韓建榮，王琪，李斌斌，王琳琳

（山西大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，山西 太原 030006）

蘆筍老莖培養(yǎng)料對(duì)姬松茸產(chǎn)量、多糖含量和抗氧化性的影響

韓建榮，王琪，李斌斌，王琳琳

（山西大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，山西 太原 030006）

設(shè)計(jì)了以蘆筍老莖為主料，棉籽殼、玉米芯、干牛糞和雜木屑為輔料的4種培養(yǎng)料栽培姬松茸，玉米秸稈培養(yǎng)料作為對(duì)照.結(jié)果表明姬松茸在蘆筍老莖和玉米秸稈培養(yǎng)料上的產(chǎn)量沒有明顯差異（P＜0.05）;添加棉籽殼或干牛糞的蘆筍老莖培養(yǎng)料其姬松茸產(chǎn)量明顯高于添加雜木屑或玉米芯的蘆筍老莖培養(yǎng)料（P＜0.05）.蘆筍老莖培養(yǎng)料上栽培得到的姬松茸子實(shí)體的抗氧化性明顯高于對(duì)照培養(yǎng)料上栽培得到的子實(shí)體的抗氧化性（P＜0.05），但多糖含量卻明顯低于對(duì)照（P＜0.05）;4種輔料對(duì)姬松茸子實(shí)體的多糖含量和抗氧化性有一定的影響.

蘆筍老莖;姬松茸;產(chǎn)量;多糖含量;抗氧化性

姬松茸（AgaricusblazeiMurill.）又名巴西蘑菇，屬傘菌目蘑菇科蘑菇屬，原產(chǎn)于美國佛羅里達(dá)州海邊草地、加利福尼亞州南部和巴西、秘魯?shù)葒?］.姬松茸是一種藥食兼用的珍稀食用菌，其調(diào)節(jié)免疫力、抗腫瘤等藥用功效來源于其含有的多種生理活性物質(zhì)，如多糖、糖蛋白、核酸、甾醇類物質(zhì)等.近年來關(guān)于姬松茸的研究主要集中在其多糖含量、結(jié)構(gòu)和抗氧化性方面［2］.

姬松茸在日本、韓國、巴西等國已有一定規(guī)模的栽培，我國自1990年以來也陸續(xù)開始了姬松茸的栽培.姬松茸的栽培方法和技術(shù)與雙孢蘑菇的栽培方法和技術(shù)基本相同［3］，所用原料主要是甘蔗渣、稻草、玉米秸稈、牛糞等，還未見利用蘆筍老莖栽培姬松茸的研究報(bào)道.山西是世界最大的蘆筍產(chǎn)區(qū)［4］，每年過了收獲季節(jié)后有總量近百萬噸的蘆筍老莖產(chǎn)生，無法利用，任其自然腐敗，或直接焚燒，造成了資源的極大浪費(fèi).因此，如何合理利用這些蘆筍老莖資源是一亟待解決的問題.本實(shí)驗(yàn)主要分析研究了蘆筍老莖培養(yǎng)料對(duì)姬松茸產(chǎn)量、多糖含量和抗氧化性的影響，旨在為利用蘆筍老莖栽培姬松茸、為姬松茸多糖和抗氧化劑產(chǎn)品的開發(fā)提供理論依據(jù)，促進(jìn)姬松茸栽培在山西的發(fā)展.

1 材料與方法

1.1 菌株

姬松茸SH26菌株從上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所引進(jìn)，保存在馬鈴薯葡萄糖瓊脂斜面上.

1.2 培養(yǎng)料

采用以下5種配方的培養(yǎng)料（質(zhì)量分?jǐn)?shù)%）：

配方1：蘆筍老莖70%，棉籽殼20%，豆餅7.5%，過磷酸鈣1%，石膏粉1%，尿素0.5%;

配方2：蘆筍老莖70%，干牛糞20%，豆餅7.5%，過磷酸鈣1%，石膏粉1%，尿素0.5%;

配方3：蘆筍老莖70%，雜木屑20%，豆餅7.5%，過磷酸鈣1%，石膏粉1%，尿素0.5%;

配方4：蘆筍老莖70%，玉米芯20%，豆餅7.5%，過磷酸鈣1%，石膏粉1%，尿素0.5%;

配方5（對(duì)照）：玉米秸稈70%，棉籽殼20%，豆餅7.5%，過磷酸鈣1%，石膏粉1%，尿素0.5%.

配方中的蘆筍老莖先切成20 cm左右的小段.按照二次發(fā)酵法處理培養(yǎng)料，前發(fā)酵18 d，共翻堆4次，移入室內(nèi)進(jìn)行后發(fā)酵，60℃保持10 h，50℃保持4 d.后發(fā)酵結(jié)束后，調(diào)整培養(yǎng)料的含水量到65%，p H為7.0－7.5.

1.3 栽培方法

培養(yǎng)料上床后，播麥粒栽培種2瓶／m2，每種培養(yǎng)料每小區(qū)栽培面積5 m2，設(shè)3次重復(fù).覆土及出菇管理按常規(guī)進(jìn)行.姬松茸采第一批菇后再持續(xù)采收120 d，產(chǎn)量以120 d采菇量計(jì)算，并統(tǒng)計(jì)單菇重和子實(shí)體數(shù)量，按文獻(xiàn)［5］對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析和Duncan多重比較.

1.4 樣品處理

在配方1－5培養(yǎng)料上栽培得到的姬松茸子實(shí)體編號(hào)為樣品1－5.將姬松茸子實(shí)體樣品60℃烘干至恒質(zhì)量，然后粉碎過0.250 mm篩，得到姬松茸子實(shí)體干粉，放于密封瓶中保存?zhèn)溆?

1.5 多糖含量的測定

用苯酚－硫酸法測定姬松茸總糖含量，DNS比色法［6］測定姬松茸還原糖含量.多糖含量＝總糖含量－還原糖含量

1.6 抗氧化性物質(zhì)的提取

準(zhǔn)確稱取5 g姬松茸子實(shí)體干粉，分別加入100 m L 80% 的乙醇，在室溫（25℃左右）130 r／min的搖床上提取24 h，用濾紙過濾，取濾液，濾渣再進(jìn)行復(fù)提，然后合并2次濾液;濾渣烘干后稱其質(zhì)量，濾液在40℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，得濃縮液，然后稀釋定容待測.

1.7 抗氧化性測定

1.7.1 DPPH自由基的清除測定

按文獻(xiàn)［7］進(jìn)行測定：200μL樣品液中加入3.8 m L DPPH（0.08 mmol／L），充分搖勻后在室溫下避光放置24 h，在517 nm處測吸光值.用提取溶劑代替樣品液作為對(duì)照.根據(jù)吸光度和樣品液濃度圖來計(jì)算EC50值.

1.7.2 還原能力測定

還原能力采用普魯士藍(lán)法測定［8－9］，根據(jù)吸光度和樣品液濃度圖來計(jì)算EC50值.

1.7.3 脂質(zhì)過氧化（LPO）抑制分析

采用β－胡蘿卜素－亞油酸體系進(jìn)行分析［8］，根據(jù)吸光度和樣品液濃度圖來計(jì)算EC50值.

1.7.4 亞鐵離子螯合能力測定

根據(jù)文獻(xiàn)［10］進(jìn)行，1.6 m L 樣品液溶于1.6 m L蒸餾水，然后與0.4 m L FeCl2（0.5 mmol／L）混合搖勻，然后加入0.4 m L的菲洛嗪（1 mmol／L），劇烈搖動(dòng)1 min后，在室溫下放20 min，然后562 nm測定吸光度.以80%乙醇代替樣品作為空白，EDTA（0.5 mmol／L）作為陽性對(duì)照.根據(jù)吸光度和樣品液濃度圖來計(jì)算EC50值.

2 結(jié)果與分析

2.1 蘆筍老莖培養(yǎng)料對(duì)姬松茸產(chǎn)量的影響

姬松茸在5種培養(yǎng)料上的產(chǎn)量、單菇重和子實(shí)體數(shù)量見表1（P407）.從表1可以看出：在輔料同為棉籽殼的情況下，姬松茸在蘆筍老莖（配方1）和玉米秸稈（配方5）培養(yǎng)料上的產(chǎn)量沒有明顯差別;在主料同為蘆筍老莖的情況下，添加棉籽殼（配方1）和干牛糞（配方2）的培養(yǎng)料其姬松茸產(chǎn)量明顯高于添加雜木屑（配方3）和玉米芯（配方4）的培養(yǎng)料.方差分析（表2）也表明5種培養(yǎng)料配方間在姬松茸產(chǎn)量上存在極顯著差異（P＜0.01）.

對(duì)于任何一種蘑菇來講，子實(shí)體平均重量（即單菇重）和子實(shí)體發(fā)生的數(shù)量都是影響產(chǎn)量的重要栽培性狀.從表1可以看出：在5種培養(yǎng)料上栽培得到的姬松茸單菇重沒有明顯差別，但子實(shí)體數(shù)量卻有明顯的差別，方差分析（表2）也表明5種培養(yǎng)料配方間在姬松茸子實(shí)體數(shù)量上存在極顯著差異（P＜0.01）.通過相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)姬松茸產(chǎn)量與子實(shí)體數(shù)量之間具有極顯著的正相關(guān)（r＝0.995 4），這說明不同配方的培養(yǎng)料主要是通過影響子實(shí)體發(fā)生的數(shù)量來影響姬松茸產(chǎn)量的.

以上結(jié)果說明由蘆筍老莖和棉籽殼、干牛糞組成的培養(yǎng)料配方1和2適合于姬松茸的栽培，能取得較高的產(chǎn)量.

表1 姬松茸產(chǎn)量、單菇重、子實(shí)體數(shù)量的比較Table 1 Yield，size and quantity of the harvested mushroom Agaricusblazei

表2 姬松茸產(chǎn)量、子實(shí)體數(shù)量的方差分析Table 2 ANOVA for the yield，size and quantity of the harvested mushroom Agaricusblazei

2.2 蘆筍老莖培養(yǎng)料對(duì)姬松茸子實(shí)體多糖含量的影響

從圖1可以看出，栽培原料對(duì)姬松茸的多糖含量有一定的影響.在輔料同為棉籽殼的情況下，兩種栽培主料相比較，用玉米秸稈主料（樣品5）栽培得到的姬松茸子實(shí)體的多糖含量明顯高于用蘆筍老莖主料（樣品1）栽培得到的姬松茸子實(shí)體的多糖含量.在主料同為蘆筍老莖的情況下，添加的4種輔料對(duì)栽培得到姬松茸子實(shí)體的多糖含量影響不大，棉籽殼和玉米芯的稍高于其他2種輔料.說明棉籽殼和玉米芯為輔料較有利于姬松茸子實(shí)體多糖的合成.

2.3 蘆筍老莖培養(yǎng)料對(duì)姬松茸子實(shí)體抗氧化性的影響

表3列出了姬松茸子實(shí)體乙醇提取物抗氧化性各個(gè)指標(biāo)的EC50值.EC50值越小表明抗氧化能力越強(qiáng).

2.3.1 DPPH 清除測定結(jié)果

DPPH是一種穩(wěn)定的以氮為中心的質(zhì)子自由基，其乙醇溶液呈紫色，在517 nm處有強(qiáng)烈吸收.在有自由基清除劑存在時(shí)，自由基清除劑提供一個(gè)電子與DPPH的孤對(duì)電子配對(duì)，使其褪色，在517 nm處的吸光度變小，即自由基清除劑的清除能力越強(qiáng)，吸光度越小.由表3可見，5個(gè)不同配方培養(yǎng)料上得到的姬松茸子實(shí)體樣品的乙醇提取物對(duì)DPPH都具有一定的清除能力，其能力強(qiáng)弱順序?yàn)椋簶悠?＞樣品2＞樣品4＞樣品3＞樣品5.用蘆筍老莖為主料栽培得到的姬松茸子實(shí)體（樣品1-4）的DPPH清除能力明顯高于用玉米秸稈為主料栽培得到的姬松茸子實(shí)體（樣品5）的DPPH清除能力.在主料同為蘆筍老莖的情況下，輔料棉籽殼和干牛糞更有利于提高子實(shí)體的DPPH清除能力.2.3.2 還原能力測定結(jié)果

S還原劑的存在會(huì)引起Fe3＋和鐵氰化物復(fù)合物轉(zhuǎn)化為亞鐵形式的化合物，從而使黃色的溶液變成各種不同程度的綠色和藍(lán)色溶液.通過在700 nm測定普魯士藍(lán)的吸光度可以測定亞鐵離子的濃度.在表3中，樣品1的還原力要明顯強(qiáng)于樣品5，說明栽培主料蘆筍老莖比玉米秸稈更有利于姬松茸子實(shí)體還原能力的提高.樣品1-4之間的還原力差異不顯著，說明所選擇的4種栽培輔料對(duì)姬松茸子實(shí)體還原力的影響較小.

圖1 姬松茸子實(shí)體的多糖含量Fig.1 Polysaccharide content of harvested fruit bodies of Agaricusblazei

表3 姬松茸子實(shí)體乙醇提取物抗氧化性EC50值比較Table 3 EC50 values of ethanolic extracts from Agaricusblazei in antioxidant properties

2.3.3 LPO抑制分析結(jié)果

依靠β－胡蘿卜素－亞油酸鹽體系的漂白作用可以測定該蘑菇提取物的抗氧化能力.不同抗氧化劑的存在可以中和系統(tǒng)中形成的亞油酸自由基和其他自由基，以阻礙β－胡蘿卜素的褪色，使顏色維持很長時(shí)間.本試驗(yàn)5個(gè)樣品的乙醇提取物都具有一定的LPO抑制作用（表3），樣品1、2和3的LPO抑制作用較強(qiáng)，但相互差異不顯著（P＜0.05）;樣品4、5的LPO抑制作用較弱.說明主料玉米秸稈和輔料玉米芯不利于姬松茸子實(shí)體LPO抑制能力的提高.

2.3.4 螯合Fe2＋能力測定結(jié)果

螯合劑的存在會(huì)破壞Ferrozine-Fe2＋紅色復(fù)合物的結(jié)構(gòu)從而減少紅色物質(zhì).通過在562 nm測定紅色物質(zhì)減少的程度可以估算螯合的能力，較低的吸光度表明較高的螯合能力.5個(gè)樣品乙醇提取物的螯合能力由高到低為：樣品2＞樣品3＞樣品1＞樣品4＞樣品5（表3），說明主料蘆筍老莖更有利于姬松茸子實(shí)體螯合能力的提高，輔料干牛糞要優(yōu)于其他3種輔料.

2.3.5 姬松茸子實(shí)體抗氧化性綜合評(píng)價(jià)

綜合抗氧化性的4個(gè)指標(biāo)可以看出（表3）以蘆筍老莖為主料栽培得到的姬松茸子實(shí)體樣品（樣品1-4）的抗氧化性明顯強(qiáng)于用玉米秸稈為主料栽培得到的姬松茸子實(shí)體樣品（樣品5）的抗氧化性.

3 討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明蘆筍老莖是一種很好的姬松茸栽培原料，選擇合適的輔料配合使用能夠取得不錯(cuò)的栽培效果.今后有必要在更多的栽培管理細(xì)節(jié)上進(jìn)行研究，建立完善的針對(duì)蘆筍老莖培養(yǎng)料的姬松茸栽培工藝.同時(shí)，也應(yīng)該就姬松茸對(duì)蘆筍老莖中的大分子物質(zhì)（例如纖維素、木質(zhì)素等）的分解利用情況進(jìn)行研究，為設(shè)計(jì)更合理的培養(yǎng)料配方提供理論上的依據(jù).

本試驗(yàn)用稀堿提取測得的多糖含量比賈薇［11］、楊梅［12］、孫培龍［13］報(bào)道的用熱水法提取的多糖含量明顯要高，證明稀堿提取具有較好的效果.雖然稀堿能夠破壞子實(shí)體細(xì)胞膜，使胞內(nèi)多糖釋放的更好，但是過高濃度的堿液會(huì)破壞多糖的結(jié)構(gòu)，因此稀堿提取時(shí)要將堿濃度維持在一定范圍內(nèi)，一般為0.75～1.25 mol／L.

從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，姬松茸子實(shí)體具有很好的DPPH自由基清除作用，亦有很好的還原力和亞鐵離子螯合能力，所以可以考慮將姬松茸子實(shí)體開發(fā)成相關(guān)的天然抗氧化劑產(chǎn)品，這方面仍然需要做大量的工作.

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Study on Cultivation ofAgaricusBlazeion Asparagus Old Stem Substrate

HAN Jian-rong，WANG Qi，LI Bin-bin，WANG Lin-lin
（SchoolofLifeScience，ShanxiUniversity，Taiyuan030006，China）

Influences of different composts on the yield，polysaccharide content and antioxidant activity ofAgaricusblazeiMurill（ABM）fruit bodies were analyzed.The result showed that no significant differences（P＜0.05）were found in the mushroom yields between asparagus old stem compost and maize straw compost.Addition of appropriate amounts of cottonseed hull or dried cow dung increased the mushroom yield significantly higher as compared with sawdust and corncob.These results manifested that the asparagus old stem was suitable for cultivating ABM.The antioxidant activity of fruit bodies cultivated on asparagus old stem compost was significantly stronger than that on maize straw compost.But the polysaccharide content of fruit bodies cultivated on maize straw compost was significantly higher.Among the four auxiliary materials，cottonseed hull and corncob were favorable to the synthesis of polysaccharide，and cottonseed hull was more helpful to improve the antioxidant activity of ABM fruit bodies than dried cow dung，sawdust and corncob.

asparagus old stem;Agaricusblazei;yield;polysaccharide content;antioxidant activity

Q935

A

0253-2395（2012）02-0405-05＊

2011-06- 28;

2011-09-21

國家自然科學(xué)基金（31070048）

韓建榮（1959－），男，山西保德人，博士，教授，主要從事資源微生物學(xué)研究.E-mail：hjr＠sxu.edu.cn