褚亞芳，胡福良

浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，杭州 310058

巢脾是由蜜蜂筑造的雙面布滿巢房的脾狀蠟質(zhì)結(jié)構(gòu)，是蜜蜂棲息、繁衍育子、貯存釀造食物的場(chǎng)所。由于繭衣的堆積和蜂產(chǎn)品儲(chǔ)存后的殘留，巢房的容積隨著培育蜜蜂世代的增加而減小，巢房的顏色由白色或者淡黃色轉(zhuǎn)為褐色甚至黑色，巢脾的成分也變得相當(dāng)復(fù)雜。

巢脾是一種民間傳統(tǒng)藥物，被用于治療或者輔助治療鼻炎、支氣管炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牙周炎、肝炎、皮膚病等，也被作為單一藥制劑(如“鼻炎寧”)和營養(yǎng)型原料(如“復(fù)肝扶正飲”)加以應(yīng)用。一些研究者認(rèn)為蜜蜂巢脾與有著悠久藥用歷史的中藥蜂房(也稱為露蜂房)功效相似。但是目前對(duì)巢脾的相關(guān)研究，尤其是基礎(chǔ)性研究相當(dāng)匱乏。本文對(duì)國內(nèi)外蜜蜂巢脾的生物學(xué)活性研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述，以期為蜜蜂巢脾的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 抗炎活性

蜜蜂巢脾對(duì)肝炎和鼻炎具有治療效果。朱俊彥等研究表明，意蜂巢脾水提液對(duì)二甲苯引起的KM小鼠耳廓腫脹具有顯著的抑制作用［1］。巢脾可以有效緩解鼻炎的癥狀，改善鼻塞、頭痛和頭昏，減少發(fā)病時(shí)間［2］?？锇钣魣?bào)道，巢脾對(duì)于治療急性傳染性肝炎、慢性肝炎、遷延性肝炎和早期肝硬化、慢性鼻炎、慢性副鼻竇炎、過敏性鼻炎、肥大性異炎和單純性鼻炎均有顯著療效［3］。另外有研究表明，巢脾對(duì)分泌性中耳炎也具有治療作用［4］。

蜂蠟被用于治療慢性濕疹、特異性皮炎和牛皮癬，起到了改善作用［5，6］。蜂蠟還被用作軟膏治療燒傷［7］。國外很多研究表明，從蜂蠟中提取加工的D-002能顯著降低角叉菜膠誘導(dǎo)的胸腺炎的炎性滲出體積［8］，減少白細(xì)胞三烯B4和血栓素B2，減輕小棉球肉芽腫的重量［9］。蜂蠟提取成分在抗炎方面的效率雖不及吲哚美辛等抗炎藥物，但是有顯著的護(hù)胃、防潰瘍功效［10］。

褚亞芳研究了巢脾水提液對(duì)急性炎癥模型小鼠的影響，結(jié)果表明，中蜂巢脾水提液和意蜂巢脾水提液均顯著抑制二甲苯引起的耳腫脹，顯著降低角叉菜膠引起的足腫脹程度和局部炎癥組織的PGE2含量，對(duì)醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增強(qiáng)則無抑制作用。研究還發(fā)現(xiàn)，中蜂巢脾水提液的抗炎活性表現(xiàn)出劑量依賴效應(yīng)［11］。

巢脾的抗炎活性可能與其中所含的蜂膠及蜜蜂繭衣等成分有關(guān)。蜂膠對(duì)急性炎癥、慢性炎癥和免疫性炎癥均有抑制作用，能調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞分化和淋巴因子的產(chǎn)生，抑制炎癥機(jī)體淋巴細(xì)胞的增殖。胡福良等以大鼠急性關(guān)節(jié)炎和急性胸膜炎為模型，研究蜂膠醇提液和水提液的抗炎活性，結(jié)果表明蜂膠對(duì)炎癥病理過程中的滲出、腫脹、白細(xì)胞聚集，以及炎癥急性期白細(xì)胞游走等均有抑制作用，有效減輕炎癥反應(yīng)程度［12］。蜜蜂胎(幼蟲和蛹)也具有一定的抗炎活性，研究表明其水提物能在一定程度上降低炎癥區(qū)域毛細(xì)血管的通透性，抑制完全弗氏佐劑引起的炎性腫脹，對(duì)慢性炎癥－棉球肉芽腫模型具有顯著的抑制作用，且對(duì)油酸和脂多糖引起的大鼠急性肺損傷也有明顯的保護(hù)作用［13］。

2 免疫調(diào)節(jié)活性

巢脾具有一定的免疫增強(qiáng)作用。研究表明，巢脾浸膏可以提高肉雞增重指數(shù)和存活率［14］。露蜂房在風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎以及白血病、肝癌等惡性腫瘤治療方面具有一定的價(jià)值，研究證明露蜂房對(duì)白血病細(xì)胞具有抑制增值并促進(jìn)凋亡的功效［15，16］。一些研究者從細(xì)胞、分子等多個(gè)層次對(duì)露蜂房治療白血病的功效和機(jī)理進(jìn)行了研究。體外研究表明露蜂房蛋白(NVP)能抑制K562細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡［17］;促進(jìn)急性髓細(xì)胞白血病患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞凋亡，并使其呈現(xiàn)典型的細(xì)胞凋亡超微結(jié)構(gòu)改變［18］。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了露蜂房在體內(nèi)條件下的免疫增強(qiáng)功效，并進(jìn)一步闡述其作用機(jī)理。如張雪莉等研究了露蜂房對(duì)紅白血細(xì)胞病小鼠脾組織中Bcl-2/Bax蛋白表達(dá)的影響，結(jié)果表明露蜂房能夠抑制Bcl-2蛋白的表達(dá)和促進(jìn)Bax蛋白的表達(dá)［15］。露蜂房能夠抑制肝癌細(xì)胞增殖，但是具體機(jī)理尚不明確，其中一條已知途徑是—NVP通過細(xì)胞外單向調(diào)節(jié)激酶信號(hào)途徑抑制HepG2肝癌細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)G1細(xì)胞周期阻滯。NVP可以在G1期阻滯細(xì)胞周期，抑制細(xì)胞周期蛋白B、細(xì)胞周期蛋白D1、細(xì)胞周期蛋白E等mRNA的表達(dá)。NVP抑制cdk2蛋白的表達(dá)，促進(jìn)p27蛋白和p21蛋白的表達(dá)，對(duì)p16蛋白的表達(dá)則無影響;促進(jìn)HepG2的細(xì)胞凋亡，核染色質(zhì)濃縮，細(xì)胞外單向信號(hào)調(diào)節(jié)激酶信號(hào)途徑活化［19］。露蜂房除了上述免疫增強(qiáng)功效之外，還具有免疫調(diào)節(jié)作用。吳德全等研究了露蜂房對(duì)淋巴細(xì)胞與胰島混合培養(yǎng)系統(tǒng)中淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響，結(jié)果表明4.0、0.4及0.2 g/mL 濃度的露蜂房水提取液對(duì)大鼠淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化有極顯著的抑制作用，其抑制率分別為45.3%、29.6%和9.2%，說明露蜂房具有抑制T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫功能，是潛在的抗排斥藥物資源［20］。

巢脾的免疫調(diào)節(jié)活性可能與其中所含的蜂膠、蜂花粉、蜂王漿和工蜂蟲蛹等等成分有關(guān)。蜂膠具有免疫調(diào)節(jié)活性，已被廣泛用于腫瘤患者的輔助治療以及其它免疫力低下者的保健，此外還是一種有效的疫苗佐劑［21，22］。蜂膠對(duì)機(jī)體非特異性免疫的調(diào)節(jié)，表現(xiàn)在有效提高巨噬細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞和多形核粒細(xì)胞的活性，調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的分泌和免疫細(xì)胞的增殖，降低巨噬細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)。蜂膠對(duì)機(jī)體的特異性免疫也能發(fā)揮功效，可促進(jìn)抗體的產(chǎn)生，促進(jìn)免疫低下的機(jī)體和接種疫苗或腫瘤細(xì)胞的機(jī)體淋巴細(xì)胞的增殖，提高機(jī)體免疫力;抑制炎癥機(jī)體淋巴細(xì)胞的增殖，調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞分化和淋巴因子的產(chǎn)生。此外，蜂花粉、蜂王漿和工蜂蟲蛹等蜂產(chǎn)品各自具有一定的免疫增強(qiáng)作用［13，23］。如汪禮國等研究發(fā)現(xiàn)蜂花粉多糖具有免疫增強(qiáng)作用，能夠提高肉雞胸腺、腎臟、法氏囊等免疫器官指數(shù)、周齡重和飼料效率［24］。周愛萍等研究發(fā)現(xiàn)蜂王漿能夠提高綿羊紅細(xì)胞誘導(dǎo)的小鼠遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)能力，增強(qiáng)細(xì)胞免疫;能夠明顯增加受試動(dòng)物碳廓清吞噬指數(shù)，增強(qiáng)腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力;促進(jìn)抗體生成細(xì)胞增多，增強(qiáng)血清溶血素反應(yīng)，提高體液免疫［25］。

3 抗微生物活性

巢脾對(duì)多種細(xì)菌具有抑制作用，且對(duì)革蘭氏陽性細(xì)菌的抑制效果優(yōu)于對(duì)革蘭氏陰性細(xì)菌的抑制效果。朱俊彥等報(bào)道，0.5 g/mL和0.25 g/mL(生藥量)意蜂巢脾水提液對(duì)短小桿菌、金黃色葡萄球菌、八疊桿菌、大腸桿菌和蠟狀桿菌都有很好的抑制作用，對(duì)枯草桿菌和沙門氏菌也有一定抑制作用［1］。巢脾水提液濃度為3/20～1/80時(shí)對(duì)金黃色葡萄球菌全抑制，濃度為3/20～1/20時(shí)對(duì)大腸桿菌、沙門氏桿菌、傷寒桿菌和綠膿桿菌全抑制［14］。意蜂老巢脾水提液和中蜂老巢脾水提液均能有效抑制金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)，前者對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用顯著優(yōu)于后者，并且抑制作用顯示濃度依賴效應(yīng)［26］。Tichy等通過濾紙片瓊脂擴(kuò)散法研究了蜂膠、蜂蜜、蜂花粉、巢脾和蜜蓋等一系列蜂產(chǎn)品的醇提液對(duì)草綠色鏈球菌的抑制作用，結(jié)果表明，蜂膠和經(jīng)蜜蜂處理并儲(chǔ)存于巢脾中的蜂花粉的醇提液對(duì)試驗(yàn)鏈球菌均具有強(qiáng)抗菌活性;蜂蜜、巢脾和蜜蓋醇提液對(duì)血液鏈球菌和遠(yuǎn)緣鏈球的抗菌活性相似—抑菌半徑約6.2～6.4 mm，但是蜜蓋對(duì)變異鏈球菌基本無抑制作用。他們還通過薄層色譜法分離樣品中的化學(xué)成分并進(jìn)行生物檢測(cè)以簡(jiǎn)單鑒定抗菌成分，結(jié)果表明不同蜂產(chǎn)品的抗菌成分具有相似特性，蜂膠、蜜蓋和混有蜜蓋的蜂蜜包含不同含量的抗菌混合成分，進(jìn)一步推斷它們主要的抗菌成分可能相同，更可能來源于蜂膠［27］。

露蜂房對(duì)一些致齲菌具有抑制作用，是一種有效的抗齲齒天然產(chǎn)物。黃正蔚等通過在體外模擬生物膜的形成，探討露蜂房對(duì)四種口腔常駐菌—唾液鏈球菌、內(nèi)氏放線菌、變形鏈球菌和血鏈球菌，形成人工致齲生物膜的影響。蜂房粗提取物溶液的加入，則可顯著減少變形鏈球菌在羥磷灰石片上粘附的量，在掃描電鏡的觀察中也表現(xiàn)出胞外基質(zhì)的減少，表明蜂房溶液在一定程度上抑制了菌斑的致齲化轉(zhuǎn)變，可能具有調(diào)節(jié)菌斑內(nèi)生態(tài)平衡的作用［28］。另有研究表明，蜂房醇提物和乙酸乙酯萃取成分對(duì)變形鏈球菌、血液鏈球菌、粘性放線菌的生長(zhǎng)有一定的抑制作用，并且對(duì)這3種細(xì)菌產(chǎn)酸有顯著的抑制作用［29］。Xiao等研究了蜂房乙醇提取物，以及進(jìn)一步萃取和分離獲得的環(huán)己烷/乙酸乙酯(Chx/EtOAc)餾分、石油醚/乙酸乙酯(Pet/EtOAc)餾分和氯仿/甲醇(Chl/MeOH)餾分，對(duì)口腔微生物生長(zhǎng)和產(chǎn)酸性能的影響。結(jié)果顯示Chl/MeOH餾分的抗菌活性最高，最小抑菌濃度(MIC)為8～16 mg/mL，最小殺菌濃度(MBC)為16～32 mg/mL。此外，低于最小抑菌濃度(sub-MIC)的蜂房提取物和分離成分對(duì)常見口腔菌產(chǎn)酸具有顯著的抑制效果，Pet/EtOAc餾份對(duì)鏈鎖狀球菌突變體的產(chǎn)酸抑制作用最強(qiáng)［30］。他們?cè)诹硪黄撐闹袌?bào)道了其進(jìn)一步的深入研究—蜂房提取物及其化學(xué)成分對(duì)鏈鎖狀球菌突變株葡萄糖糖基轉(zhuǎn)移酶、黏著和生物被膜形成的影響，sub-MIC濃度的Chl/MeOH餾分可以顯著抑制鏈鎖狀球菌突變體對(duì)唾液包被羥基磷灰石盤的黏著，1 mg/mL濃度下抑制率即達(dá)到98.2%，說明蜂房的作用效果顯著高于目前已報(bào)道的自然產(chǎn)物。另外，sub-MIC濃度的蜂房提取液和分離化學(xué)成分顯著抑制細(xì)胞關(guān)聯(lián)和細(xì)胞外GTFs的活性，其中Chl/MeOH餾分的效果最佳。Chl/MeOH餾分還具有最強(qiáng)的抗生物被膜活性，其最小生物膜抑制濃度為8 mg/mL，最小生物膜減少濃度為 16 mg/mL［31］。

褚亞芳等研究發(fā)現(xiàn)，巢脾提取液具有一定的抑菌作用，其中對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用最顯著，存在濃度依賴效益—濃度越高抑菌活性越強(qiáng)。乙醇作為樣品溶劑時(shí)，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果不存在影響?？傮w上看，意蜂巢脾效果優(yōu)于中蜂巢脾;巢脾提取液對(duì)革蘭氏陽性細(xì)菌抑制作用優(yōu)于對(duì)革蘭氏陰性細(xì)菌的抑制作用［32］。

4 抗氧化活性

巢脾抗氧化活性的直接研究基本處于空白狀態(tài)，但是因?yàn)槠潼S酮含量較高—70%乙醇浸提液中黃酮含量達(dá)4.4～8.48 mg蘆丁當(dāng)量/g巢脾生藥量［33］，且其成分中的蜂膠、蜂王漿、蜂花粉、蜂蜜和蜂蛹等均是公認(rèn)的優(yōu)質(zhì)天然抗氧化產(chǎn)物，所以巢脾的抗氧化性能存在研究依據(jù)和價(jià)值。蜂王漿對(duì)超氧陰離子、羥基自由基、DPPH等自由基的清除能力，以及對(duì)脂質(zhì)抗氧化的抑制能力均很強(qiáng)，能夠有效保護(hù)心血管和肝腎等器官，減緩機(jī)體衰老，改善一些老年病癥狀。蜂王漿起抗氧化作用的有效成分主要包括:有機(jī)酸(10-HDA)、維生素、酶類、酚類化合物和礦物質(zhì)等多類物質(zhì)［34］。蜂花粉富含維生素C、維生素E、類胡蘿卜素和黃酮類化合物等抗氧化成分，且不同種類的蜂花粉對(duì)超氧陰離子、羥基自由基、DPPH等自由基具有不同程度的清除作用［35］。蜂蜜抗氧化作用相對(duì)較弱，酚酸類化合物是主要的功效成分之一［36］。蜂蛹黃酮在體內(nèi)外條件下均有抗氧化作用，張海生等研究表明蜂蛹黃酮對(duì)超氧陰離子、羥基自由基、烷氧基和烷過氧基均有明顯的抑制作用，且均呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系［37］;對(duì)四氧嘧啶所致亞急性衰老小鼠血液、肝臟和腦組織的超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化氫酶和單胺氧化酶活性的升高具有抑制作用，且能夠降低丙二醛的濃度［38］。蜂膠內(nèi)富含黃酮類化合物、咖啡酸酯類以及阿替匹林C等多種活性物質(zhì)，表現(xiàn)出較高的抗氧化活性及清除氧自由基能力，而蜂膠的抗氧化活性和其眾多作用機(jī)理均密切相關(guān)。

褚亞芳等以中蜂巢脾和意蜂巢脾為材料，采用水提法和醇提法處理，以DPPH·法測(cè)定巢脾提取液的自由基清除能力，并測(cè)定了巢脾提取液中的總酚含量。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同提取溶劑對(duì)巢脾的抗氧化活性和總酚得率具有不同影響，總體上講巢脾水提液清除DPPH自由基能力高于巢脾醇提液，且總酚含量更高。中蜂巢脾和意蜂巢脾抗氧化活性沒有顯著差異，但是其抗氧化活性成分可能存在差異。此外，巢脾DPPH自由基清除能力和總酚含量之間的正相關(guān)關(guān)系不高，說明巢脾的主要抗氧化活性成分除了總酚之外還有其它物質(zhì)［32］。

5 其它生物學(xué)活性

巢脾還具有降壓、鎮(zhèn)痛、降血脂等功效。朱俊彥等研究表明，10.0 g生藥量/kg(BW)的意蜂巢脾水提液對(duì)冰醋酸引起的小鼠扭體次數(shù)具有顯著抑制作用，2.0和4.0 g生藥量/kg(BW)的意蜂巢脾水提液也能顯著降低高脂血癥大鼠的血清總膽固醇，但是僅低劑量的意蜂巢脾水提液對(duì)血清甘油三酯具有顯著抑制作用［1］。

6 結(jié)語

我國是世界第一養(yǎng)蜂大國，養(yǎng)蜂生產(chǎn)淘汰下來的巢脾數(shù)量相當(dāng)可觀。因此，陳年巢脾的資源十分豐富，但利用率卻很低。目前國內(nèi)外有關(guān)蜂巢化學(xué)成分及生物學(xué)活性的深入系統(tǒng)研究很少。巢脾目前被認(rèn)同的功效也尚需現(xiàn)代科學(xué)的解釋或者支持。在眾多蜂產(chǎn)品得到大力開發(fā)并獲得快速發(fā)展的現(xiàn)狀下，巢脾卻尚未被合理的開發(fā)利用，這也許是一種天然藥物資源的浪費(fèi)。因此，我們應(yīng)該給予巢脾研究以更多的關(guān)注，探究巢脾更多的生物學(xué)活性，為巢脾在醫(yī)藥保健領(lǐng)域的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)，為巢脾的產(chǎn)業(yè)化開發(fā)提供技術(shù)保障。

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