張衛(wèi)民，楊 杰，吳擁軍

(1.河南天方藥業(yè)股份有限公司，河南駐馬店 463000;2.鄭州大學(xué)化學(xué)系，河南鄭州 450001)

0 引言

利塞膦酸鈉是由美國(guó)寶潔公司研制開(kāi)發(fā)的第三代雙膦酸鹽類藥物，為西藥二類新藥。到目前為止，只開(kāi)發(fā)出少數(shù)測(cè)定生物基質(zhì)中利塞膦酸鈉的分析方法，包括經(jīng)?；凸柰榛纬蓳]發(fā)性衍生物后的氣相色譜—質(zhì)譜法［1］和非常靈敏但極為復(fù)雜的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法［2］。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，高效液相色譜法是測(cè)定利塞膦酸鈉的首選方法［3－5］。本文介紹一種用于雙膦酸鹽類藥物利塞膦酸鈉與有關(guān)物質(zhì)分離的反相離子對(duì)高效液相色譜法，該方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確可靠。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試藥

戴安高效液相色譜儀，美國(guó)戴安公司;100 μm Hamilton微量進(jìn)樣器，美國(guó);移液槍，Dragon，芬蘭;AL 104型電子天平，梅特勒—托利多儀器有限公司。塞膦酸鈉原料藥(批號(hào):071100010)由河南天方藥業(yè)公司提供，利塞膦酸鈉化學(xué)對(duì)照品(批號(hào):100613－200401)購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。

1.2 色譜條件

通過(guò)測(cè)試不同流動(dòng)相pH值、四丁基溴化銨濃度、甲醇比例、磷酸二氫銨濃度和乙二胺四乙酸二鈉濃度對(duì)利塞膦酸鈉及其有關(guān)物質(zhì)色譜行為的影響，確定了如下色譜條件:色譜柱為美國(guó)Thermo BDS Hypersil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相為甲醇—水(25 ∶75，體積分?jǐn)?shù))，流速為0.8 mL/min，柱溫為30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為262 nm。

1.3 利塞膦酸鈉原料藥有關(guān)物質(zhì)限量檢查

采用不加校正因子的主成分自身對(duì)照法，溶液配制及有關(guān)物質(zhì)HPLC測(cè)定方法參照2010版中國(guó)藥典附錄 VD［6］。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 流動(dòng)相組成的優(yōu)化

經(jīng)過(guò)多次實(shí)驗(yàn)，得到優(yōu)化后的流動(dòng)相組成為:pH值為7.9，四丁基溴化銨濃度為2 mmol/L，甲醇比例為25%，磷酸二氫銨濃度為5 mmol/L，EDTA濃度為1.5 mmol/L時(shí)，二者出峰時(shí)間較為合適且能達(dá)到良好的分離。

2.2 利塞膦酸鈉有關(guān)物質(zhì)測(cè)定

在上述色譜條件下，1 g/L利塞膦酸鈉與其有關(guān)物質(zhì)均能分離，4.941min的峰為流動(dòng)相的峰，利塞膦酸鈉與其有關(guān)物質(zhì)的保留時(shí)間分別約為5.9 min 和8.3 min，分離度大于 2.5，見(jiàn)圖 1;理論塔板數(shù)以利塞膦酸鈉和有關(guān)物質(zhì)峰計(jì)分別不低于5 000和2 000。利用有關(guān)物質(zhì)供試溶液和對(duì)照溶液分別重復(fù)進(jìn)樣5次的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，即得有關(guān)物質(zhì)的峰面積為0.326、0.328、0.346、0.282、0.326，利塞膦酸鈉的峰面積為:2.208、2.207、2.252、2.216、2.245。因此二者相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD分別為7.4%和0.96%。

圖1 1 g/L利塞膦酸鈉溶液色譜圖

表1 對(duì)照和供試溶液中利塞膦酸鈉及其有關(guān)物質(zhì)的峰面積

根據(jù)表1的測(cè)定結(jié)果，以不加校正因子的主成分自身對(duì)照法計(jì)算，雜質(zhì)峰含量約為0.14%;同時(shí)以面積歸一化法對(duì)供試品溶液色譜圖中雜質(zhì)峰和主成分峰峰面積計(jì)算，雜質(zhì)峰含量也約為0.14%，兩種計(jì)算方法得到的結(jié)果較為一致。

3 討論

本文所建立的反相離子對(duì)HPLC分析方法在測(cè)定利塞膦酸鈉時(shí)重現(xiàn)性好，利塞膦酸鈉及其有關(guān)物質(zhì)能達(dá)到良好分離，方法系統(tǒng)適用性好，在有關(guān)物質(zhì)檢查時(shí)得到的結(jié)果較為可靠。因此利用該法，可以用于利塞膦酸鈉常規(guī)分析及其有關(guān)物質(zhì)檢查，同時(shí)為利塞膦酸鈉原料藥的質(zhì)量控制提供了有效可靠的分析手段。

［1］Auriola S，Kostiainen R，Ylinen M，et al.Analysis of(dichloromethylene)bisphosphonate in urine by capillary gas chromatography－mass spectrometry［J］.Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis，1989 ，7(12):1623－1629.

［2］Mitchell D Y，Heise M A，Pallone K A，et al.The effect of dosing regimen on the pharmacokinetics of risedronate［J］.Journal of Clinical Pharmacology，1999，48(4):536－542.

［3］李朋梅，張 明，張 鐳，等.利塞膦酸鈉片溶出度測(cè)定方法的建立［J］.中國(guó)藥房，2011，22(33):3137－3138.

［4］楊 杰.利塞膦酸鈉原料藥中有關(guān)物質(zhì)的鑒定及其溶解度研究［D］.鄭州:鄭州大學(xué)，2010.

［5］萬(wàn)維香，瞿建江.高效液相色譜法測(cè)定利塞膦酸鈉的含量［J］.中國(guó)藥業(yè)，2010，19(4):24－25.

［6］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典二部［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010，附錄31頁(yè).