李 鑫，周春潔，武軍梅，劉鳳霞（重慶市江津區(qū)中醫(yī)院檢驗(yàn)科 402260）

由于日益增加的標(biāo)本檢測量，科室目前生化分析儀的測試速度難以滿足大批量臨床樣本檢測的需要，本科室引進(jìn)1臺Beckman AU680全自動生化分析儀。該生化分析儀在帶來快速、高效的同時(shí)，儀器的測定誤差難免，對儀器性能評價(jià)是必要的，以保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確、可靠［1］。本文遵照美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（CLSI）部分文件的要求，對Beckman AU680生化分析儀及其原裝試劑、校準(zhǔn)品組成封閉檢測系統(tǒng)的堿性磷酸酶（ALP）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST，采用速率法）、血清總膽紅素（TBil，采用終點(diǎn)法）、非原裝試劑血肌酐（Cr，采用兩點(diǎn)終點(diǎn)法）共4個檢測項(xiàng)目的精密度、準(zhǔn)確度、線性及攜帶污染進(jìn)行評價(jià)，并對鉀（K＋）、鈉（Na＋）、氯（Cl－）離子選擇電極法與Olympus AU2700進(jìn)行對比分析，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 Beckman AU680生化分析儀、Olympus AU2700生化分析儀。

1.1.2 試劑、標(biāo)準(zhǔn)品及質(zhì)控品 ALP、AST、TBil的試劑均由Beckman公司提供：ALP批號為1906，AST批號為1565，TBil批號為1566。Beckman公司提供的校準(zhǔn)品，批號為66300，能溯源到Beckman Coulter Master Calibrator；兩個水平質(zhì)控血清批號分別為0029 H和0030F。Cr的試劑由利德曼公司提供，批號為111183K。其校準(zhǔn)品由上海長征公司提供，批號為663 UN，能溯源到NIST SRM 909B；質(zhì)控血清批號為678UN－2。電解質(zhì)試劑全為配套試劑，其能溯源到 NIST SRM 2201／2202。

1.1.3 精密度分析穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)樣品 采用本院患者新鮮血清，混合后分裝冷凍保存。

1.2 方法

1.2.1 分析方法 ALP、AST、TBil、Cr檢測方法及參數(shù)見各自批號的相應(yīng)試劑說明書，K＋、Na＋、Cl－采用離子選擇電極法。評價(jià)前分析者已經(jīng)熟悉分析方法、儀器使用和評價(jià)方案，對儀器進(jìn)行常規(guī)維護(hù)以保證儀器處于良好狀態(tài)。使用相應(yīng)校準(zhǔn)品對各檢測項(xiàng)目進(jìn)行校準(zhǔn)，每天進(jìn)行試劑空白測定和電解質(zhì)校準(zhǔn)，并按經(jīng)典的Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法進(jìn)行Beckman兩水平質(zhì)控品及長征質(zhì)控品分析，質(zhì)控在控才進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 精密度實(shí)驗(yàn) 精密度依照 CLSI的 EP5－A2［2］文件要求，收集本院患者新鮮血清混合，因?yàn)榛旌蠘颖痉€(wěn)定較困難，所以精密度實(shí)驗(yàn)采用5個工作日完成。每天做兩批實(shí)驗(yàn)（上午一批，下午一批，時(shí)間間隔大于2 h），每個批次測8個樣本。每樣本做雙份重復(fù)測試，隨機(jī)插入常規(guī)標(biāo)本中。獲取80個數(shù)據(jù)。從所有80個結(jié)果計(jì)算出總精密度。以批內(nèi)精密度的CV或SD＜1／4CLIA′88，總精密度的CV 或SD＜1／3CLIA′88為可接受的精密度最低水平［3］。

1.2.3 準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn) 準(zhǔn)確度分兩個方案：（1）ALP、AST、TBil、Cr測定采用測定相應(yīng)配套質(zhì)控品，與質(zhì)控品結(jié)果進(jìn)行對照。每個水平進(jìn)行5次（或天）測定，計(jì)算其平均值是否在質(zhì)控范圍內(nèi)。（2）K＋、Na＋、Cl－測定采用《患者樣本方法比較和偏倚估計(jì)》。依照CLSI的EP9－A2［4］文件的要求，由于Olympus AU2700生化分析儀性能和準(zhǔn)確度已證實(shí)，且長期參加室間質(zhì)評結(jié)果優(yōu)秀，以其測定結(jié)果為X值，新購置Beckman 680生化分析儀測定結(jié)果為Y，進(jìn)行線性回歸統(tǒng)計(jì)＾Y＝b X＋a，b和a分別表示兩種儀器間的比例誤差和恒定誤差。r表示兩儀器的相關(guān)系數(shù)，當(dāng)r≥0.975或r2≥0.95，認(rèn)為X范圍是合適的。以CLIA′88規(guī)定的室間質(zhì)量評價(jià)允許誤差范圍的1／2為標(biāo)準(zhǔn)［5］，在不同醫(yī)學(xué)決定水平分別判斷儀器的偏倚臨床是否可以接受性。

1.2.4 線性實(shí)驗(yàn) 線性實(shí)驗(yàn)依照CLSI的EP6－A［6］文件的要求，按不同項(xiàng)目收集近20 d來患者血清最高值（H）和正常值或低值（L），但高值樣本較少。對收集的高值樣本和低值樣本，采用不同比例進(jìn)行混合，形成9管系列樣品，分別用AU680生化分析儀進(jìn)行檢測，每樣品測兩次取均值作為實(shí)測值X，以Y表示各樣品的預(yù)期值，進(jìn)行回歸分析，得到Y(jié)＝b X＋a，若b在0.95范圍內(nèi)，a近于0（統(tǒng)計(jì)學(xué)上無差異），則可判斷線性范圍驗(yàn)證成功［7］。

1.2.5 攜帶污染率 在Beckman AU680生化分析儀上，選取高濃度定值血清樣本連續(xù)測定3次，測定值分別為H1、H2、H3；再取低濃度定值血清樣本連續(xù)測定3次，測定值分別為L1、L2、L3。按公式計(jì)算攜帶污染率［8］。攜帶污染率＝（L1－L3）／（H3－L3）×100%。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用Excel 2007軟件，對原始數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理及相關(guān)線性分析。

2 結(jié) 果

2.1 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果 ALP、AST、TBil、Cr、K＋、Na＋、Cl－的批內(nèi)精密度的CV或SD均小于1／4CLIA′88，總精密度的CV或SD均小于1／3CLIA′88，在質(zhì)量目標(biāo)的可接受范圍內(nèi)，見表1。

2.2 準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)結(jié)果 （1）ALP、AST、TB、CR 4個項(xiàng)目的質(zhì)控品測試均在質(zhì)控范圍內(nèi)，Beckman AU680生化分析儀各檢測項(xiàng)目不同醫(yī)學(xué)決定水平上的相對偏倚除AST外均小于或等于1／2CLIA′88，達(dá)到了本研究預(yù)期的質(zhì)量目標(biāo)（表2），但AST在控結(jié)果尚可，在日后的工作中注意查找原因。（2）K＋、Na＋、Cl－：Cl－在Beckman AU680生化分析儀檢測結(jié)果均與Olympus AU2700生化分析儀檢測結(jié)果呈明顯相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r≥0.95，表明X范圍是較合適的，其分布范圍較寬，結(jié)果在接受標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)，則說不同檢測系統(tǒng)間檢測結(jié)果可比；但Na＋的結(jié)果相關(guān)系數(shù)r＜0.95，則說明不同檢測系統(tǒng)間檢測結(jié)果相關(guān)性差，無法保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，可以通過相關(guān)回歸來擬合兩者的線性方程，見表3。

表1 ALP等項(xiàng)目的精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2 ALP等項(xiàng)目的準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3 線性實(shí)驗(yàn)結(jié)果 高低值樣本收集后，混合方案見表4。Beckman AU680生化分析儀ALP、AST、TBil、Cr的線性實(shí)驗(yàn)中，r2＞0.95、0.95＜b＜1.05均在可接受范圍內(nèi)，各檢測項(xiàng)目在該實(shí)驗(yàn)涉及濃度范圍內(nèi)呈線形，見表5。

2.4 攜帶污染率 ALP、AST、TB、CR 4項(xiàng)目的攜帶污染率較小，均小于2%，相比較而言，Cr的攜帶污染最大，為1.65%，見表6。

表3 K＋等項(xiàng)目的相關(guān)性及線性回歸結(jié)果

表4 ALP等項(xiàng)目的線性實(shí)驗(yàn)高低值混合方案

表5 ALP等項(xiàng)目的線性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表6 ALP等項(xiàng)目的攜帶污染實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 討 論

醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室－質(zhì)量和能力的專用要求ISO15189［9］設(shè)備（在安裝時(shí)及常規(guī)使用中）應(yīng)顯示出能夠達(dá)到規(guī)定的性能標(biāo)準(zhǔn)，并且符合相關(guān)檢驗(yàn)所要求的規(guī)格。CLIA強(qiáng)調(diào)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)部門必須對于檢測系統(tǒng)的性能參數(shù)進(jìn)行驗(yàn)證，至少包括精密度、準(zhǔn)確度、可報(bào)告范圍和臨床參考區(qū)間。

本文依照CLSI的EP5－A2、EP9－A2和EP6－A 文件的要求，以不同方法、不同波長、不同檢測單元、試劑配套與否等原則，本科室選取了 ALP、AST、TBil、Cr、K＋、Na＋、Cl－共7個檢測項(xiàng)目的精密度、準(zhǔn)確度、線性對Beckman AU680檢測系統(tǒng)進(jìn)行評價(jià)。儀器試劑生產(chǎn)廠商常采用不同濃度范圍的新鮮患者血清與參考實(shí)驗(yàn)室的參考方法進(jìn)行比對來實(shí)現(xiàn)其檢測系統(tǒng)結(jié)果的溯源性［10］。為了將其檢測結(jié)果的溯源性繼續(xù)向用戶傳遞，廠商提供了針對該檢測系統(tǒng)配套的校準(zhǔn)品，并對校準(zhǔn)品進(jìn)行了極其嚴(yán)密的定值。因而準(zhǔn)確度確認(rèn)較為簡便的方法可使用不同批號的校準(zhǔn)品或直接使用“正確度驗(yàn)證品”進(jìn)行準(zhǔn)確度驗(yàn)證。但遺憾的是試劑廠商只有在上一個批號的校準(zhǔn)品即將過期時(shí)才會有新批號的校準(zhǔn)品上市，因而實(shí)際工作中很難做到用一個批號的校準(zhǔn)品校準(zhǔn)而用另一個批號的校準(zhǔn)品進(jìn)行準(zhǔn)確度評價(jià)；同時(shí)基質(zhì)效應(yīng)極小的“正確度驗(yàn)證品”由于項(xiàng)目局限和昂貴的價(jià)格并未在國內(nèi)廣泛使用。本實(shí)驗(yàn)室ALP、AST、TBil、Cr 4項(xiàng)目測定質(zhì)控品，可完成相應(yīng)項(xiàng)目的準(zhǔn)確度測定，還能檢測本科室的室內(nèi)質(zhì)量控制。根據(jù)CLSI的EP9－A2文件的要求，將Beckman AU680的ISE 3個檢測項(xiàng)目分別與分析性能和準(zhǔn)確度已在本實(shí)驗(yàn)室得到確證的Olympus AU2700檢測系統(tǒng)進(jìn)行比對，同時(shí)完成了準(zhǔn)確度評價(jià)和同一檢測項(xiàng)目在不同設(shè)備間的比對工作。線性實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵為在日常工作中留取高值和低值的標(biāo)本。在評價(jià)實(shí)驗(yàn)中如果b＜0.95或b＞1.05，有可能b與1之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，為做出正確判斷，可對所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果作分析：試著舍去某組數(shù)據(jù)，另進(jìn)行回歸統(tǒng)計(jì)。若縮小分析范圍后，回歸方程明顯改善，b近于1，a趨于0（差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義），則縮小的分析范圍是真實(shí)的線性范圍。由于K＋、Na＋、Cl－生理波動范圍明顯窄于電解質(zhì)線性寬度，加之高低值標(biāo)本不易收集，本研究對K＋、Na＋、Cl－線性范圍未行評價(jià)。而ALP、AST、TBil在評價(jià)實(shí)驗(yàn)中線性未超出廠商的聲明，或在試劑廠商表示的線性上下限的10%以內(nèi)，但實(shí)際工作中仍以廠商聲明的線性為準(zhǔn)，因?yàn)樵趯?shí)際工作中很少遇到超出所做的線性，若對于超過廠商聲明的線性樣品，本實(shí)驗(yàn)室仍建議稀釋后重測。

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Beckman AU680生化分析儀達(dá)到本實(shí)驗(yàn)室性能要求，能夠在本實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)確快速的應(yīng)用。對于大型生化分析儀，特別是多模塊多檢測系統(tǒng)的組合式高速生化分析儀，在不同的運(yùn)行環(huán)境、操作情況下性能指標(biāo)可能會存在一定的差異，必須在使用前進(jìn)行常規(guī)性能評價(jià)或驗(yàn)證，在確保在同一儀器內(nèi)多個檢測系統(tǒng)結(jié)果一致性的前提下，才能進(jìn)一步保證同一實(shí)驗(yàn)室中不同儀器結(jié)果的一致性，為實(shí)驗(yàn)室全面質(zhì)量保證奠定基礎(chǔ)。

［1］夏勇，李衛(wèi)寧.Olympus AU5400生化分析儀性能的評價(jià)［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2009，6（18）：1539－1542.

［2］Clinical and laboratory standards Institue.Evaluation precision performance of quantitative measurement methods；approved guideline－seconded ition.document EP5－A2［S］.Wayne，PA：CLSI，2004.

［3］莊俊華，黃憲章，翟培軍.醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量體系文件編寫指南［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：193.

［4］Clinical and laboratory standards Institue.Method Comparison and biasa estimation using patient samples；tentative guideline－second edition.document EP9－A2［S］.Wayne，PA：CLSI，2002.

［5］張秀明，莊俊華，徐寧，等.不同檢測系統(tǒng)血清酶測定結(jié)果的偏倚評估與可比性研究［J］.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2006，29（16）：346－349.

［6］Clinical and laboratory standards Institue.Evaluation of the linearity of quantitative analytical methods，proposed：astatistical approach；Approved Guideline.document EP6－A［S］.Wayne，PA：CLSI，2003.

［7］馮仁豐.臨床檢驗(yàn)質(zhì)量管理技術(shù)基礎(chǔ)［M］.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，2003：66－68.

［8］顧柄權(quán)，劉樹林.美國 MD－100自動生化分析儀性能評價(jià)［J］.陜西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)，2000，15（3）：37.

［9］CNAS－CL02.ISO15189：醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008.

［10］劉小娟，黃亨建.羅氏生化試劑用于奧林巴斯全自動生化分析儀的溯源性分析［J］.華西醫(yī)學(xué)，2004，19（3）：401－402.