李照晉 譚志軍 姜 偉 韓 旭 張建良

胃癌是我國發(fā)病率和病死率均很高的惡性腫瘤之一，早期診斷困難，復發(fā)和轉(zhuǎn)移率高?；熢诓豢汕谐靶g(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移的晚期胃癌治療中占據(jù)重要地位。如何在化療開始前篩選出針對個體的抗癌藥，預測個體腫瘤對藥物的敏感性，指導臨床選擇最適化療方案以提高療效，已成為胃癌個體化化療的關(guān)鍵問題。膠滴腫瘤藥敏檢測（collagen gel droplet culture drug-sensitivity test，CD-DST）技術(shù)是一種先進的體外藥敏檢測方法，在臨床治療和腫瘤相關(guān)基礎(chǔ)研究應用中已有成功的報道[1]。我院自2006年3月—2008年3月利用CD-DST技術(shù)選擇化療方案治療中晚期胃癌術(shù)后化療患者53例，取得較滿意效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本組共53例，將其中對FOLFOX4方案（奧沙利鉑、5-氟尿嘧啶和亞葉酸鈣）至少1種藥物體外有效者31例作為實驗組，男21例，女10例，平均年齡（63.77±9.41）歲，病理類型：腺癌17例，黏液腺癌9例，其他5例。將同期術(shù)后未經(jīng)CD-DST檢測而以FOLFOX4方案輔助化療的35例患者作為標準對照組，男26例，女9例，平均年齡（64.86±9.66）歲，病理類型：腺癌20例，黏液腺癌9例，其他6例。2組年齡（t=0.460）、性別（χ2=0.343）及病理類型（Z=0.115）差異無統(tǒng)計學意義（均P>0.05）。所有患者均經(jīng)病理診斷證實，卡氏功能狀態(tài)（KPS）評分≥60分，術(shù)后預計生存時間≥12個月。所有患者術(shù)前均未行放、化療，均為術(shù)后輔助化療且無化療禁忌證。

1.2 主要試劑與儀器 DMEM培養(yǎng)基、胰蛋白酶及胎牛血清（天津灝洋生物制品科技有限公司）；鼠尾膠原蛋白Ⅰ型（杭州生友生物技術(shù)有限公司）；阿霉素、依托泊苷、奧沙利鉑（ADM、VP-16、L-OHP，江蘇恒瑞制藥有限公司）；順鉑、5-氟尿嘧啶、絲裂霉素（DDP、5-FU、MMC，山東齊魯制藥有限公司）；48孔板（美國Corning公司）；倒置顯微鏡（日本Olympus公司）；Image-proplus 6.0圖像分析系統(tǒng)（美國Media Cybernetics公司）。

1.3 CD-DST實驗 無菌條件下切取新鮮腫瘤標本，剪碎、消化后經(jīng)篩網(wǎng)過濾，離心后加入培養(yǎng)基獲得單細胞懸液。冰浴條件下制備膠原蛋白-細胞混合溶液，接種于48孔細胞培養(yǎng)板。培養(yǎng)24 h后加入抗癌藥物，藥物測試濃度參考文獻[2]：阿霉素0.02 mg/L、依托泊苷0.10 mg/L、順鉑1.00 mg/L、5-氟尿嘧啶0.02 mg/L、絲裂霉素0.03 mg/L、奧沙利鉑1.00 mg/L。同時設(shè)不加藥陰性對照孔，繼續(xù)培養(yǎng)24 h。中性紅染色甲醛固定后，利用倒置顯微鏡拍照，利用圖像分析軟件計算腫瘤細胞數(shù)量。加藥處理組細胞數(shù)量與陰性對照組細胞數(shù)量的百分比值≤50%則認為藥物在體外有效，即腫瘤對該藥物敏感。

1.4 治療方法 2組患者均給予FOLFOX4方案治療，方法：奧沙利鉑85 mg/m2，靜脈滴注2 h，第1天；亞葉酸鈣200 mg/m2，靜脈滴注2 h，第1、2天；氟尿嘧啶400 mg/m2，靜脈注射，第1、2天，600 mg/m2持續(xù)靜脈滴注22 h，第1、2天。每2周重復。所有患者至少接受6周化療。每次化療前檢查血常規(guī)、肝腎功能和心電圖，化療期間每周復查血常規(guī)2次，化療結(jié)束后定期復查腹部B超和（或）CT。療效評定標準：采用回顧性分析法，評價1、3年無病生存率和1、3年總生存率。疾病無病生存時間為自化療開始至腫瘤病灶出現(xiàn)復發(fā)轉(zhuǎn)移或疾病進展的時間間隔。總生存時間為自治療開始至死亡或末次隨訪的時間間隔。不良反應按WHO抗癌藥物急性與亞急性毒性表現(xiàn)和分度標準[3]觀察和判斷。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件分析，符合正態(tài)分布的計量資料以±s表示，行t檢驗，計數(shù)資料以例（%）表示，采用χ2或秩和檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 體外藥敏檢測結(jié)果 53例患者中有8例對6種藥物均不敏感，26例（49.1%）只對1種藥物敏感，13例（24.5%）對2種藥物敏感，4例（7.5%）對3種藥物敏感，2例（3.8%）對4種藥物敏感。具體為對阿霉素敏感者10例（18.9%）、依托泊苷9例（17.0%）、順鉑12例（22.6%）、5-氟尿嘧啶16例（30.2%）、絲裂霉素7例（13.2%）、奧沙利鉑18例（34.0%）。

2.2 2組的生存率比較 實驗組的1年和3年無病生存率和總生存率均高于對照組，但只有3年總生存率差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表1。

表1 2組的生存率比較 例（%）

2.3 2組的不良反應比較 2組的不良反應類型構(gòu)成差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表2。

表2 2組的不良反應比較 例（%）

3 討論

隨著個體化治療成為腫瘤治療的主導思想，人們相繼建立了如軟瓊脂集落形成實驗、四唑藍比色法等一系列體外藥敏試驗檢測技術(shù)，但各自均有一定的局限性。CD-DST相對于其他藥敏試驗，具有細胞用量少、標本培養(yǎng)成功率高、體外檢測結(jié)果與臨床療效間存在較好的相關(guān)性等優(yōu)勢，對傳代胃癌細胞株進行化療藥物敏感性檢測取得了較理想的結(jié)果[4]。本研究中結(jié)果顯示多數(shù)患者只對單一藥物敏感，奧沙利鉑和5-氟尿嘧啶的單藥敏感率在所測藥物中最高，檢測結(jié)果與實際臨床單藥治療有效率基本相符[5]。實驗組1、3年生存率均高于對照組，也高于常規(guī)治療的文獻報道[6]。其中3年生存率2組差異有統(tǒng)計學意義，實驗組患者的遠期生存率要高于對照組，表明隨著隨訪時間的延長，2組間療效的差異更加明顯，提示以CD-DST結(jié)果為依據(jù)選擇的化療方案能明顯延長患者生存時間，改善患者預后。2組均無因不良反應而終止治療者,無治療相關(guān)性死亡，其中不良反應發(fā)生率差異無統(tǒng)計學意義，與相關(guān)文獻報道一致[7]，表明CD-DST檢測結(jié)果與所選化療方案的不良反應發(fā)生率之間無相關(guān)性。

CD-DST是目前最先進的體外藥敏檢測技術(shù)，該技術(shù)利用膠原凝膠在37℃時形成三維立體結(jié)構(gòu)的特點，在體外模仿了體內(nèi)腫瘤細胞生長的微環(huán)境，使腫瘤細胞能夠在與體內(nèi)環(huán)境相似的條件下生長，生長的腫瘤細胞具有與體內(nèi)相似的細胞形態(tài)特點，能夠排除成纖維細胞對實驗的干擾，在體外對抗癌藥物的特異性殺傷作用做出客觀評價[8]。在本研究中，經(jīng)該技術(shù)指導的胃癌化療取得了較為理想的效果,因此該技術(shù)可作為臨床用藥的參考依據(jù)，在胃癌個體化治療中具有一定的指導意義。

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