馬守棟，李明春，曹恩惠，趙麗艷，葉 勇，程艷琴（解放軍第401醫(yī)院，青島市 266071）

納米銀溶液的質量標準研究Δ

馬守棟＊，李明春#，曹恩惠，趙麗艷，葉 勇，程艷琴（解放軍第401醫(yī)院，青島市 266071）

目的：為建立納米銀溶液的質量標準提供依據(jù)。方法：以透射電子顯微鏡、激光納米粒度測定儀測定納米銀溶液形態(tài)、粒徑、表面電位；按2010年版《中國藥典》“純化水”項下內容對納米銀溶液中的雜質進行檢查；以電感耦合等離子體發(fā)射光譜法測定納米銀溶液中銀的含量。結果：納米銀粒子呈類球形，粒徑約15.24nm，表面電位為－36.5mV；雜質檢查符合“純化水”的標準；納米銀溶液中銀含量約86μg·mL－1。結論：本研究為納米銀溶液質量標準的制定提供了依據(jù)。

納米銀溶液；質量標準；電感耦合等離子體發(fā)射光譜法

納米銀抗菌譜廣、抗菌作用強且細菌對其不產(chǎn)生耐藥性，可作為治療燒燙傷創(chuàng)面感染及其他原因引起的創(chuàng)面感染的理想外用藥。筆者在前期研究中以化學還原劑法制備了穩(wěn)定的納米銀溶液，并對其進行了純化，可用于制備凝膠劑、噴霧劑等多種納米銀制劑。為了控制其質量，保證臨床用藥的安全性和有效性，筆者對其質量標準進行了研究，針對納米銀的特性采用透射電子顯微鏡、激光納米粒度測定儀對其形態(tài)、粒徑、表面電位進行測定，按2010年版《中國藥典》“純化水”項下內容對納米銀溶液中的雜質進行檢查，以電感耦合等離子體發(fā)射光譜法測定其中銀的含量[1]。

1 儀器與試藥

PHS-3C型pH計（上海大普儀器有限公司）；FA1604型電子分析天平（上海衡平儀器儀表廠）；ZS90型激光納米粒度測定儀（英國馬爾文公司）；JEM型透射電子顯微鏡（日本電子公司）；UV-2101PC型紫外分光光度計（日本島津公司）；Prodigy型電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀（美國Leeman Labs公司）。

銀單元素標準溶液（以下簡稱銀標準液，編號：GBW08615，濃度：1000mg·L－1）、銦單元素溶液標準物質（內標，編號：GBW（E）07160，濃度：1000μg·mL－1）均由國家標準物質研究中心提供；納米銀溶液（自制，批號：20100311，規(guī)格：每瓶500mL，含銀量：86μg·mL－1）；硝酸銀等試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 性狀

本品為黃棕色略帶乳光的透明膠體溶液。

2.2 鑒別

2.2.1 紫外吸收。精密量取納米銀溶液1mL置于50mL容量瓶中，以蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，在200～600nm范圍內進行紫外掃描，光譜見圖1。

圖1 紫外掃描光譜圖Fig 1 UV scanning spectrum

圖2 納米銀透射電子顯微鏡照片F(xiàn)ig 2 Transmission electron micrograph of nanosilver

由圖1可知最大吸收波長為400nm，其為納米銀表面的原子共振吸收。

2.2.2 電鏡觀察。將制備的納米銀溶液以蒸餾水稀釋到一定濃度，滴到敷有Formvar膜的400目銅網(wǎng)上，滴加2%磷鎢酸負染，于空氣中干燥后，置于透射電子顯微鏡下觀察其形態(tài)，結果見圖2。

由圖2可知，所制備的納米銀粒子呈類球形，大小較均一。

2.2.3 粒徑測定。制備一定濃度的樣品溶液，以激光納米粒度測定儀測定樣品的粒徑及分布，結果見圖3。

圖3 納米銀的粒徑及分布測定結果Fig 3 Particle diameter and distribution of nanosilver

由圖3可知，絕大部分納米銀粒子的粒徑在15.24nm左右，分布范圍（15.24±3.51）nm，說明所制納米銀溶液中納米銀的粒徑小且均一性較好。

2.2.4 表面電位測定。制備一定濃度的樣品溶液，以激光納米粒度測定儀測定樣品的表面電位，結果見圖4。

圖4 納米銀的表面電位測定結果Fig 4 Surface potential of nanosilver

由圖4可知，納米銀粒子的表面電位為－36.5mV。

2.2.5 化學鑒別[2]。取本品20mL，加入硝酸使成澄清、無色、透明液體，將該液體于60℃蒸至近干，加水10mL，溶液顯銀鹽的鑒別反應。

2.3 檢查

2.3.1 pH值。取3批納米銀溶液適量，分別測定其pH值，并取其平均值，結果為6.3±0.1。

2.3.2 雜質。取納米銀溶液適量通過中空纖維超濾膜超濾，收集超濾液，按2010年版《中國藥典》“純化水”項下[2]方法分別檢查超濾液中的硝酸鹽、亞硝酸鹽、氨、易氧化物、重金屬。結果上述檢查項均符合標準要求。

2.4 含量測定

2.4.1 儀器條件。電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀，采用分級光柵和電荷注射裝置的固態(tài)檢測計進行元素分析。優(yōu)化后儀器工作條件和參數(shù)為：波長范圍175～900nm；高頻發(fā)生器頻率40.68MHz；射頻（RF）功率1100W；分析泵速50r·min－1，泵穩(wěn)定時間5s；冷卻氣流量 20L·min－1，輔助氣流量0.2L·min－1；垂直觀測高度15mm；積分時間5s；提升量1.1mL·min－1。讀出不同濃度下的譜線強度（即由光電檢測器測得的單位時間內光電荷的數(shù)量，單位：cts·s－1）。

2.4.2 標準液的制備。精密吸取銀標準液適量，以蒸餾水稀釋成4μg·mL－1的溶液。

2.4.3 供試品液的制備。精確移取0.50mL納米銀溶液置于10mL容量瓶中，加入0.8mL稀硝酸，微熱溶解至溶液無色透明，以水稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4.4 標準曲線的制備。分別精密量取銀標準液適量，以蒸餾水稀釋成2、4、6、8、10μg·mL－1的溶液。以銦作為內標，儀器的內標進樣管在儀器分析過程中始終插入內標溶液中，依次將儀器的樣品管插入各個濃度的標準品溶液中進行測定（濃度依次遞增）；以每一濃度測得的3次譜線強度讀數(shù)與內標讀數(shù)比值的平均值為縱坐標（Y），相應濃度（X）為橫坐標，作標準曲線，得Y＝0.16X－0.12（r＝0.9992）。結果，銀的檢測濃度線性范圍為2～10μg·mL－1。

2.4.5 精密度試驗。精密吸取銀標準液，連續(xù)測定5次，測定結果的RSD＝0.6%（n＝5），說明儀器性能良好。

2.4.6 回收率試驗。取已知銀含量的納米銀溶液適量，共9份，分別定量加入銀標準液適量，按“2.4.3”項下供試品液的制備方法制樣，測定其中銀的含量，計算回收率，結果見表1。

表1 回收率試驗結果Tab 1 Results of recovery tests

2.4.7 穩(wěn)定性試驗。取納米銀溶液適量1份，按“2.4.3”項下供試品液的制備方法制樣，分別于0、2、4、6、24h時進行測定，測得銀含量的RSD＝1.4%，表明供試品液在24h內穩(wěn)定性良好。

2.4.8 樣品含量測定。取3批樣品，按“2.4.3”項下供試品液的制備方法制樣，用電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀測定其中銀的含量。結果，3批納米銀溶液的銀含量分別為86.1、85.7、85.9μg·mL－1（平均約為86μg·mL－1），分別為標示量的100.1%、99.7%、99.9%。

3 討論

納米銀溶液的特征是含有納米級別的銀粒子，針對其特征，筆者以透射電子顯微鏡、激光納米粒度測定儀等對納米銀粒子進行了測定，確定了粒徑大小，揭示了粒子表面帶有較多的負電荷，這是納米銀粒子在溶液中保持穩(wěn)定不團聚的物質基礎。

制備納米銀時，在含有納米銀的最終反應液中，除納米銀外尚含有反應物和其他生成物等雜質，制備時已應用超濾法將這些雜質除去。為了保證產(chǎn)品的純度和驗證純化工藝的可靠性，筆者對納米銀溶液中的相關雜質進行了檢查。由于納米銀對某些雜質的檢查可產(chǎn)生干擾，為此對純化過的納米銀液再進行超濾，其目的是得到檢查雜質用的樣品液。由于所要檢查的雜質很容易通過超濾膜孔進入到超濾液中，所以超濾液中雜質的情況與納米銀液中雜質的情況是一致的，故收集超濾液檢查其中的相應雜質即可。筆者按《中國藥典》“純化水”項下相應雜質的檢查方法，對超濾液中雜質進行檢查，結果均符合規(guī)定，進一步說明純化工藝好，制備的納米銀純度高。本研究為納米銀溶液質量標準的制定提供了依據(jù)。

[1] 李明春，趙麗艷，馬守棟，等.電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法測定納米銀凝膠中銀的含量[J].中國藥房，2011，22（33）：3141.

[2] 國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（二部）[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄21、411.

Study on Quality Standard of Nanosilver Solutions

MA Shou-dong，LI Ming-chun，CAO En-hui，ZHAO Li-yan，YE Yong，CHENG Yan-qin（No.401Hospital of PLA，Qingdao 266071，China）

OBJECTIVE：To establish the quality standard for nanosilver solutions.METHODS：Morphology，particle size and surface potential of nanosilver solution were measured by the transmission electron microscope（TEM）and laser nano-particle size analyzer.According to the test of Chinese Pharmacopoeia（2010edition）for“purified water”，the impurities of nanosilver solution were checked.And the content of silver was determined by inductively coupled plasma emission spectrometry.RESULTS：The average size for nanosilver particles which had spherical shape was 15.24nm，and the surface potential was－36.5mV.The impurities were in accordance with the standard of“purified water”.The content of silver in the solution was 86μg·mL－1.CONCLUSION：The study provides the scientific data for the establishment of quality standard of nanosilver solutions.

Nanosilver solutions；Quality standard；Inductively coupled plasma emission spectrometry

R927.11；R982

A

1001-0408（2011）41-3892-02

Δ國家重大新藥創(chuàng)制科技重大專項資助項目（2008ZXJ09004-045）

＊副主任藥師，碩士研究生導師，博士。研究方向：藥物制劑。E-mail：leima518@126.com

#通訊作者：主任藥師，教授，碩士研究生導師。研究方向：藥物制劑、多糖藥理。電話：0532-51870086。E-mail：lmchun401@126.com

2010-12-17

2011-09-10）