趙國紅 柳碩巖 楊 永 Ellen He Sven Skog

（1 福建省腫瘤醫(yī)院胸外科，福州 350014；2 Department of Oncology，Karolinska University Hospital，Stockholm）

食管癌是發(fā)生在食管上皮組織的惡性腫瘤，占所有惡性腫瘤的2%，目前其發(fā)病率仍有逐年升高的趨勢(shì)。胸苷激酶（ thymidine kinase，TK）是嘧啶代謝循環(huán)中的關(guān)鍵酶之一，它能夠催化脫氧胸苷轉(zhuǎn)變?yōu)槊撗? 1 - 磷酸胸苷酸，為DNA 的合成提供原料，是衡量細(xì)胞增殖活性的重要指標(biāo)[1]。TK在人類細(xì)胞中以2種同工酶的形式存在，即細(xì)胞質(zhì)TK（TK1）和線粒體TK（TK2） 。研究證明[2-7]，TK1是一種與細(xì)胞周期調(diào)控密切相關(guān)的細(xì)胞增殖標(biāo)志物，對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖速度的檢測(cè)十分有用，適用于對(duì)體格檢查人群惡性腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)及惡性腫瘤患者的療效監(jiān)測(cè)和預(yù)后判斷。TK1作為腫瘤細(xì)胞的血清學(xué)增殖標(biāo)志物，在乳腺癌、肺癌、膀胱癌等惡性腫瘤中已有相關(guān)研究[3,8]。本研究中，我們同時(shí)檢測(cè)食管癌癌患者和正常健康人群血清中的TK1水平，以探討在食管癌的早期診斷、療效評(píng)判、預(yù)后評(píng)估等方面的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源

2007年10月至2009年2月我科行根治性食管鱗癌切除手術(shù)348例 。其中男性243例，女性105例，男女比例為2.3∶1。平均年齡為59±7歲。腫瘤部位: 胸上段51例，胸中段 217例，胸下段 75例，多發(fā)癌5例。按UICC1997年分期標(biāo)準(zhǔn)，腫瘤浸潤深度T1期25例 ，T2期84例，T3期 202例，T4期 37例。組織分化程度，高分化83例，中分化213例，低分化52例。術(shù)后病理均證實(shí)為鱗狀細(xì)胞癌。所有患者以前均未化療過，均有可測(cè)病灶。收集同期福建省腫瘤醫(yī)院健康體檢者41名作為健康對(duì)照組，其中男19名，女22名，年齡介于28～79歲，平均年齡（60±6）歲。

1.2 儀器和試劑

CIS-1型化學(xué)發(fā)光數(shù)字成像分析儀；硝酸纖維素薄膜，anti-TK1 Ab，TK 標(biāo)準(zhǔn)品，ECL 試劑，生物素化二抗，辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素，封閉劑，抗體稀釋液，抗體洗滌液（ 以上組成TK1 診斷試劑盒） 。試劑及儀器均由深圳華瑞同康生物技術(shù)有限公司提供。

1.3 方法

在根治性切除的前提下，結(jié)合術(shù)前胸、上腹部CT及雙頸彩超所提示的病變部位及淋巴結(jié)可疑轉(zhuǎn)移區(qū)域而采用頸、胸、腹三野淋巴結(jié)清掃術(shù)及胸、腹二野淋巴結(jié)清掃術(shù)以及經(jīng)左胸食管癌根治術(shù)。其中上、中段食管癌及多發(fā)癌以及上縱隔及氣管旁有可疑淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者行頸、胸、腹三野淋巴結(jié)清掃術(shù)，中下段食管癌以及上縱隔及氣管旁無可疑淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者選擇性行胸、腹二野淋巴結(jié)清掃術(shù)及經(jīng)左胸食管癌根治術(shù)。有235例行頸、胸、腹三野淋巴結(jié)清掃術(shù)，78例行胸、腹二野淋巴結(jié)清掃術(shù)，35例行經(jīng)左胸食管癌根治術(shù)?？崭钩槿〗】祵?duì)照組體檢者靜脈血2mL，并于術(shù)前、術(shù)后2周和術(shù)后隨訪1～3個(gè)月期間，分別空腹抽取患者靜脈血2mL，在3h內(nèi)，用離心機(jī)離心8～10 min，4000 r/min，分離血清，分裝于2個(gè)離心管內(nèi)，進(jìn)行編號(hào)，放在-20℃冰箱里備測(cè)（一管用于檢測(cè)、另一管用于復(fù)檢），標(biāo)本收集完成后，進(jìn)行血清TK1值測(cè)定。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，利用SPSS13.0 軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)，P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 食管癌不同分期與健康者血清TK1水平的比較

健康對(duì)照組血清TK1值為0.3～1.1 pmol/L，平均（0.5±0.2）pmol/L。與食管癌患者組（3.34±2.11）比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001，表1）。根據(jù)分期，T1–T2兩組患者血清TK1值為。1.70 ～12.03 pmol/L，平均值為（4.27±2.57） pmol/L，T3–T4組患者血清TK1值為1.51～9.71 pmol/L，平均值為（3.72±1.43）pmol/L，兩組比較P＜0.05，差異尚無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 手術(shù)前食管癌患者及健康者血清TK1水平的比較 (pmol/L，±s)

表1 手術(shù)前食管癌患者及健康者血清TK1水平的比較 (pmol/L，±s)

與健康對(duì)照組比較，*P＜0.05

組 別 n 血清TK1值健康對(duì)照組 41 0.50±0.20食管癌患者組 348 3.34±2.11*T1～T2期 109 4.27±2.57 T3～T4期 239 3.72±1.43

2.2 術(shù)后1周患者血清TK1的變化情況

術(shù)后1周，食管癌患者組血清TK1為（1.97～14.51）pmol/L，平均值為 （7.76±3.55） pmol/L，較術(shù)前水平明顯提高（P＜0.05）。

2.3 術(shù)后1～3個(gè)月TK1水平變化情況

完成臨床跟蹤1～3個(gè)月的患者103例，術(shù)前的血清TK1計(jì)數(shù)值為（1.92 ～ 8.37） pmol/L，平均值為（3.21±1.88）pmol/L；術(shù)后1-3個(gè)月血清TK1值為（0.82 ～5.93） pmol/L，平均值為（1.91±1.31）pmol/L，前后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，表2）。其中71例TK1水平在術(shù)后1～3個(gè)月后出現(xiàn)下降12% ～76%。另32例患者TK1水平在術(shù)后出現(xiàn)上升，升幅為115% ～187%。下降組和上升組具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.005，表2）。

表2 食管癌術(shù)后隨訪103例患者血清TK1水平的比較 (pmol/L，±s)

表2 食管癌術(shù)后隨訪103例患者血清TK1水平的比較 (pmol/L，±s)

與手術(shù)前比較，*P＜0.05；與TK1 降低組比較，**P＜0.005

組 別 n 血清TK1值手術(shù)前 103 3.21±1.88隨訪1-3個(gè)月 103 1.91±1.31*TK1降低 71 1.47±0.97 TK1升高 32 3.12±1.43**

2.4 跟蹤12個(gè)月復(fù)發(fā)情況

103例患者中，完成隨訪12個(gè)月病例45例，期間均接受過化療。其中術(shù)后1～3個(gè)月血清TK1下降組有34人，平均值為（1.51±1.05）pmol/L； 術(shù)后1～3個(gè)月血清TK1上升組11人，平均值為（3.13±2.01） pmol/L；兩組差異仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。上升組中有7例（63.64%）復(fù)發(fā)，而下降組中有1例（2.94%）復(fù)發(fā)病例，有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.001）。

3 討 論

TK1的活性與細(xì)胞周期緊密關(guān)聯(lián)，增殖周期中的TKl 含量從G 期、S 期、G2 期不斷增加，G2 期達(dá)到最高，而腫瘤患者處于S 期、G2 期的細(xì)胞比例高。TK1 與DNA 合成呈正相關(guān)，TK1 活力增加會(huì)促進(jìn)細(xì)胞DNA 合成速度提高，使腫瘤細(xì)胞急劇增殖，因此腫瘤惡性程度越高，TK1 的含量也相應(yīng)升高，TK1可作為惡性腫瘤患者的治療效果的監(jiān)控和預(yù)后的評(píng)估，及對(duì)健康人群進(jìn)行早期篩查中的參考指標(biāo)[8,9]。

目前，食管癌常用的診斷方法X線鋇餐造影檢查，電子胃鏡檢查以及CT診斷不能進(jìn)行大規(guī)模篩查。本研究結(jié)果表明，食管癌患者血清TK1表達(dá)水平顯著高于健康人群。目前有許多腫瘤標(biāo)志具有輔助診斷的作用，如AFP 用于肝癌、CA15-3 用于乳腺癌、PSA 用于前列腺癌等，但特異性和靈敏度不是非常理想。TK1 檢測(cè)在腫瘤篩查中特異性很高，Chen等[7]研究表明，87% 的TK1 陽性患者存在惡性腫瘤相關(guān)的疾病，并與疾病的輕重程度有關(guān)。郭林等[10]認(rèn)為血清TK1檢測(cè)在診斷胃癌、判斷預(yù)后和監(jiān)測(cè)療效等方面具有重要意義。本研究結(jié)果認(rèn)為，TK1檢測(cè)在食管癌的早期篩查、輔助診斷中具有較大的應(yīng)用價(jià)值。

本研究觀察到，術(shù)后1周患者血清TK1水平的暫時(shí)升高，與之前報(bào)道結(jié)果一致[12]，這可能與手術(shù)引發(fā)的復(fù)雜因素，如貧血和感染/發(fā)炎等引起的細(xì)胞增殖與壞死，導(dǎo)致大量TK1入血有關(guān)，具原因需要進(jìn)一步研究。術(shù)后一個(gè)月患者血清TK1水平回落，比較術(shù)前有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與之前報(bào)道結(jié)果一致[10,11]，提示TK1可監(jiān)測(cè)手術(shù)療效。我們建議在患者手術(shù)前和手術(shù)后一個(gè)月測(cè)STK1濃度，而不建議在術(shù)后一周內(nèi)進(jìn)行，以避免因非腫瘤性疾病引起的STK1濃度升高而引起的誤導(dǎo)。

本研究在完成12個(gè)月跟蹤的45例中發(fā)現(xiàn)，11例TK1水平在1-3個(gè)月隨訪中上升的病例中，有7例出現(xiàn)復(fù)發(fā)，而下降的34例中僅1例發(fā)生復(fù)發(fā)情況。這與之前的研究結(jié)果相似[13,14]。提示，當(dāng)治療有效時(shí)，在臨床跟蹤的1～3個(gè)月內(nèi)TK1水平會(huì)出現(xiàn)顯著性降低；并可以通過比較期間TK1水平的變化狀況（升高或降低），判斷復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，但需大樣本研究進(jìn)一步證實(shí)。

綜上所述，TK1在食管癌患者血清中呈高表達(dá)。血清TK1 濃度監(jiān)測(cè)對(duì)食管癌的診斷、療效監(jiān)測(cè)和復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估等均有一定意義，值得臨床推廣。

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