宋愿智 宋 哲 李秋菲

1.陜西省食品藥品檢驗(yàn)所，陜西西安 710061；2.西安市紅十字會醫(yī)院，陜西西安 710054

華蟾素膠囊是由華蟾素片改變劑型而成的制劑，華蟾素片收藏于中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑標(biāo)準(zhǔn)第14冊，標(biāo)準(zhǔn)代號為WS3-B-2564-97。本品由單味干蟾皮經(jīng)提取精制而成，具有解毒、消腫、止痛功效，主要用于中、晚期腫瘤，慢性乙型肝炎等的治療[1]。原片劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中無含量測定項(xiàng)，為有效控制本品質(zhì)量，依據(jù)SFDA《藥品注冊管理辦法》及相關(guān)技術(shù)指導(dǎo)原則[2-4]，本資料對其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，特別是對含量測定方法進(jìn)行了研究。據(jù)資料報(bào)道[5-6]，干蟾皮中含有多種化學(xué)成分，如華蟾蜍毒素、華蟾蜍素及次素、去乙酰華蟾素、蟾蜍配基、脂蟾毒配基、吲哚類生物堿（如蟾酥堿，蟾酥甲堿）等。吲哚類生物堿具有一定的藥理作用，特別是5-羥色胺（Serotonine），因此筆者以此為指標(biāo)對其含量測定進(jìn)行研究，研究結(jié)果證明，該方法簡便易行，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，方法重現(xiàn)性較好，可以作為其制劑質(zhì)量控制的一種方法。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

TU-1810紫外可見分光光度計(jì)（北京普折通用儀器有限責(zé)任公司）；賽多利斯BP211D電子天平。

1.2 試藥

5-羥色胺對照品（批號111656-200401，中國藥品生物物品檢定所，供含量測定用）；華蟾素膠囊（市場購得，陜西東泰制藥有限公司，Z20056846）；所用試劑均為分析純（西安化學(xué)試劑廠）。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的配制

2.1.1 對照品溶液的制備 精密稱取在五氧化二磷干燥器中真空干燥至恒重的5-羥色胺對照品2 mg，置50 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.1.2 供試品溶液制備 取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研細(xì)，取約0.5 g，精密稱定，置索氏提取器中，加三氯甲烷適量，加熱回流至提取液近無色，放冷，棄去三氯甲烷液，藥渣揮干三氯甲烷。再加甲醇適量，加熱回流2 h，放冷，甲醇液水浴上蒸干，殘?jiān)铀m量使溶解，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，并用水稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.2 測定波長選擇

分別取對照品、供試品溶液按擬定的含量測定方法操作，顯色后在500～600 nm進(jìn)行掃描，結(jié)果兩者均在556 nm處有最大吸收，故選此波長為測定波長。見圖1。

圖1 對照品、供試品溶液波長測定

2.3 線性關(guān)系考察

精密量取對照品溶液 1.0、2.0、3.0、4.0 和 5.0 mL，分別置10 mL量瓶中，各加水使5.0 mL，搖勻，加15%對二甲氨基苯甲醛鹽酸溶液（2→3）至刻度，搖勻，放置30 min。按照分光光度法，在556 nm波長處測定吸收度，以吸收度值為縱坐標(biāo)，5-羥色胺量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。見圖2。結(jié)果5-羥色胺在0.044 5～0.222 5mg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，回歸方程為：y=3.891 2x+0.087 1，相關(guān)系數(shù)為：r=0.998 8。

表1 5-羥色胺加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果表（n=6）

圖2 5-羥色胺的吸收度曲線

2.4 精密度試驗(yàn)

取供試品溶液，按擬定的含量測定方法操作，5次連續(xù)測定其吸收度值，計(jì)算RSD為0.66%。試驗(yàn)結(jié)果表明，精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，按擬定的含量測定方法操作，于0、30、60、90、120、150和180 min測定吸收度值。結(jié)果在本試驗(yàn)條件下，供試品在3 h內(nèi)穩(wěn)定，顯色30 min后就基本穩(wěn)定，RSD為1.66%。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)

取同一批華蟾素膠囊5份樣品，按供試品溶液制備方法制備和測定，結(jié)果RSD為2.38%，說明重現(xiàn)性良好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

取同一批已知含量的華蟾素膠囊6份樣品，精密加入一定量的5-羥色胺對照品溶液，按擬定的含量測定方法測定吸收度值，計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為96.77%，RSD為1.42%。見表1。

2.8 樣品測定

取10批樣品，按供試品溶液的制備方法制備并測定，結(jié)果10 批樣品中 5- 羥色胺含量為 0.303、0.289、0.255、0.295、0.257、0.263、0.281、0.256、0.273和 0.239 mg/粒，平均含量為0.271 mg/粒。

3 討論

3.1 供試品溶液的制備

由于吲哚類生物堿在三氯甲烷、乙酸乙酯等有機(jī)溶劑中不溶，而在水、甲醇中溶解度較大；但用水提取供試品溶液中雜質(zhì)較多。故筆者先用三氯甲烷除去一些脂溶性和甾體類成分（特別是后者可與對二甲氨基苯甲醛顯色劑反應(yīng)顯色），再用甲醇回流提取吲哚類生物堿，與顯色劑反應(yīng)后，測定其含量。

3.2 提取方法的考察

取本品內(nèi)容物適量，研細(xì)，精密稱取4份，每份約0.5 g，置索氏提取器中，加三氯甲烷適量，加熱回流至提取液為無色，放冷，棄去三氯甲烷液。將藥渣揮干三氯甲烷，加甲醇適量，分別用超聲和回流兩種不同的方法提取1 h，過濾，用甲醇適量分次洗滌容器及殘?jiān)?，濾液和洗滌液置同一蒸發(fā)皿中，水浴上蒸干，殘?jiān)铀m量使溶解，并轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，過濾，即可。按擬定的含量測定方法測定每份含量。結(jié)果回流提取吲哚類總生物堿的含量最高，所以提取方法確定為回流提取。為保證提取完全，采用索氏提取器中提取。同時對加熱回流提取時間進(jìn)行了考察，分別于加熱回流1、2、3、4 h，按擬定方法測定含量。結(jié)果回流提取2 h，提取液顏色變淺，且含量最高，所以確定回流提取時間為2 h。

[1] 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成分制劑[S].第14冊.1997：42.

[2] 國家食品藥品監(jiān)督管理局.藥品注冊管理辦法（局令28號）[S].2007-7-10.

[3] 國家食品藥品監(jiān)督管理局.藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則（2005）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2005：196.

[4] 國家藥典委員會.中國藥典2010年版一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：205.

[5] 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1986：5688-5690.

[6] 楊力宏.中華大蟾蜍皮化學(xué)成分的研究[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，1992，27（9）：679.