彭薔，朱明華，曾怡，王林，孫濤，高星

四川省疾病預(yù)防控制中心 毒理檢驗(yàn)所，四川 成都 610041

單采血細(xì)胞分離器的血液相容性檢測(cè)

彭薔，朱明華，曾怡，王林，孫濤，高星

四川省疾病預(yù)防控制中心 毒理檢驗(yàn)所，四川 成都 610041

單采血細(xì)胞分離器是用于人體血液成分的采集和分離的醫(yī)療器械產(chǎn)品，對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行血液相容性檢測(cè)，以保障產(chǎn)品臨床使用的安全性和有效性。選擇單采血細(xì)胞分離器3個(gè)主要部件：軟管、泵管和收集袋為試驗(yàn)樣品，以進(jìn)口同類(lèi)型產(chǎn)品為陰性參照品，按照GB/T16886.4-2003和GB/T14233.2－2005標(biāo)準(zhǔn)的要求和方法進(jìn)行溶血試驗(yàn)、PTT試驗(yàn)和體外自發(fā)性血小板聚集等3個(gè)體外試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果顯示試驗(yàn)樣品的溶血率小于5%，凝血時(shí)間和血小板最大聚集率和陰性參照品無(wú)顯著性差異（P>0.05）。表明單采血細(xì)胞分離器對(duì)血液紅細(xì)胞、凝血系統(tǒng)和血小板功能無(wú)明顯不良影響，產(chǎn)品具有良好的血液相容性。

血液相容性檢測(cè)；單采血細(xì)胞分離器；血液分離機(jī)；體外檢測(cè)法

單采血細(xì)胞分離器與血細(xì)胞分離機(jī)配套使用，用于人體血小板、紅細(xì)胞和白細(xì)胞等血液成分的采集、分離、回輸和貯存。產(chǎn)品主要由管路系統(tǒng)、血收集袋和分離袋等部件組成，采用全封閉式血細(xì)胞分離系統(tǒng)進(jìn)行采血和回輸，安全性能良好，可有效杜絕感染。使用該產(chǎn)品采集血小板含量高，血小板采集效率與進(jìn)口同類(lèi)型產(chǎn)品近似，而價(jià)格較進(jìn)口同類(lèi)型產(chǎn)品低廉[1]，可替代進(jìn)口產(chǎn)品使用。單采血細(xì)胞分離器是一次性使用的輸血器具，該產(chǎn)品在醫(yī)療器械分類(lèi)管理中屬于Ⅲ類(lèi)醫(yī)療器械，要求產(chǎn)品具有良好的血液相容性，以保障產(chǎn)品臨床使用的安全性和有效性。根據(jù)ISO10993-4和GB/T16886.4-2003《醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià) 第4部分：血液相互作用試驗(yàn)選擇》的要求和試驗(yàn)選擇指南，我們選擇了溶血試驗(yàn)、部分凝血激活酶時(shí)間（Partial Thrombo Plastin Time，PTT）試驗(yàn)和體外自發(fā)性血小板聚集等3個(gè)體外試驗(yàn)[2-3]，并按照GB/T14233.2-2005《醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法 第2部分：生物學(xué)試驗(yàn)方法》進(jìn)行產(chǎn)品的血液相容性檢測(cè)[4]。

1 材料

1.1 試驗(yàn)材料及制備

（1）試驗(yàn)樣品為一次性使用單采血細(xì)胞分離器，型號(hào)：B-2000Ⅰ型（四川南格爾生物醫(yī)學(xué)股份有限公司提供）。試驗(yàn)樣品選擇軟管、泵管和收集袋等3個(gè)主要部件。

（2）陰性參照品選擇795A 軟管和采集袋（美國(guó)血液技術(shù)公司MCS系列血細(xì)胞采集儀一次性使用附件）、4R2180T泵管（美國(guó)百特公司CS3000 Plus血細(xì)胞分離機(jī)分離管路）等3個(gè)材料。

（3）陽(yáng)性參照品選用市售工業(yè)用聚氨酯管和天然橡膠塊。

（4）材料制備：軟管和泵管樣品剪切成約0.3cm長(zhǎng)的小段；收集袋剪切成約0.5cm×0.5cm大小片狀。

1.2 主要設(shè)備和試劑

7520型分光光度計(jì)（上海分析儀器廠）、CA-50自動(dòng)血液凝固分析儀（日本Sysmex Corporation）、TSHZ臺(tái)式水浴恒溫振蕩器（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械一廠）、APACT2 雙通道血小板聚集儀（德國(guó)蘭波公司）、兔腦磷脂混懸液（中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血研究所提供）。

2 方法

2.1 溶血試驗(yàn)

試驗(yàn)樣品組每管加入試驗(yàn)樣品2g，再加入氯化鈉注射液10mL；陰性對(duì)照管每管加入氯化鈉注射液10mL；陽(yáng)性對(duì)照管每管加入蒸餾水10mL，每組各平行操作3管。全部試管放入恒溫水浴中（37±1）℃ 保溫30min后，每支試管加入0.2mL新鮮稀釋抗凝兔血，置（37±1）℃水浴中繼續(xù)保溫60min。倒出管內(nèi)液體，離心5 min（800g）。吸取上清液移入比色皿內(nèi)，用分光光度計(jì)在545nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。記錄各管光密度值。溶血率按下式計(jì)算：

式中：A-試驗(yàn)樣品組吸光度；B-陰性對(duì)照組吸光度；C-陽(yáng)性對(duì)照組吸光度。

2.2 部分凝血激活酶時(shí)間（PTT）試驗(yàn)

將新鮮枸櫞酸鈉抗凝的健康人靜脈血以2000g離心10min，分離出貧血小板血漿（Platelet Poor Plasma，PPP）。將0.2g 試驗(yàn)樣品分別放入聚丙烯管中，加入1mL PPP，置（37±1）℃水浴恒溫振蕩器中以60rpm與血漿接觸15min。不加試驗(yàn)樣品的空白對(duì)照血漿（PPP）管同法操作，每個(gè)樣品各平行操作3 管。吸取 50μL血漿置于血凝分析儀測(cè)定管中，分別加入50μL的兔腦磷脂混懸液和50μ L 0.025mol/L氯化鈣溶液。用Sysmex CA-50自動(dòng)血液凝固分析儀分別測(cè)定各管凝血時(shí)間，并按下式計(jì)算各組平均凝血時(shí)間占空白對(duì)照百分?jǐn)?shù)：

式中：BC-平均凝血時(shí)間占空白對(duì)照百分?jǐn)?shù)；t-試驗(yàn)樣品平均凝血時(shí)間；t0-空白對(duì)照平均凝血時(shí)間。

2.3 體外自發(fā)性血小板聚集試驗(yàn)

將新鮮枸櫞酸鈉抗凝的健康人靜脈血以100g離心10min，取出上層富血小板血漿（Platelet Rich Plasma，PRP）；將余下的血液以2000g離心10min，取出上層貧血小板血漿（PPP）。將0.1g試驗(yàn)樣品放入聚丙烯管中，加入1mL富血小板血漿（PRP）。空白對(duì)照組只加入1mL PRP，每個(gè)樣品各平行操作3管。將聚丙烯管封蓋置于20～25℃室溫下與血漿接觸1h。分別吸取200μL的富血小板血漿（PRP）和貧血小板血漿（PPP）于血小板聚集儀比濁管中，在APACT2雙通道血小板聚集儀中分別將PRP和PPP的透光度調(diào)節(jié)為90和10。吸取200μL的試驗(yàn)樣品血漿于比濁管中，在血小板聚集儀中攪拌10s，測(cè)定各樣品血小板聚集反應(yīng)，按下式計(jì)算血小板最大聚集率（MAR）：

式中：MAR-血小板最大聚集率；h1-距PRP基線(xiàn)的高度；h0-PRP基線(xiàn)與PPP基線(xiàn)之間的高度。

3 結(jié)果

使用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件，對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析。

3.1 溶血試驗(yàn)

試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。試驗(yàn)樣品組軟管、泵管和收集袋的溶血率均小于5%，符合溶血試驗(yàn)合格要求。而工業(yè)用聚氨酯管溶血率為6%，與試驗(yàn)樣品組比較有顯著性差異（P<0.01）。

表1 溶血試驗(yàn)結(jié)果

3.2 PTT試驗(yàn)

試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。試驗(yàn)樣品組軟管、泵管和收集袋的凝血時(shí)間與空白血漿和陰性參照品無(wú)顯著性差異（P>0.05）。工業(yè)用聚氨酯管和天然橡膠塊凝血時(shí)間較空白血漿明顯縮短（P<0.01）。

表2 PTT試驗(yàn)結(jié)果

3.3 體外自發(fā)性血小板聚集試驗(yàn)

試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。試驗(yàn)樣品組血小板最大聚集率小于10%，工業(yè)用聚氨酯管血小板聚集率大于試驗(yàn)樣品組（P<0.05）。

表3 血小板聚集試驗(yàn)結(jié)果

4 討論

血液相容性評(píng)價(jià)是醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)的重要組成部分，血液成分的功能及其與生物材料相互作用機(jī)理比較復(fù)雜，包含了許多相互獨(dú)立又相互聯(lián)系的過(guò)程，每一評(píng)價(jià)方法只能反映血液?jiǎn)我怀煞值姆磻?yīng)或單一階段的反應(yīng)特征，所以需與其他血液學(xué)試驗(yàn)方法和檢測(cè)指標(biāo)相結(jié)合，以準(zhǔn)確評(píng)價(jià)醫(yī)療器械的血液相容性[5]。單采血細(xì)胞分離器是與人體循環(huán)血液直接接觸的外部接入器械，根據(jù)GB/ T16886.4-2003和GB/T14233.2-2005標(biāo)準(zhǔn)的要求和方法，對(duì)單采血細(xì)胞分離器進(jìn)行血液相容性檢測(cè)。選擇溶血試驗(yàn)、PTT試驗(yàn)和體外自發(fā)性血小板聚集等3個(gè)體外試驗(yàn)，分別檢測(cè)試驗(yàn)樣品對(duì)血液紅細(xì)胞、血漿凝血系統(tǒng)和血小板功能等方面的影響。

體外溶血試驗(yàn)用于評(píng)價(jià)紅細(xì)胞損傷，可測(cè)定由于材料的物理和化學(xué)因素對(duì)紅細(xì)胞影響導(dǎo)致的紅細(xì)胞溶解和血紅蛋白釋放的程度，具有敏感性高、操作簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好的特點(diǎn)。經(jīng)試驗(yàn)測(cè)定，試驗(yàn)樣品的溶血率小于5%，符合溶血試驗(yàn)合格標(biāo)準(zhǔn)要求，與孫皎等人報(bào)道的PVC輸血粒料等材料的溶血試驗(yàn)結(jié)果一致[6]。

PTT試驗(yàn)是常用的凝血試驗(yàn)，測(cè)定試驗(yàn)樣品與貧血小板血漿接觸后，加入部分凝血激活酶和氯化鈣溶液后的血漿凝固時(shí)間。經(jīng)試驗(yàn)測(cè)定，試驗(yàn)樣品的凝血時(shí)間與空白血漿和陰性參照品無(wú)顯著性差異，提示試驗(yàn)樣品對(duì)血漿凝血系統(tǒng)無(wú)明顯激活作用。而天然橡膠塊和工業(yè)用聚氨酯管的凝血時(shí)間明顯縮短，提示這兩種材料可能對(duì)血漿凝血系統(tǒng)有激活作用。

體外自發(fā)性血小板聚集試驗(yàn)用于測(cè)定試驗(yàn)樣品對(duì)血小板聚集功能的影響，血小板聚集率大于20%，可確定血小板自發(fā)性聚集。經(jīng)試驗(yàn)測(cè)定，試驗(yàn)樣品的血小板最大聚集率小于10%，提示試驗(yàn)樣品未誘導(dǎo)血小板自發(fā)性聚集反應(yīng)，對(duì)血小板功能無(wú)明顯激活作用。

目前除溶血試驗(yàn)已建立了被廣泛接受的合格指標(biāo)外，其他血液相容性試驗(yàn)均沒(méi)有可參照的合格判定指標(biāo)。在很多情況下，器械與血液相互作用的可接受性評(píng)價(jià)是在與上市同類(lèi)型產(chǎn)品進(jìn)行比較，并在風(fēng)險(xiǎn)與受益評(píng)價(jià)的基礎(chǔ)上做出的[7]。在單采血細(xì)胞分離器的血液相容性檢測(cè)中，選擇進(jìn)口同類(lèi)型、同材質(zhì)并已上市的產(chǎn)品作為陰性參照品，單采血細(xì)胞分離器的血液相容性檢測(cè)結(jié)果與同類(lèi)型進(jìn)口產(chǎn)品相似。

5 結(jié)論

試驗(yàn)樣品對(duì)體外紅細(xì)胞無(wú)明顯損傷作用，對(duì)血漿凝血系統(tǒng)和血小板功能無(wú)明顯激活作用，與進(jìn)口同類(lèi)型產(chǎn)品具有等同性。單采血細(xì)胞分離器具有良好的血液相容性，能夠保證產(chǎn)品臨床使用的安全性和有效性。

[1] 林武存,劉鳳君,黎儒清,等.國(guó)產(chǎn)血細(xì)胞分離機(jī)采集血小板效果觀察[J].重慶醫(yī)學(xué),2009,38(12):1436-1437.

[2] ISO10993-4:2002.Biological evaluation of medical devices-Part4:Selection of tests for interactions with blood[S].

[3] GB/T16886.4-2003.醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià).第4部分:與血液相互作用試驗(yàn)選擇[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2003.

[4] GB/T14233.2-2005.醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法.第2部分:生物學(xué)試驗(yàn)方法[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2003.

[5] 胡國(guó)棟.聚氨酯的血液相容性評(píng)價(jià)[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)生物醫(yī)學(xué)工程分冊(cè),2002,25(6):271-284.

[6] 孫皎,顧國(guó)珍,錢(qián)云芳.生物材料不同接觸方式和條件對(duì)溶血作用影響的研究[J].生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志,2003,20(1):8-10.

[7] 由少華.醫(yī)療器械血液相容性評(píng)價(jià)與試驗(yàn)[J].中國(guó)醫(yī)療器械信息,2006,12(12):49-53.

The Hemocompatibility Tests for the Single Blood Cell Separator

PENG Qiang,ZHU Ming-hua,ZENG Yi,WANG Lin,SUN Tao,GAO Xing
Toxicology Testing Department,Sichuan Center for Disease Control and Prevention, Chengdu Sichuan 610041, China

The single blood cell separator is the medical devices used in collecting and separating human blood components. To ensure the products clinical use safety and effectiveness, the hemocompatibility tests were conducted. Three major components: the flexible pipeline, pump line and collecting bag were chosen for the samples, and the same type imports products for the negative reference material. According to the GB/T 16886.4-2003 and the GB/T14233.2-2005, the hemolysis test, the partial thrombo plastin time test and the blood platelet aggregation assay were conducted. The results showed that the hemolysis ratios of the samples were below than 5 percent. There were no significant differences in the partial thrombo plastin time and the platelet maximum aggregation rate between the samples and the negative reference materials（P>0.05）.The results indicated that there were little harmful effects of the single blood cell separator on the red blood cells,the coagulation system and the platelet function. The product had good hemocompatibility.

hemocompatibility test; single blood cell separator; blood separator; in vitro assay

R446.11；TH788+.4

B

10.3969/j.issn.1674-1633.2011.05.038

1674-1633(2011)05-0119-03

2010-12-08

作者郵箱：pengq86@126.com