安全。

[1] ATANASSOVA V, MEINDL A, RING C. Prevalence ofStaphylococcus aureusandStaphylococcal enterotoxinsin raw pork and uncooked smoked ham: a comparison of classical culturing detection and RFLPPCR[J]. Int J Food Microbiol, 2001, 68(1/2):105-113.

[2] 張嚴(yán)峻, 張俊彥, 梅玲玲, 等. 金黃色葡萄球菌腸毒素基因的分型和分布[J]. 中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2005, 15(6): 682-684.

[3] FRANCIS J S, DOHERTY M C, LOPATIN U, et al. Severe community-onset pneumonia in healthy adults caused by methicillin-resistantStaphylococcus aureuscarrying the Panton-Valentine leukocidin genes[J]. Clin Infect Dis, 2005, 40(1):100-107.

[4] MORONEY S M, HELLER L C, ARBUCKLE J, et al. Staphylococcal cassette chromosome mec and Panton-Valentine leukocidin characterization of methicillin-resistantStaphylococcus aureusclones[J]. J Clin Microbiol, 2007, 45(3): 1019-1021.

[5] DINGES M M, ORWIN P M, SCHLIEVERT P M. Exotoxins ofStaphylococcus aureus[J]. Clin Microbiol Rev, 2000, 13(1): 16-34.

[6] PELES F, WAGNER M, VARGA L, et al. Characterization ofStaphylococcus aureusstrains isolated from bovine milk in Hungary[J]. Int J Food Microbiol, 2007, 118(2): 186-193.

[7] SUDAGIDAN M, AYDIN A. Virulence properties of methicillin-susceptibleStaphylococcus aureusfood isolates encoding Panton-Valentine Leukocidin gene[J]. Int J Food Microbio, 2010, 138(3): 287-291.

[8] 章樂(lè)怡, 李毅, 馬雪蓮. 食物中毒及食品中金黃色葡萄球菌的腸毒素及基因的研究[J]. 中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2009, 19(12): 2851-2853.

[9] 李婉芬. 生牛奶中金黃色葡萄球菌腸毒素基因的檢測(cè)與分布[J]. 中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2008, 18(5): 843- 844; 849.

[10] 王贊信, 張俊彥, 朱敏, 等. 一起食物中毒金黃色葡萄球菌腸毒素基因的檢測(cè)[J]. 中國(guó)衛(wèi)生驗(yàn)雜志, 2006, 16(6): 665-666; 668.

[12] SHAMEZ L, CHRISTOPHER L J, DENISE P L, et al. Clinical,microbial, and biochemical aspects of the exfoliative toxins causing staphylococcal scalded-skin syndrome[J]. Clin Microbiol Rev, 1999, 12(2): 224-242.

[13] RAUMANNS J, KAUFHOLD A, BEHRENDT W, et al. Verlaufendes nicht-menstruelles Toxic-shock-syndrom beiStaphylococcus aureussepsis[J]. Anaesthesist, 1995, 44(12): 869-874.

[14] GILLET Y, ISSARTEL B, VANHEMS P, et al. Association betweenStaphylococcus aureusstrains carrying gene for Panton-Valentine leukocidin and highly lethal necrotising pneumonia in young immunocompetent patients[J]. Lancet, 2002, 359: 753-759.

[15] BRAKSTAD O G, AASBAKK K, MAELAND J A. Detection ofStaphylococcus aureusby polymerase chain reaction amplification of thenucgene[J]. J Clin Microbiol, 1992, 30(7): 1654-1660.

[16] 王琴, 楊麗美, 駱?lè)杰? 等. 金黃色葡萄球菌耐藥性及mecA、qacA/B和pvl基因檢測(cè)[J]. 中華臨床感染病雜志, 2009, 2(2): 102-105.

[17] NOGUCHI N, NAKAMINAMI H, NISHIJIMA S, et al. Antimicrobial agent of susceptibilities and antiseptic resistance gene distribution among methicillin-resistantStaphylococcus aureusisolates from patients with impetigo and staphylococcal scalded skin syndrome[J]. J Clin Microbiol,2006, 44(6): 2119-2125.

[18] 印伯星, 巢國(guó)祥, 顧瑞霞. 生乳中金黃色葡萄球菌產(chǎn)腸毒素特性及耐藥性分析[J]. 食品研究與開(kāi)發(fā), 2006, 27(11): 43-46.

[19] 雷云瑞, 柴文平, 解立滿. 廊坊市食品中金黃色葡萄球菌的檢測(cè)及污染狀況分析[J]. 食品與發(fā)酵科技, 2010, 46(1): 100-104.

[20] OMOE K, ISHIKAWA M, SHIMODA Y, et al. Detection ofseg,seh,andseigenes inStaphylococcus aureusisolates and determination of the enterotoxin productivities ofS. aureusisolates harboringseg,seh, orseigenes[J]. Journal of Clinical Microbiology, 2002, 40(3): 857-862.

Isolation, Identification and Toxin Genes Detection ofStaphylococcus aureusStrains from Infant Milk Powder and Infant Rice Cereal

ZHANG Jing1,2，YU San-ke2，WANG Xin1,*，QIAO Ming-yu1，ZHOU Ting2，XIA Xiao-dong1，YANG Bao-wei1，XI Mei-li1， MENG Jiang-hong1
(1. College of Food Science and Engineering, Northwest A&F University, Yangling 712100, China；2. College of Veterinary Medicine, Northwest A&F University, Yangling 712100, China)

Objective: To investigate the prevalence and toxin genes profile ofStaphylococcus aureusin infant milk powder and infant rice cereal marketed in Shaanxi province, China. Methods: Totally 367 various samples from 18 regions in Shaanxi province were tested by the national standard method to isolateStaphylococcus aureus; the nuc genes were examined to confirmStaphylococcus aureusstatus;Staphylococcus aureusenterotoxin genes, exfoliative toxins genes, toxic-shock syndrome toxin-1 gene and Panton-Valentine Leukocidin gene were detected by PCR. Results: Of 367 samples examined, 30 were positive forStaphylococcus aureus, result in a positive rate of 8.17% (30/367), including 11.19% (16/143) milk powder samples and 6.25%(14/224) rice cereal samples. From these positive samples, 29 and 25 strains were isolated from milk powder and rice cereal samples respectively. Among all identifiedStaphylococcus aureusisolates, 34 strains harbored at least one of the tested toxin genes.The toxins gene profiles detected inS. aureusfrom infant milk powder samples werepvl,sea,seb,sec,sed,seg,seb＋seg,sec＋segandseb＋sed＋seg, and their positive rates were 44.82% (13/29), 10.34% (3/29), 13.79% (4/29), 17.24% (5/29), 6.89% (2/29),41.38% (12/29), 10.34% (3/29), 10.34%(3/29) and 3.45% (1/29) respectively; The toxin gene profiles inS. aureusfrom infant rice cereal samples werepvl,sea,sec,sed,see,seg,sea＋seg,sec＋segandsec＋see＋seg, and the positive rates were36% (9/25), 4% (1/25), 20% (5/25), 4% (1/25), 12% (3/25), 36% (9/25), 4%(1/25), 16% (4/25) and 8% (2/25), respectively. Neitherets,tsst-1,seh,seinorsejgenes were detected in infant milk powder or infant rice cereal. Conclusion: Infant milk powder and infant rice cereal in Shaanxi province were contaminated withS. aureus, some of which contained various toxin genes. The existence of the pathogen in these food products may constitute a potential risk for infants,health.

infant milk powder；infant rice cereal；Staphylococcus aureus；toxins genes

2010-12-22

張靜(1987—)，女，碩士研究生，研究方向?yàn)閯?dòng)物疾病防治。E-mail：0503108029@163.com

*通信作者：王新(1973—)，男，講師，博士，研究方向?yàn)槭吃葱圆≡胺肿由飳W(xué)。E-mail：xinwang7516@yahoo.com.cn

X172

A

1002-6630(2011)20-0167-04