王麗娟，王慶妍，王 勇，黎 蓉，謝梅彬

淫羊藿為小檗科多年生草本淫羊藿Epimedium brevicornum Maxim、箭 葉 淫 羊 藿 Epimedium Sagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim)等干燥地上部分。淫羊藿性味辛、甘、溫，有補(bǔ)腎陽、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕等功效，主要含有黃酮類物質(zhì)，是安神、健腦、補(bǔ)腎以及治療風(fēng)濕及腦疾病的首選藥材［1-2］。文獻(xiàn)報(bào)道，補(bǔ)陽藥鹿茸、右歸丸能顯著增強(qiáng)小鼠的學(xué)習(xí)記憶功能，對(duì)藥物引起的學(xué)習(xí)記憶障礙有改善作用［3-4］。補(bǔ)陽藥淫羊藿具有抗衰老作用［5］，而對(duì)學(xué)習(xí)記憶功能的影響未見報(bào)道。

本實(shí)驗(yàn)以東莨菪堿和乙醇制作學(xué)習(xí)記憶獲得障礙和記憶再現(xiàn)障礙模型，通過避暗法和迷津法研究炙淫羊藿提取物對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用。

1 材料

1.1 動(dòng)物

昆明種小鼠，體重17g～23g，雌雄兼用，由天津市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(合格證號(hào)為SCXK(津)2005-0001)。

1.2 主要藥品與試劑

炙淫羊藿飲片產(chǎn)地河南，購于天津老百姓大藥房;吡拉西坦由天津金世制藥有限公司生產(chǎn)(批號(hào)20071027);氫溴酸東莨菪堿由上海禾豐制藥有限公司生產(chǎn)(批號(hào)061101);無水乙醇由天津市華東試劑廠生產(chǎn)(批號(hào) 20061124)。

1.3 主要儀器

MG-2型迷津刺激器(張家港市生物醫(yī)學(xué)儀器廠)，ZH-500型小鼠避暗儀(安徽淮北正華生物儀器有限公司)，RE-2000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海市亞榮生化儀器廠)。

2 方法

2.1 淫羊藿提取物的制備

將炙淫羊藿生藥干燥后粉碎、稱重，分別加10倍量70%乙醇回流提取3次，每次40min，溫度40℃［6］。合并3次提取液，抽濾并濃縮至0.25g·ml－1并保存于冰箱。使用時(shí)用蒸餾水稀釋至所需濃度。

2.2 小鼠記憶獲得障礙模型制作及學(xué)習(xí)記憶能力測(cè)試方法

2.2.1 迷津法 選健康成年小鼠60只，體重19.8g±2.0g，雌雄各半，隨機(jī)分成5組，每組12只。1組為生理鹽水組，2組為模型組，3組為吡拉西坦組(0.5g·kg－1)，4 組為淫羊藿高劑量組(5.0g·kg－1)，5 組為淫羊藿低劑量組(3.5g·kg－1)。各組均灌胃給藥，容量為 10ml·kg－1，1組及 2組給等容量生理鹽水，每日1次，連續(xù)14d，于第13天給藥后1h開始訓(xùn)練。訓(xùn)練前10min 1組腹腔注射等容量生理鹽水，其余各組小鼠均腹腔注射氫溴酸東莨菪堿(1.5mg·kg－1)。訓(xùn)練時(shí)先將小鼠放于起步區(qū)適應(yīng)2min，然后通電(40V)，動(dòng)物受到電擊后直接逃至安全區(qū)為正確反應(yīng)，逃至電擊區(qū)為錯(cuò)誤反應(yīng)。如此訓(xùn)練15次，記錄正確反應(yīng)與錯(cuò)誤反應(yīng)次數(shù)。24h后進(jìn)行測(cè)試，觀察指標(biāo)及方法同訓(xùn)練時(shí)［7-8］。結(jié)果以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(珋x±s)表示，通過t檢驗(yàn)比較2組間差異的顯著性。

2.2.2 避暗法 選健康成年小鼠60只，體重20.0g±1.7g，雌雄各半，隨機(jī)分成5組，分組方法及給藥方法同2.2.1。于第13天給藥后1h開始訓(xùn)練，訓(xùn)練前10min 1組腹腔注射生理鹽水，其余各組均腹腔注射氫溴酸東莨菪堿(1.5mg·kg－1)。訓(xùn)練時(shí)先將小鼠放入避暗箱明室內(nèi)，小鼠進(jìn)入暗室受到電擊(40V)后逃至明室，此后會(huì)再次進(jìn)入暗室。適應(yīng)3min后將小鼠背向暗室放入明室同時(shí)記時(shí)，小鼠進(jìn)入暗室受到電擊視為錯(cuò)誤反應(yīng)。訓(xùn)練5min，記錄小鼠自放入明室至首次進(jìn)入暗室的時(shí)間(潛伏期)、5min內(nèi)錯(cuò)誤次數(shù)及累加遭受電擊的時(shí)間(錯(cuò)誤反應(yīng)時(shí)間)作為學(xué)習(xí)成績。24h后重新測(cè)試，將小鼠背向暗室放入明室同時(shí)記時(shí)，余方法同訓(xùn)練，記錄小鼠首次進(jìn)入暗室的潛伏期、5min內(nèi)錯(cuò)誤反應(yīng)次數(shù)及累加遭受電擊的時(shí)間作為記憶成績［7］。結(jié)果以均數(shù) ±標(biāo)準(zhǔn)差(珋x±s)表示，通過t檢驗(yàn)比較2組間差異的顯著性。

2.3 小鼠記憶再現(xiàn)障礙模型制作及學(xué)習(xí)記憶能力測(cè)試方法

2.3.1 迷津法 選健康成年小鼠70只，體重20.2g±1.6g，雌雄各半，隨機(jī)分成5組。分組方法及給藥方法同2.2.1。于第13天給藥后1h開始訓(xùn)練，24h后進(jìn)行測(cè)試。測(cè)試前15min 1組灌胃生理鹽水，其余各組小鼠均灌胃35%乙醇，容量為10ml·kg－1，造成動(dòng)物記憶再現(xiàn)障礙。測(cè)試方法及數(shù)據(jù)處理方法同2.2.1。

2.3.2 避暗法 選健康成年小鼠70只，體重20.0g±1.6g，雌雄各半，隨機(jī)分成5組，分組方法及給藥方法同2.2.1。于第13天給藥后1h開始訓(xùn)練，訓(xùn)練方法及觀察指標(biāo)同2.2.2，24h后進(jìn)行測(cè)試。測(cè)試前15min 1組灌胃生理鹽水，其余各組小鼠均灌胃35%乙醇，容量為10ml·kg－1，造成動(dòng)物記憶再現(xiàn)障礙，測(cè)試方法及數(shù)據(jù)處理方法同2.2.2。結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(珋x±s)表示，通過t檢驗(yàn)比較2組間差異的顯著性。記憶能力。

表1 迷津法觀察淫羊藿對(duì)東莨菪堿所致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用(珔x±s，n=12)

3 結(jié)果

3.1 淫羊藿對(duì)東莨菪堿致記憶獲得障礙小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響

3.1.1 迷津法 表1顯示，用東莨菪堿致小鼠記憶獲得障礙，采用迷津法訓(xùn)練和測(cè)試小鼠的學(xué)習(xí)

結(jié)果顯示，東莨菪堿能使小鼠(模型組)的學(xué)習(xí)成績和記憶成績明顯降低，與生理鹽水組比較，差異非常顯著(P＜0.01)。淫羊藿和吡拉西坦能明顯減少小鼠錯(cuò)誤反應(yīng)次數(shù)，改善小鼠由東莨菪堿所致的學(xué)習(xí)及記憶獲得障礙，與模型組比較，差異極顯著(P ＜0.01)。

3.1.2 避暗法 表2顯示，用東莨菪堿致小鼠記憶獲得障礙，采用避暗法訓(xùn)練和測(cè)試小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。

表2 避暗法觀察淫羊藿對(duì)東莨菪堿所致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用(珔x±s，n=12)

結(jié)果顯示，模型組小鼠的學(xué)習(xí)記憶成績較生理鹽水組明顯降低(P＜0.01)，即潛伏期明顯縮短，錯(cuò)誤次數(shù)明顯增多，累加電擊時(shí)間明顯延長;測(cè)試成績略好于訓(xùn)練成績，但與生理鹽水組比較，各項(xiàng)指標(biāo)差異仍非常顯著(P＜0.01)。而淫羊藿和吡拉西坦能明顯延長小鼠的潛伏期，減少錯(cuò)誤反應(yīng)的次數(shù)，縮短累加電擊時(shí)間，與模型組比較各指標(biāo)差異顯著(均P＜0.05)。

學(xué)習(xí)記憶能力的影響(珔x ± s，n=14)

3.2 淫羊藿對(duì)乙醇所致記憶再現(xiàn)障礙小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響

3.2.1 迷津法 表3顯示，采用迷津法觀察淫羊藿對(duì)乙醇所致的記憶再現(xiàn)障礙小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響。

結(jié)果顯示，35%乙醇能增加小鼠測(cè)試時(shí)錯(cuò)誤反應(yīng)次數(shù)。吡拉西坦和淫羊藿均能減輕這種損傷，使學(xué)習(xí)能力有所增強(qiáng)，記憶再現(xiàn)障礙得到改善。

3.2.2 避暗法 表4顯示，采用避暗法觀察淫羊藿對(duì)乙醇所致記憶再現(xiàn)障礙小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響。

結(jié)果顯示，模型組小鼠測(cè)試時(shí)的潛伏期明顯縮短(P＜0.01)，觸電時(shí)間明顯延長(P＜0.01)，錯(cuò)誤次數(shù)明顯增加(P＜0.01)。淫羊藿能明顯延長小鼠進(jìn)入暗室的潛伏期，減少錯(cuò)誤反應(yīng)次數(shù)，縮短遭受電擊的時(shí)間，測(cè)試時(shí)表現(xiàn)更明顯(與模型組比較，均 P＜0.05)，且作用略優(yōu)于吡拉西坦。

表4 淫羊藿對(duì)乙醇所致記憶再現(xiàn)障礙小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響(珔x±s，n=14)

4 討論

學(xué)習(xí)和記憶是兩個(gè)相互聯(lián)系的神經(jīng)活動(dòng)過程，是人類認(rèn)識(shí)和感知世界的主要手段。許多疾病，尤其是神經(jīng)系統(tǒng)的病變可導(dǎo)致學(xué)習(xí)記憶功能減退。改善學(xué)習(xí)記憶功能對(duì)于延緩衰老，提高記憶衰退患者的生活質(zhì)量，減輕家庭和社會(huì)的負(fù)擔(dān)無疑將起到積極的作用。

學(xué)習(xí)和記憶是一個(gè)極其復(fù)雜的生理生化過程，其影響因素很多。首先，中樞遞質(zhì)與學(xué)習(xí)記憶活動(dòng)有關(guān)，擬膽堿藥可加強(qiáng)記憶活動(dòng)，而抗膽堿藥東莨菪堿則能使學(xué)習(xí)記憶功能減退。其次，中樞神經(jīng)系統(tǒng)的基本功能——興奮與抑制是影響學(xué)習(xí)記憶的一個(gè)重要因素。中樞的過度抑制會(huì)使學(xué)習(xí)記憶能力下降，高濃度乙醇會(huì)作用于大腦及小腦，抑制中樞產(chǎn)生近記憶力喪失、時(shí)空定向力障礙、共濟(jì)失調(diào)等［7］。

該實(shí)驗(yàn)采用東莨菪堿和乙醇分別造成小鼠學(xué)習(xí)記憶獲得障礙和記憶再現(xiàn)障礙，增加動(dòng)物的錯(cuò)誤反應(yīng)次數(shù)及延長反應(yīng)時(shí)間。吡拉西坦是促思維記憶藥，常用于腦血管疾病和神經(jīng)外科手術(shù)后等。實(shí)驗(yàn)中比較了淫羊藿與吡拉西坦對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響。結(jié)果表明，淫羊藿對(duì)東莨菪堿及乙醇所致的學(xué)習(xí)及記憶障礙均有明顯的改善作用，其效果與吡拉西坦相近或略佳。淫羊藿改善學(xué)習(xí)記憶能力的作用可能與其活血化瘀和改善腦組織的血液供給有關(guān)，其確切作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

［1］ 國家藥典委員會(huì).中國藥典［S］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:229.

［2］ 蘇家輝.淫羊藿藥材資源與質(zhì)量考察研究［J］.中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育，2010，8(17):86-87.

［3］ 王曉麗，張大方.鹿茸提取物對(duì)東莨菪堿及亞硝酸鈉所致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的影響［J］.長春中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，21(4):37-38.

［4］ 戴薇薇，金國琴，張學(xué)禮，等.左歸丸、右歸丸對(duì)衰老大鼠海馬學(xué)習(xí)記憶相關(guān)基因BDNF mRNA表達(dá)的影響［J］.中藥藥理與臨床，2007，23(4):14-16.

［5］ 沈映君.中藥藥理學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2002:906-907.

［6］ 朱春林，高素琴.淫羊藿提取工藝優(yōu)選［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2001，12(8):687.

［7］ 徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.3版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2003:827.-829.

［8］ 王麗娟，王亞麗，李蓓，等.獨(dú)一味對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2009，20(7):1761-1762.