何鳳云,吳立劍,楊麗君,邵秀丹,劉歡

（南京曉莊學(xué)院生物化工與環(huán)境工程學(xué)院，南京 211171）

鉛筆芯微電極的制備及其在電化學(xué)法測定抗壞血酸中的應(yīng)用*

何鳳云,吳立劍,楊麗君,邵秀丹,劉歡

（南京曉莊學(xué)院生物化工與環(huán)境工程學(xué)院，南京 211171）

研究了一種用鉛筆芯制作的微電極的電化學(xué)行為，并利用這種電極進(jìn)行抗壞血酸含量的測定。結(jié)果表明：在 5.0×10-5～1.0×10-2mol/L 的濃度范圍內(nèi)，抗壞血酸的氧化峰電流與其濃度呈線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù) r2=0.999 3，檢出限為2.5×10-5mol/L（S/N=3）。對2.5×10-3mol/L 抗壞血酸溶液平行測定6次，測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.7%。該電極用于維生素C片中抗壞血酸含量的測定，加標(biāo)回收率為94.8%～99.8%。

鉛筆芯微電極；抗壞血酸；循環(huán)伏安法

維生素C又叫抗壞血酸（AA），廣泛存在于食品、藥物及人體中，是參與人體生理代謝不可或缺的一種有機(jī)化合物，在細(xì)胞的電子傳遞過程中起著重要作用。目前，檢測AA的主要方法有光度分析法［1］、熒光分析法［2］、化學(xué)發(fā)光法［3］、電化學(xué)分析法［4，5］及高效液相色譜法［6，7］等，這些方法有的需要較昂貴的設(shè)備［6，7］，有的操作較繁瑣［1，3］。電化學(xué)分析法以儀器簡單、選擇性強(qiáng)、線性范圍廣、檢出限低等特點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用，但目前多采用大電極。有研究表明［8］，在電化學(xué)分析中，有效導(dǎo)電面積十分微小的微電極可以降低AA的過電位，提高測定的靈敏度，增加電極的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。各種未摻雜或摻雜修飾的微電極的研究很多［8-11］，但鉛筆芯電極對于抗壞血酸的測定尚未見報(bào)道。筆者發(fā)現(xiàn)，利用鉛筆芯制作的微電極可以有效降低AA的過電位，將其用于AA含量的測定，方法簡單，成本低，測量結(jié)果準(zhǔn)確。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

電化學(xué)工作站：CHI660C型，上海辰華儀器公司；

電子分析天平：AUY120型，日本島津公司；

抗壞血酸：AR，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；

維生素C片劑：100mg/片，湖北華中藥業(yè)有限公司；

六氰合鐵酸鉀：AR，廣東光華化學(xué)廠有限公司；

抗壞血酸待測溶液：均由1 mol/L KCl新配；

實(shí)驗(yàn)用水為二次去離子水。

1.2 鉛筆芯微電極的制備

切取適當(dāng)長度的毛細(xì)管（管內(nèi)徑約0.5 mm）作為微電極的絕緣殼，依次在 12，6.5，2.6 μm 的砂紙上打磨平滑，取約4 cm長的銅絲從尖端插入毛細(xì)管作為導(dǎo)線，用粘合劑將鉛筆芯和銅絲固定在毛細(xì)管內(nèi)，待鉛筆芯和銅絲固定后，在稱量紙上打磨平滑，鉛筆芯電極即制備完成。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

最初制備的電極不宜直接用于測定，需放入1 mol/L的KCl溶液中以自制的微電極為工作電極，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為輔助電極在 - 0.2～0.8 V 以 100mV/s的掃速下進(jìn)行多次循環(huán)伏安掃描，直到獲得穩(wěn)定的循環(huán)伏安圖為止。

實(shí)驗(yàn)考察了不同種鉛筆芯制備的微電極的電化學(xué)行為，通過循環(huán)伏安法測定了微電極在1 mmol/L K3Fe(CN)6（以1 mol/L的KCl為支持電解質(zhì)）溶液中的ΔEp，通過比較不同電極傳遞電子能力的差異，最終選擇合適的工作電極。

利用循環(huán)伏安法考察了掃描速度、富集電位和富集時(shí)間對實(shí)驗(yàn)的影響。每次測定后，將微電極置于空白支持電解質(zhì)中，在 - 0.2～0.8 V 電位區(qū)間以100mV/s循環(huán)掃描8次即可除去吸附在微電極表面的殘留物，保持電極的重現(xiàn)性，實(shí)現(xiàn)連續(xù)測定(實(shí)驗(yàn)均需在室溫下進(jìn)行)。

2 結(jié)果與討論

2.1 不同電極對電子傳遞的差異

對用不同鉛筆芯材料制備的微電極進(jìn)行試驗(yàn)，分別將制備好的鉛筆芯微電極和玻碳電極放到1 mmol/L K3Fe(CN)6（以 1 mol/L 的 KCl為 支 持電解質(zhì)溶液）溶液中掃描，觀察循環(huán)伏安圖，比較不同電極的電位差，結(jié)果見表1。

表1 鐵氰化鉀探針在玻碳電極和不同鉛筆芯微電極的峰電位差

由表1可知，用2B鉛筆芯制作的微電極平均電位差接近于玻碳電極，因此可以用2B鉛筆芯制作的微電極來研究AA的電化學(xué)行為。

2.2 掃描速度對峰電流的影響

使用2B鉛筆芯微電極在50～400mV/s掃描速度范圍內(nèi)對 2.5×10-3mol/L 的 AA 在 1 mol/L的KCl溶液中進(jìn)行循環(huán)伏安掃描，得到不同掃描速度下的循環(huán)伏安圖,圖1為氧化峰電流與掃描速度的關(guān)系。

由圖1可見，氧化峰電流Ip與掃描速度呈良好的線性關(guān)系（Ip=5.938 8v+1.602 9，r2=0.9908），表明AA在2B鉛筆芯微電極上的電極反應(yīng)過程受吸附控制。當(dāng)掃描速度為100mV/s時(shí)，信噪比最好，故實(shí)驗(yàn)選擇掃描速度為100mV/s。

圖1 氧化峰電流與掃描速度的關(guān)系

2.3 富集電位和富集時(shí)間的影響

實(shí)驗(yàn)證明，富集電位對AA在微電極上的電化學(xué)氧化過程幾乎不影響。在開路條件下，當(dāng)AA的濃度為 2.5×10-3mol/L 時(shí)，富集時(shí)間在 10～80s范圍內(nèi)，氧化峰電流隨著富集時(shí)間的延長而逐漸增大；當(dāng)富集時(shí)間大于80s后，峰電流變化趨于平穩(wěn)，因此實(shí)驗(yàn)設(shè)定80s為最佳富集時(shí)間。

2.4 線性方程和檢出限

配制濃度為 0，2.5×10-2，5.0×10-2，7.5×10-2，0.1，0.2，0.5，0.75，1.0，5.0，7.5，10mmol/L 系列抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，按實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行測定。在上述優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件下，AA 的濃度在 5.0×10-2～10mmol/L范圍內(nèi)與氧化峰電流（μA）呈良好的線性關(guān)系，線性回歸方程為 I=0.833 9c+0.049 5，r2=0.999 3，以 3 倍信噪比計(jì)算檢出限為 2.5×10-5mol/L。

2.5 精密度試驗(yàn)

對2.5 mmol/L的AA標(biāo)準(zhǔn)工作溶液平行測定6次，氧化峰電流測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.7%，說明電極具有良好的重現(xiàn)性，試驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.6 樣品測定及加標(biāo)回收試驗(yàn)

取5片維福佳維生素C含片（標(biāo)含維生素C：100mg/片），研碎，稱取少量，用1 mol/L KCl溶解，定量稀釋，按測定方法測得維生素C含量的平均值為96.63 mg/片。然后用標(biāo)準(zhǔn)加入法進(jìn)行回收試驗(yàn)，結(jié)果見表3。

表3 回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝3）

由表 3可知，回收率為 94.8%～99.8%，平均回收率為96.63%，表明方法的準(zhǔn)確度較高。該方法與熒光法［2］和高效液相色譜法相比［7］相比，回收率略低。2005版藥典規(guī)定維生素C藥片的含量為標(biāo)示量的90%～110%，因此該方法回收率符合藥片維生素C檢驗(yàn)的要求。

3 結(jié)語

利用自制的鉛筆芯電極通過循環(huán)伏安法檢測維生素藥片溶液中抗壞血酸的含量，測定結(jié)果精密度與準(zhǔn)確度高，該法可用于維生素藥片中抗壞血酸含量的測定。

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Prearation of Pencil Lead M icroelectrode and its Applycation in the Determ ination of Ascorbic Acid by Electrochem ical M ethod

He Fengyun，Wu Lijian，Yang Lijun，Shao Xiudan，Liu Huan
（School of Biochem ical and Environmental Engineering, Nanjing Xiaozhuang University，Nanjing 211171，China）

Pencil lead microelectrode was prepared and then it was applied to the determination of ascorbic acid （AA）.The results show ed that ascorbic acid concentration w as linear w ith oxidation peak current in the range of 5.0×10-5-1.0×10-2mol/L under the optimum condition, r2=0.999 3. The detection limit was 2.5×10-5mol/L（S/N=3).The relative standard deviation was 4.7% for six times parallel determ ination of 2.5×10-3mol/L ascorbic acid. The pencil lead microelectrode can be applied to the analysis of ascorbic acid w ith recovery of 94.8%-99.8%.

pencil m icroelectrode; ascorbic acid; cyclic voltammetry

O657.15

A

1008-6145(2012)01-0014-03

10.3969/j.issn.1008-6145.2012.01.004

*江蘇省大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目（2160081）；南京曉莊學(xué)院科研項(xiàng)目（2010KYYB19）

聯(lián)系人：何鳳云；E-mail:hefengyun1976@163.com

2011-10-23