馬曉慧 車小新*

（1 河南省人民醫(yī)院檢驗科，河南 鄭州 450003；2 河南省人民醫(yī)院皮膚科，河南 鄭州 450003）

人精液中白細(xì)胞計數(shù)的傳統(tǒng)方法是用組織化學(xué)方法鑒定多形核粒細(xì)胞特有的過氧化物酶，雖然這種技術(shù)有相對易于操作的長處，但它不能檢測已經(jīng)活化并已釋放其顆粒的多形核白細(xì)胞，也不能檢測不含過氧化物酶的其他種類的白細(xì)胞[1]。例如淋巴細(xì)胞。這類細(xì)胞通過免疫細(xì)胞化學(xué)方法進(jìn)行檢測。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本組患者選自筆者所在醫(yī)院門診及住院患者50例，30～35歲9例，36歲～40歲29例，41歲-45例12例。實驗室進(jìn)行精液常規(guī)檢查的患者。在直接涂片檢驗，高倍鏡下判定為“白細(xì)胞”，其數(shù)量＜10/HP，精子精量＜50×109/L的對其同時進(jìn)行涂片染色檢驗。

1.2 方法

正甲苯胺過氧化物酶染色：試劑應(yīng)用飽和NH4CI溶液（ 250g/L），50g/L Na2EDTA磷酸緩沖液（pH 6.0），正甲苯胺（0.25mg/mL），30%H2O2蒸餾水溶液。此工作液含：1mL試劑1；lmL試劑2；9mL 試劑3；和一滴試劑此溶液配制后可使用24小時。試驗步驟將0.lmL精液與0.9mL工作液混合，振蕩2分鐘，在室溫下放置20～30min，再振蕩，過氧化物酶陽性細(xì)胞被染成棕色，而過氧化物酶隴性細(xì)胞不著色，用白細(xì)胞計數(shù)池重復(fù)計數(shù)200個白細(xì)胞兩次，并估計過氧化物酶陽性和陰性細(xì)胞的百分比。

2 結(jié) 果

共檢驗出疑似“白細(xì)胞”標(biāo)本50份，采用正甲苯胺過氧化物酶染色檢查后，僅發(fā)現(xiàn)10份標(biāo)本系白細(xì)胞。其中5份僅檢出白細(xì)胞，5份標(biāo)本同時還檢出各級生精細(xì)胞，其數(shù)量各約占50%。有18份標(biāo)本只發(fā)現(xiàn)個別白細(xì)胞，絕大部分細(xì)胞系為各級生精細(xì)胞。余22份標(biāo)本只發(fā)現(xiàn)各級精母細(xì)胞而未發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞。

3 討 論

精子中最主要的結(jié)構(gòu)為一濃集的細(xì)胞核，攜帶遺傳物質(zhì)即DNA，成熟的精子中胞漿少，既無核RNA又無漿RNA。既不生長，也不分裂僅含單倍體量的DNA。從一個雙倍體精原細(xì)胞發(fā)育為近百個單倍體精子需增加幾十倍的DNA。用放射自顯影術(shù)證明這些DNA均在精子細(xì)胞有絲分裂過程中合成，細(xì)線期初級精母細(xì)胞后不再有DNA合成。初級精母細(xì)胞中含四倍量DNA，經(jīng)兩次成熟分裂到精子細(xì)胞期即成為單倍體細(xì)胞。也曾用放射自顯影術(shù)研究RNA代謝，精原細(xì)胞和精母細(xì)胞均有RNA代謝，精子細(xì)胞早期有低水平RNA合成，中期精子細(xì)胞后就不再合成[2]。精原細(xì)胞和精母細(xì)胞均可合成核仁RNA及非核仁RNA。細(xì)線期與偶線期精母細(xì)胞中核仁RNA合成達(dá)高峰值，而非核仁RNA合成高峰在粗線期精母細(xì)胞。

試驗發(fā)現(xiàn)葡萄搪對精子發(fā)生過程中的蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)有保護(hù)作用。體外的氨基酸摻入試驗證明，加入葡萄糖后各級生精細(xì)胞中氨基酸摻入均增加。粗線期初級精母細(xì)胞的摻入量最多，早期精子細(xì)胞摻入量增加的幅度最大。葡萄糖還能大大減輕溫度對睪丸蛋白質(zhì)合成的破壞作用。目前來看，葡萄糖供應(yīng)對精子細(xì)胞的變態(tài)過程及其蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)十分重要，而精原細(xì)胞及初級精母細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成對葡萄糖的依賴就不強(qiáng)。故FSH起一始動作用，發(fā)動以后單獨靠睪酮也可維持一定生精功能。三種激素均不能直接作用于生精細(xì)胞，都直接或間接作用于支持細(xì)胞，然后進(jìn)一步創(chuàng)造適合精子發(fā)生的內(nèi)環(huán)境。已在支持細(xì)胞表面證實有FSH受體，F(xiàn)SH并不能通過血睪屏障;在支持細(xì)胞內(nèi)也證實有雄激素受體[3]。雄激素也可作用于曲細(xì)精管壁周圍的類肌細(xì)胞。大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為ICSH主要促進(jìn)間質(zhì)細(xì)胞分泌雄激素，然后刺激精子發(fā)生，這些均提示支持細(xì)胞在精子發(fā)生的調(diào)控中占特殊地位。又發(fā)現(xiàn)支持細(xì)胞還可調(diào)節(jié)間質(zhì)細(xì)胞合成與分泌睪丸酮。體外培養(yǎng)的支持細(xì)胞可分泌一種促進(jìn)間質(zhì)細(xì)胞分泌睪丸酮的因子，同時支持細(xì)胞可分泌雌激素及LHRH樣物質(zhì)，這兩個激素卻是間質(zhì)細(xì)胞功能的抑制因子。支持細(xì)胞與間質(zhì)細(xì)胞間也有復(fù)雜的功能關(guān)系。

睪網(wǎng)液內(nèi)的精子有活動能力，一旦進(jìn)入附睪頭段后即失活力。精子在附睪運行過程中運動方式有規(guī)則性的改變，先出現(xiàn)原地擺動，然后轉(zhuǎn)圈狀運動，最后才有螺旋式的向前運動。所以觀察精子的運動方式是衡量精子成熟的一個指標(biāo)。精子成熟過程中細(xì)胞內(nèi)cAMP增加與精子動力獲得密切相關(guān)。使用磷酸二酯酶可使未成熟精子內(nèi)cAMP含量升高并產(chǎn)生一定運動能力，但并無前向運動。研究證實附睪頭部磷酸二酯酶的活性為附睪尾的兩倍，這可能是精子成熟過程中cAMP升高的原因。附睪上皮還可產(chǎn)生一特異的前向運動蛋白，這種糖蛋白與附睪精子結(jié)合時可促進(jìn)其產(chǎn)生前向運動[4]。另外Ca2+也是調(diào)節(jié)精子運動的重要因素。

精子發(fā)生過程中，其核中發(fā)生組蛋白型的轉(zhuǎn)變。精子在附睪內(nèi)運行過程中精子核中DNA與魚精蛋白緊密結(jié)合，故表現(xiàn)為精子成熟過程中精子核的DNA細(xì)胞化學(xué)染色（如Fculgen）不斷減弱，這也是精子是否成熟的重要指標(biāo)。精子成熟過程中最重要的結(jié)構(gòu)改變是蛋白質(zhì)結(jié)合硫基減少，而二硫鍵增加。這種改變可見于精子核、頂體下區(qū)、頂體后區(qū)、精子中段、鞭毛纖維鞘、精子膜。如此廣泛的轉(zhuǎn)換與精子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定密切相關(guān)。

精子成熟過程中磷脂、脂肪酸及硫基等的改變均意味膜結(jié)構(gòu)的改變。附睪分泌一些物質(zhì)附著精子表面使精子結(jié)構(gòu)與性質(zhì)明顯改變。精子膜在受精過程中起關(guān)鍵作用，這表明精子成熟過程中其膜結(jié)構(gòu)已成熟到能完成受精作用的地步；但另一方面附睪精子要在射出以后轉(zhuǎn)運到輸卵管時才真正發(fā)生受精作用，故附睪精子膜在成熟的同時還將覆蓋上一些物質(zhì)使之暫時不起作用。總之精子成熟過程中膜有兩方面改變，一是為受精做好準(zhǔn)備，另一是暫時阻抑其受精功能。精子在陰道內(nèi)不會獲能，若宮頸口開放則可使精子獲能。子宮是精子獲能的主要場所，輸卵管分泌液卵泡液及卵丘也參與獲能，精子只有與子宮內(nèi)膜接觸才能獲能。分析家兔子宮及輸卵管中的淀粉酶均高于血清水平幾倍，淀粉酶也隨性周期改變，以排卵期最高。另精子在宮腔內(nèi)有大量白細(xì)胞出現(xiàn)，白細(xì)胞一進(jìn)人宮腔，精子即與其附著，白細(xì)胞中的糖原分解成葡萄糖供精子能量需要，另自細(xì)胞特殊顆粒釋放水解酶以去除精子表面的去能因子未完成獲能的第一步反應(yīng)。

卵母細(xì)胞外有一層糖蛋白構(gòu)成的透明帶，透明帶外是富含粘多糖的卵丘與放射冠，精子要同時消化粘多糖和蛋白質(zhì)才能與卵結(jié)合。頂體酶系中有一些特殊的酶，透明質(zhì)酸酶可消化卵丘細(xì)胞，放射冠分散酶可使放射冠解體，頂體蛋白酶使精子穿過透明帶。透明質(zhì)酸酶最適pH是3.8，此酶的活性有賴于鈉、鉀濃度，hCG誘發(fā)排卵后的子宮液能促進(jìn)其釋放，孕酮及切除卵巢后的子宮液則抑制其活性。放射冠分散酶是一脂糖蛋白，只作用于放射冠不影響透明帶。頂體蛋白酶是一大類蛋白酶，可使透明帶分解，又稱為類胰蛋白酶。人精子中頂體蛋白酶可被宮頸粘液中的抗胰蛋白酶抑制劑及抗凝血酶所抑制，此三種物質(zhì)在排卵期的宮頸粘液中均減少。頂體蛋白酶具氨基肽酶、酯酶及蛋白酶活性，對精氨酸鍵有高度選擇作用。頂體中還有唾液酸酶，是與頂體結(jié)合最緊的酶。一般認(rèn)為它可改變透明帶的結(jié)構(gòu)，不讓其他精子再穿過。

[1]黨小軍,胡淑玲,李芒會.流式細(xì)胞術(shù)在白細(xì)胞精子癥精子質(zhì)量評估中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2011,26(3):45-46.

[2]李如凱,郭龍華.C14orf48基因在人精液精子中的表達(dá)和生物信息學(xué)分析[J].中國實驗診斷學(xué),2011,15(6):23-24.

[3]李雪蘭,鐘曉敏.尿液中含有精子對檢測結(jié)果的影響[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2011,13(6):65-66.

[4]黎興盛,鮑琳,楊春,等.216例男性不育癥精液檢驗與血清中抗精子抗體的關(guān)系[J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué),2011,29(2):99-100.