馬 靜， 許瓊明， 吳文倩， 劉春宇

(蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)部藥學(xué)院，江蘇蘇州215123)

炎寧顆粒主要由鴨跖草、白花蛇舌草和鹿茸草組成，是浙江大東吳藥業(yè)有限公司研制的一味純中藥復(fù)方制劑。現(xiàn)代藥理證明白花蛇舌草有抗菌消炎利水之功［1-3］，鴨跖草有清熱消炎作用［4］，鹿茸草可治感冒、咳嗽，臨床報(bào)道有治療上呼吸道感染及慢性氣管炎的作用。三藥合用清熱解毒，抗菌消炎，有效改善炎癥造成的紅腫熱痛等癥狀。文獻(xiàn)報(bào)道白花蛇舌草主要含黃酮類、蒽醌類、揮發(fā)油類、萜類、有機(jī)酸類、甾醇類、多糖類、生物堿、強(qiáng)心苷類等成分，還含有一些微量元素、氨基酸及揮發(fā)性成分［5］。鴨跖草屬植物中所含的化學(xué)成分包括黃酮類，生物堿，萜類、甾體等其他化合物:phydroxyeinnamie acid、mannose、triacontanol、octacontanol、dotriacontano［6］和 2-heneicosanone［7］。鹿茸草屬植物化學(xué)成分國(guó)內(nèi)外均無(wú)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。

為了探究炎寧復(fù)方的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，首次對(duì)該復(fù)方的水提醇沉液進(jìn)行了化學(xué)研究，從炎寧顆粒中分離得到的5個(gè)黃酮類化合物、1個(gè)三萜皂苷和1個(gè)芳香酸，經(jīng)化學(xué)方法和波譜學(xué)方法分別鑒定為齊墩果酸 (1)、芹菜素 (2)、木犀草素 (3)、槲皮素 (4)、山柰酚 (5)、蘆丁 (6)和香草酸 (7)。

1 儀器與材料

RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 (上海亞榮生化儀器廠);核磁共振用AVANCE 500型核磁共振儀測(cè)定(BRUKER);各種色譜用硅膠 (青島海洋化工廠);SephadexTMLH-20:GE Healthcare(made in Sweden);LC-20A制備型高效液相色譜儀 (日本島津);LC-20A分析型高效液相色譜儀 (日本島津);炎寧顆粒浸膏由浙江大東吳藥業(yè)提供。AB-8型大孔吸附樹脂為天津南開大學(xué)化工廠生產(chǎn)。

2 提取分離

取炎寧顆粒水提醇沉液約6.8 kg(相當(dāng)于生藥57 kg)，通過(guò)處理好的AB-8大孔吸附樹脂吸附，依次用水、30%乙醇、60%乙醇、95%乙醇洗脫，各洗脫部位分別回收溶劑至稠膏狀，經(jīng)冷凍干燥后得到4個(gè)部位。經(jīng)過(guò)預(yù)試驗(yàn)篩選確定30%和60%乙醇洗脫部位為炎寧顆粒的有效活性部位。30%乙醇洗脫部位通過(guò)反復(fù)硅膠柱層析、凝膠柱色譜及制備型高效液相色譜分離得到1～5，其中化合物1為石油醚-乙酸乙酯 (9∶1)洗脫得到，化合物2、3、4為石油醚-乙酸乙酯 (7∶3)洗脫得到，化合物5為石油醚-乙酸乙酯 (6∶4)洗脫得到。60%乙醇洗脫部位通過(guò)反復(fù)硅膠柱層析、凝膠柱色譜及制備型高效液相色譜分離得到6和7，其中化合物6為三氯甲烷-甲醇 (8∶2)洗脫得到，化合物7為石油醚-乙酸乙酯 (7∶3)洗脫得到。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1:白色結(jié)晶 (甲醇)，不溶于水，可溶于甲醇、乙醇、丙酮和三氯甲烷，五氯化銻反應(yīng)(Kahlenberg reaction)、醋酐-濃硫酸反應(yīng) (Liebermann-Burchard reaction)、三氯醋酸反應(yīng) (Rosen-Heimer reaction)為陽(yáng)性，Molish反應(yīng)呈陰性，提示該化合物可能是三萜苷元。1H-NMR(500MHz，MeOD)δ:5.266(1H，t，H-12)是碳碳雙鍵(C=CH)上的氫質(zhì)子信號(hào)，3.175(1H，m，H-3)是與氧相連的碳上的氫質(zhì)子信號(hào)，0.739～2.023為亞甲基以及角甲基的吸收峰，該區(qū)域是三萜類化合物的 H-NMR的特征信號(hào)峰。13C-NMR(500MHz，MeOD)δ:181.80為羰基 (C=O)碳信號(hào)，在144.97和123.44處為13-C和12-C兩個(gè)烯碳的信號(hào)，根據(jù)C12的化學(xué)位移值在121～124之間，C13的化學(xué)位移值位于142～145之間，可以大致判斷該化合物的母核為 β-香樹脂醇型，79.64是跟氧相連的碳 (3-C)信號(hào)。該化合物與齊墩果酸對(duì)照品進(jìn)行TLC檢測(cè)，結(jié)果Rf值與顯色行為均一致，同時(shí)結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn) ［8］，確定此化合物為齊墩果酸。

化合物2:淡黃色粉末 (甲醇)，鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈陽(yáng)性，Molish反應(yīng)呈陰性，UV光譜圖中240～280 nm以及300～400 nm區(qū)域有較強(qiáng)吸收，以上均為黃酮類化合物典型特征，初步判斷該化合物為黃酮類。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:12.960(5-OH)，10.573(7，4'-OH)，7.925(2H，d，J=9.0 Hz，H-2'，6')，6.928(2H，d，J=8.5 Hz，H-3'，5')，6.776(1H， s， H-3)，6.481(1H，d，J=1.5 Hz，H-8)，6.193(1H，d，J=1.5 Hz，H-6)。13C-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:181.69(C-4)，164.15(C-2)，163.69(C-7)，161.41(C-5)，161.13(C-4')，157.27(C-9)，128.42(C-2'，6')，121.13(C-1')，115.91(C-3'，5')，103.63(C-10)，102.79(C-3)，98.80(C-6)，93.92(C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［9］報(bào)道的芹菜素?cái)?shù)據(jù)基本一致，故確定此化合物為芹菜素。

化合物3:黃色粉末 (甲醇)，鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈陽(yáng)性，Molish反應(yīng)呈陰性，UV光譜圖中240～280 nm以及300～400 nm區(qū)域有較強(qiáng)吸收，初步判斷該化合物為黃酮類。1H-NMR(500MHz，MeOD)δ:7.356(1H，m，H-2')，7.360(1H，m，H-6')，6.888(1H，d，J=9.0 Hz，H-5')，6.513(1H，s，H-3)，6.420(1H，d，J=2.5 Hz，H-8)，6.193(1H，d，J=2.0 Hz，H-6).13C-NMR(500 MHz，MeOD)δ:184.14(C-4)，166.62(C-7)，166.25(C-2)，163.48(C-9)，159.69(C-5)，151.23(C-4')，147.30(C-3')，124.01(C-6')，120.57(C-1')，117.05(C-5')，114.46(C-2'，105.61(C-3)，104.18(C-10)，100.39(C-6)，95.26(C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］報(bào)道的木犀草素?cái)?shù)據(jù)基本一致，故確定此化合物為木犀草素。

化合物4:黃色粉末 (甲醇)，鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈陽(yáng)性，Molish反應(yīng)呈陰性，UV光譜圖中240～280 nm以及300～400 nm區(qū)域有較強(qiáng)吸收，初步判斷該化合物為黃酮類。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:12.456(1H，5-OH)，10.782(1H，3-OH)，9.547(1H，3'-OH)，9.264(2H，7，4'-OH)，7.649(1H，d，J=2.0 Hz，H-2')，7.514(1H，dd，J=2.0，8.5 Hz，H-6')，7.862(1H，d，J=8.5 Hz，H-5')，6.389(1H，d，J=1.5 Hz，H-8)，6.165(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)。13C-NMR (500 MHz， DMSO-d6) δ:175.78(C-4)，163.85(C-7)，160.66(C-9)，156.08(C-5)，147.65(C-4')，146.75(C-2)，145.01(C-3')，135.66(C-3)，121.90(C-1')，119.92(C-6')，115.56(C-5')，115.02(C-2')，102.95(C-10)，98.13(C-6)，93.29(C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］報(bào)道的槲皮素?cái)?shù)據(jù)基本一致，故確定此化合物為槲皮素。

化合物5:黃色粉末 (甲醇)，鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈陽(yáng)性，Molish反應(yīng)呈陰性，UV光譜圖中240～280 nm以及300～400 nm區(qū)域有較強(qiáng)吸收，初步判斷該化合物為黃酮類。1H-NMR(500 MHz，MeOD) δ:8.077(2H，d，J=8.0 Hz，H-2'，6')，6.891(2H，d，J=9.0 Hz，H-3'，5')，6.382(1H，d，J=1.5 Hz，H-8)，6.173(1H，d，J=1.5Hz， H-6).13C-NMR(500MHz，MeOD) δ:177.78(C-4)， 165.85(C-7)，162.78(C-9)，160.80(C-4')，158.56(C-5)，148.40(C-2)，130.94(C-2'，6')，124.12(C-1')，116.59(C-3'，5')，104.85(C-10)，99.59(C-6)，94.76(C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［10］報(bào)道的山柰酚數(shù)據(jù)基本一致，故確定此化合物為山柰酚。

化合物6:黃色粉末 (甲醇)，鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈陽(yáng)性，Molish反應(yīng)呈陰性，UV光譜圖中240～280 nm以及300～400 nm下有較強(qiáng)吸收，初步判斷該化合物為黃酮類。1H-NMR(500 MHz，MeOD)δ:7.659(1H，s，H-2')，7.619(1H，d，J=8.0 Hz，H-6')，6.864(1H，d，J=8.0 Hz，H-5')，6.385(1H，s，H-8)，6.198(1H，s，H-6)，5.108(1H，d，J=7.5 Hz，H-1″)，4.519(1H，s，H-1?).5.099(1H，d，J=7.0 Hz，glu-H)。13C-NMR(500 MHz，MeOD)δ:179.71(C-4)，166.30(C-7)，163.27(C-5)，159.63(C-9)，158.80(C-2)，150.10(C-4')，146.13(C-3')，135.94(C-3)，123.86(C-1')，123.44(C-6')，118.00(C-5')，116.36(C-2')，1015.94(C-10)， 105.02(C-1″)， 102.72(C-1?)，100.25(C-6)，95.17(C-8)，78.49(C-3″)，77.52(C-5″)，76.03(C-2″)，74.24(C-4?)，72.55(C-4″)，72.40(C-2?)，71.70(C-3?)，70.00(C-5?)，68.86(C-6″)，18.17(C-6?)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［11］報(bào)道的蘆丁數(shù)據(jù)基本一致，故確定此化合物為蘆丁。

化合物7:無(wú)色針狀結(jié)晶，有特殊香氣。溴甲酚綠反應(yīng)陽(yáng)性，三氯化鐵-鐵氰化鉀反應(yīng)陽(yáng)性，初步推測(cè)該化合物為芳香酸類結(jié)構(gòu)。1H-NMR(500 MHz，MeOD)δ:7.544(1H，brs，H-2)，7.544(1H，br，H-6)，6.828(1H，d，J=4.5 Hz，H-5)，3.876(3H， s，-OCH3)。13C-NMR(500 MHz，MeOD)δ:170.35(-COOH)，152.94(C-4)，148.94(C-3)，125.57(C-6)，123.41(C-1)， 166.12(C-5)， 114.13(C-2)， 56.69(-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［12］報(bào)道的香草酸數(shù)據(jù)基本一致，故確定此化合物為香草酸。

4 討論

炎寧復(fù)方因其組方獨(dú)特、療效確切、副作用小而被列為國(guó)家中藥保護(hù)品種。但已有的炎寧顆粒制劑工藝比較傳統(tǒng)，有效成分不明確，工藝改革難以進(jìn)行。本實(shí)驗(yàn)首次從炎寧顆粒中分離得到的7個(gè)化合物，為進(jìn)一步研究其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、開發(fā)新制劑新工藝及制定有關(guān)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供了研究基礎(chǔ)。

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