羅 紅魏雙元稅丕先

（1 榮縣中醫(yī)院，四川 榮縣 646000；2 綿陽市中醫(yī)院，四川 綿陽 646000；3 瀘州醫(yī)學院，四川 瀘州 646000）

肝蘇膠囊的提取工藝比較研究

羅 紅1魏雙元2稅丕先3

（1 榮縣中醫(yī)院，四川 榮縣 646000；2 綿陽市中醫(yī)院，四川 綿陽 646000；3 瀘州醫(yī)學院，四川 瀘州 646000）

目的探討肝蘇膠囊的提取工藝。方法利用不同的煎煮時間、不同的加水倍數(shù)及不同的煎煮次數(shù)進行考察，優(yōu)化提取工藝；用Diamonds C18柱（250 mm×4.6mm，5μm），測定波長370nm，流動相為甲醇-0.2%磷酸溶液（45∶55），采用HPLC法，以槲皮素為其含量測量指標篩選出最佳提取工藝。結(jié)果采用第一次加入藥材量12倍量的水煎煮2h，第二次加入藥材量8倍量的水煎煮1h的提取工藝，樣品中槲皮素含量較高，且提取工藝較優(yōu)化。結(jié)論該制劑采用煎煮兩次，第一次加入藥材量12倍量的水煎煮2h，第二次加入藥材量8倍量的水煎煮1h的提取工藝，最經(jīng)濟實用。

肝蘇顆粒；提??；槲皮素；高效液相色譜

肝蘇膠囊收載于《國家藥品監(jiān)督管理局標準》（標準編號：YBZ08462005），由扯根菜（Penthorum Chinese Pursh）單味中藥經(jīng)提煉加工而成，具有降酶，保肝，退黃，健脾之功效，適用于慢性活動性肝炎、乙型肝炎，也可用于治療急性病毒性肝炎[1]。肝蘇膠囊原提取工藝是將單味藥扯根菜切碎，煎煮三次，每次加藥材量10倍的水，煎煮2h，合并煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度1.13～1.15（80～90℃）的清膏。此提取工藝總的加水量過大，使?jié)饪s時間增長，而煎煮時間和煎煮次數(shù)也不科學，原提取工藝不僅浪費人力資源、能量和水資源，還增長了生產(chǎn)周期。因此應不斷優(yōu)化原提取工藝。本研究以該制劑標準要求之槲皮素為含量測定指標，確定最佳提取工藝。

1 材料與儀器

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗藥材

扯根菜，經(jīng)瀘州醫(yī)學院生藥教研室稅丕先教授鑒定為虎耳草科植物扯根菜Penthorum Chinese Pursh.的干燥地上部分。

1.1.2 實驗試藥

槲皮素對照品（經(jīng)五氧化二磷干燥，中國藥品生物制品檢定所，批號100081-200406）；甲醇（分析純和色譜純）；鹽酸；磷酸溶液；水為重蒸餾水。

1.2 實驗儀器

高效液相色譜儀（美國戴安公司，U3000）；色譜工作站（美國戴安公司，U3000）；Diamonds C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；電子天平；液體比重天平（PZ-B-5）；圓底燒瓶；回流管；燒杯等。

2 方法與結(jié)果

2.1 扯根菜的提取

用天平稱取100g扯根菜，切碎，置于盆中；按表1設定條件提取，將煎液加熱濃縮至相對密度約為1.15～1.18（60～65℃）的清膏。

2.2 槲皮素的含量測定

2.2.1 樣品液的制備

用40mL 2.3%的鹽酸甲醇溶液將清膏回流提取一個小時，冷卻后過濾于50mL的容量瓶中，再加甲醇稀釋至刻度線，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過后作為樣品溶液。

2.2.2 色譜條件

表1 扯根菜提取工藝表

色譜柱為Diamonds C18（250mm×4.6mm，5μm）；測波長：370nm；體積流量：1mL/min；柱溫：30℃；進樣量：10μL；流動相為甲醇-0.2%磷酸溶液（44∶55）；理論塔板數(shù)按槲皮素峰計算應不低于3000。

2.2.3 標準品的配置

用分析天平精密稱取于五氧化二磷真空干燥24h至恒重的對照品槲皮素10mg于50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成槲皮素濃度為0.2mg/mL的標準品溶液。

2.2.4 線性關系考察

精密吸取對照品溶液（0.2mg/mL）0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.5mL分別置于2mL容量瓶中，加甲醇稀釋到刻度線；各經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過后，用上述色譜條件，測定峰面積，以峰面積（Y）對進樣量（X，μg）回歸，得回歸方程：Y=74.8758X+0.0434，r=0.9997，槲皮素在0.4～1.5μg范圍內(nèi)有較好的線性關系。

2.2.5 精密度試驗

將6號樣品溶液連續(xù)進樣6次，按上述色譜條件測定，計算槲皮素峰面積的相對標準偏差RSD=1.3199%，表明儀器和色譜條件均具有良好的精密性。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗

取6號樣品溶液，在0～12h內(nèi)，每2h進樣1次，按上述色譜條件測定，計算槲皮素峰面積的RSD=1.4584%，表面樣品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7 重現(xiàn)性試驗

取同一批扯根菜6份，每份100g，按照6號樣品的提取方法提取，并按2.2.1的方法配置成樣品溶液，經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過后，用上述色譜條件進行測定，計算含量分別為0.1371 mg/mL，0.1362mg/mL，0.1348mg/mL，0.1330mg/mL，0.1312mg/mL，0.1299 mg/mL，則RSD=2.1208%（n=6），表明本法重現(xiàn)性良好。

2.2.8 回收率試驗

分別取2.2.7中樣品各1mL，以兩個樣品溶液為一組，分別加入槲皮素標準品粉末0.11mg、0.13mg、0.15mg，混勻。依照上述色譜條件測定，計算得槲皮素的回收率如表2。

表2 加樣回收率試驗測定結(jié)果

2.2.9 樣品測定

分別將1～11號樣品進樣進行含量測定，并將數(shù)據(jù)填入表3。

表3 槲皮素含量測定表

3 討 論

3.1 肝蘇膠囊處方中扯根菜為苗族民間的草藥，又稱趕黃草，具有清熱解毒、退黃利濕、活血散瘀、利水消腫之功效，廣泛用于治療各型肝炎、膽囊炎、脂肪肝等[2,3]。經(jīng)數(shù)年來臨床療效觀察，已證實有顯著的治療作用，可繼續(xù)深化對其提取制備工藝的研究，在能夠充分提取扯根菜有效成分的基礎上簡化工藝流程，實現(xiàn)其符合大生產(chǎn)的要求。

3.2 關于指標成分的選定

扯根菜中含有黃酮類、有機酸類等成分，其中已知并且穩(wěn)定存在的為沒食子酸、槲皮素[4]，另外還有槲皮苷（槲皮素-3-O-鼠李糖苷）、喬松素-7-O-葡萄糖苷等其他黃酮成分[5]。槲皮素是肝蘇膠囊的主要成分，也是有效成分[6]，肝蘇膠囊標準中以其為含量測定指標。已有文獻報道采用HPLC法測定扯根菜中槲皮素，測定方法準確，重復性好，安全穩(wěn)定，不需要復雜的儀器設備，可用于扯根菜煎液中槲皮素的含量測定[7,8]，以確定其最佳的提取工藝。

3.3 加水量的確定

在實驗探討階段，100g扯根菜第一次煎煮加入600mL（藥材量6倍量）的水，干燥藥材本身要吸收一部分，剩下的水煎煮不到一小時就會煎干，因此排除了加600mL（藥材量6倍量）水的煎煮方案；100g扯根菜第一次煎煮加入800mL（藥材量8倍量）或者900mL（藥材量9倍量）的水，煎煮一個小時，在煎煮過程中需要非常小心，火候沒有控制好，就會煎干，且最后剩下的煎液很少，因此第一次煎煮加800mL（藥材量8倍量）或者900mL（藥材量9倍量）的水不實用；而照原工藝，第一次煎煮加入1000mL（藥材量10倍量）的水，煎煮2h也必須嚴格控制好火候，最后剩下的煎液很少，此方案用于工業(yè)大生產(chǎn)不實際；經(jīng)過多次實驗探究，第一次煎煮加入1200mL（藥材量12倍量）的水，第二次、三次加800mL（藥材量8倍量）或者900mL（藥材量9倍量）的水，這樣的方案煎煮實用且最后剩下的煎液量適中。

3.4 數(shù)據(jù)分析

經(jīng)過實驗，從表二可以看出5號樣品中槲皮素的含量最低，原提取工藝第11號樣品中槲皮素含量居中，8號樣品中槲皮素含量最高，6號樣品次之；各樣品中槲皮素的含量按8、6、2、1、3、11、9、10、4、7、5的標號，依次減少。8號樣品的提取工藝是煎煮3次，第一次加1200mL（藥材量12倍量）的水，煎煮2h，第二次加入800mL（藥材量8倍量）的水，煎煮1h，第三次加入800mL（藥材量8倍量）的水，煎煮1h；6號樣品的提取工藝是煎煮2次，第一次加1200mL（藥材量12倍量）的水，煎煮2h，第二次加入800mL（藥材量8倍量）的水，煎煮1h；相比較，6號樣品的提取工藝更簡單，消耗的能源更少；而8號樣品中槲皮素的含量僅比6號樣品中槲皮素的含量僅多0.0004 mg/mL，結(jié)合提取工藝，采用6號樣品的提取工藝更優(yōu)化。

4 結(jié) 論

6號樣品中槲皮素含量高，且提取工藝優(yōu)化，即肝蘇膠囊趕黃草應煎煮2次，第一次加藥材量12倍量的水煎煮2h，第二次加藥材量8倍量的水煎煮1h，提取時間短、提取次數(shù)少，槲皮素含量相對較高，最經(jīng)濟實用。

[1]于維萍,楊培民,孫洪勝,等.新編中成藥手冊[M].青島:青島出版社,2006:317.

[2]黨月蘭,龔經(jīng)緯.紅毛五加總苷的鎮(zhèn)痛作用[J].中國藥物依賴性雜志,1998,7(2): 88-92.

[3]黨月蘭,駱 勤,李淑玉.紅毛五加總苷的抗炎作用[J].中藥藥理與臨床,2000,16(1): 14-18.

[4]江蘇新醫(yī)學院.中藥大辭典(上冊)[M].上海:上?？茖W技術出版社,1995:841.

[5]樓之岑,秦波.常用中藥材品種整理和質(zhì)量研究(北方編第2冊)[M].北京:北京大學醫(yī)學出版社,1995:1037.

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[7]劉艷清.HPLC-ELSD測定肝蘇顆粒中槲皮素的含量[J].中成藥,2006,28(2):277-288.

[8]徐珽,楊林,唐堯.高效液相色譜法測定肝蘇顆粒中槲皮素的含量[J].中國醫(yī)院藥學雜志,2007,27(1):123-124.

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1671-8194（2011）34-0301-03