陳 喆 ，楊 健，鐘 霞，張 健,2，吳正云，張文學(xué),3 *，伍學(xué)明,4，徐 義，楊 莉

（1.四川大學(xué) 輕紡與食品學(xué)院，四川 成都 610065；2.宜賓學(xué)院生命科學(xué)與食品工程學(xué)院，四川 宜賓 644005；3.四川大學(xué) 錦江學(xué)院白酒學(xué)院，四川 眉山 620860；4.四川省調(diào)味品添加劑工程技術(shù)研究中心，四川 眉山 620010）

白酒丟糟是固態(tài)法生產(chǎn)白酒的主要副產(chǎn)物[1]，粗略推算我國年產(chǎn)白酒丟糟達(dá)2400萬t。大量丟糟如果不及時(shí)處理，就會(huì)腐敗變質(zhì)，不僅浪費(fèi)寶貴資源，還會(huì)嚴(yán)重污染環(huán)境[2-3]。白酒丟糟富含淀粉、纖維素和半纖維素等碳水化合物，據(jù)估計(jì)，如果利用白酒丟糟生產(chǎn)燃料酒精，白酒行業(yè)每年可增加產(chǎn)值90億元～150億元[4]。

由于白酒丟糟結(jié)構(gòu)復(fù)雜很難被降解，為提高酶水解效率首先要進(jìn)行預(yù)處理。ZHAOX B等[5]用纖維素酶和β-葡萄糖苷酶糖化經(jīng)NaOH-過氧乙酸預(yù)處理的甘蔗渣，證明NaOH-過氧乙酸預(yù)處理是較合適的預(yù)處理方法。與其他預(yù)處理方法相比，NaOH-過氧乙酸預(yù)處理?xiàng)l件溫和、工藝簡單，且能將物料中的纖維素、半纖維素和木質(zhì)素有效分離，產(chǎn)生較少抑制物[6-7]。

纖維素酶的主要組分是葡萄糖內(nèi)切酶、葡萄糖外切酶和β-葡萄糖苷酶。只有當(dāng)這3個(gè)主要組分的活性比例適當(dāng)時(shí)，才能協(xié)同完成對纖維素的高效降解[8-9]。如果再添加β-葡萄糖苷酶，會(huì)顯著提高纖維素酶糖化效率[10-11]。而完全降解半纖維素需要半纖維素酶和木聚糖水解酶系協(xié)同完成[12]。半纖維素被木聚糖酶水解后，可降低物料對纖維素酶的無效吸附，提高單糖產(chǎn)率。且阿拉伯糖酶、果膠酶及淀粉酶等酶能有效降解阿拉伯糖、果膠及淀粉等多糖，提高酶水解液可發(fā)酵糖濃度。ZHOU J等[13]將7種純化酶用于糖化經(jīng)蒸汽爆破預(yù)處理的玉米秸稈，所得水解液葡萄糖含量15.5g/L，是單用纖維素酶糖化的2.1倍。TABKA MG等[14-18]也對多酶復(fù)配做了大量的研究。

目前，國內(nèi)外對生物質(zhì)材料生產(chǎn)燃料酒精的研究多集中在不同預(yù)處理方法對單酶糖化效果的影響上，而對多酶復(fù)配糖化效果的研究少見報(bào)道。在本研究中，以NaOH-過氧乙酸預(yù)處理的白酒丟糟為原料，探討了6種酶復(fù)配糖化的工藝，為進(jìn)一步利用生物質(zhì)材料降解糖制備燃料酒精、食用酒精、食用冰醋酸以及焦糖色的工藝提供了重要參考。

1 材料與方法

1.1 材料

白酒鮮丟糟（水分含量65%，冷凍保存，使用前置于105℃烘箱干燥12h）四川水井坊股份有限公司，水分6.49%、灰分12.61%、熱水抽提物12.63%、1%NaOH抽提物21.24%、苯-乙醇抽提物7.74%、酸溶性木素5.84%、綜纖維素60.05%、纖維素32.03%、半纖維素19.21%、木質(zhì)素18.61%；

纖維素酶NS22086（FPU酶活為25.47IU/mL）、β-葡萄糖苷酶NS22118（酶活為15.12IU/mL）、木聚糖酶NS22083（酶活為17.08IU/mL）、葡糖淀粉酶NS22035（酶活為11.54IU/mL）、復(fù)合酶NS22119（其中主要的β-葡萄糖苷酶酶活為6.77IU/mL）和復(fù)合酶NS22002（其中主要的β-葡萄糖苷酶酶活為3.63IU/mL，木聚糖酶酶活為3.14IU/mL）諾維信天津分公司；

葡萄糖試劑盒：長春匯力生物技術(shù)有限公司；木糖、間苯三酚、氫氧化鈉、過氧乙酸等均為國產(chǎn)分析純。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 NaOH-過氧乙酸預(yù)處理

將100g白酒干丟糟和2%NaOH以固液比1:10（w:v）混合均勻，于85℃水浴90min，濾渣用溫水洗至中性，于60℃烘至恒重，稱重；再將100g處理過丟糟和6%過氧乙酸以固液比1:5（w:v）混合均勻，于75℃處理90min，濾渣用溫水洗至中性，于60℃烘至恒重備用。

1.2.2 白酒丟糟酶解的單因素試驗(yàn)

采用經(jīng)預(yù)處理后干燥的白酒丟糟為底物，對酶解底物濃度及6種酶（以纖維素酶NS22086為主，補(bǔ)充β-葡萄糖苷酶NS22118、木聚糖酶NS22083、復(fù)合酶NS22119、復(fù)合酶NS22002和葡糖淀粉酶NS22035）添加量分別采用單因素試驗(yàn)法進(jìn)行探討。其中復(fù)合酶NS22119包括β-葡萄糖苷酶、阿拉伯糖酶、木聚糖酶、纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶和木糖酶；復(fù)合酶NS22002主要包括木聚糖酶和β-葡萄糖苷酶，附加纖維素酶、半纖維素酶和己糖酶。

在試驗(yàn)中，用檸檬酸緩沖液（pH4.8～5.0）調(diào)節(jié)底物濃度，添加2%疊氮化鈉1mL，于50℃、120r/min的搖床糖化48h，離心得上清液。將上清液稀釋一定倍數(shù)后，測定酶解液總糖、葡萄糖和木糖濃度及產(chǎn)率，并以此作為實(shí)驗(yàn)結(jié)果評價(jià)指標(biāo)，確定各種酶對多酶糖化過程的貢獻(xiàn)程度。試驗(yàn)結(jié)果的差異顯著性分析采用F檢驗(yàn)。

1.2.3 添加不同酶酶解白酒丟糟試驗(yàn)

采用經(jīng)預(yù)處理后干燥的白酒丟糟為底物，添加檸檬酸緩沖液（pH4.8～5.0）調(diào)節(jié)底物濃度14%（w/v），在添加1mL 2%疊氮化鈉的基礎(chǔ)上，分別添加A-0.20mL/g NS22086；B-0.20mL/g NS22086和0.10mL/g NS22118；C-0.20mL/g NS22086、0.10mL/g NS22118和0.02mL/g NS22083；D-0.20mL/g NS22086、0.10mL/g NS22118、0.02mL/g NS22083和 0.04mL/g NS22119；E-0.20mL/g NS22086、0.10mL/g NS22118、0.02mL/g NS22083、0.04mL/g NS22119 和0.04mL/gNS22002；F-0.20mL/gNS22086、0.10mL/gNS22118、0.02mL/g NS22083、0.04mL/g NS22119、0.04mL/g NS22002和0.02mL/g NS22035。于50℃、120r/min的搖床糖化48h，離心得上清液。將上清液稀釋一定倍數(shù)后，測定酶解液總糖、葡萄糖、木糖濃度及產(chǎn)率，并以此作為實(shí)驗(yàn)結(jié)果評價(jià)指標(biāo)。

1.2.4 分析方法

原料及NaOH-過氧乙酸預(yù)處理后的固體成分分析：水分、灰分、熱水抽出物、1%NaOH抽提物、有機(jī)溶劑抽提物、酸不溶木素、綜纖維素測定分別按GB/T 2677.2-93、GB/T 2677.3-93、GB/T 2677.4-93、GB/T 2677.5-93、GB/T 2677.6-94、GB/T 2677.8-94、GB/T 2677.10-95進(jìn)行；纖維素、半纖維素和木質(zhì)素的分析參照NREL法測定[19]。

酶解液分析：酶解液中總糖采用DNS法測定[20]；葡萄糖采用試劑盒法；木糖采用間苯三酚法測定[21]。酶解液中總糖（以還原糖計(jì)）、葡萄糖及木糖產(chǎn)率計(jì)算：

式中：y 為酶解液中總糖、葡萄糖或木糖產(chǎn)率，mg/g；m 為酶解液中總糖、葡萄糖或木糖質(zhì)量，g；0.9為修正系數(shù)；w 為經(jīng)NaOH-過氧乙酸預(yù)處理白酒丟糟干重，g。

每組試驗(yàn)做3次重復(fù)，以平均值作為分析數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 白酒丟糟預(yù)處理

附表 原料及預(yù)處理后白酒丟糟的化學(xué)組成Attached table Chemical composition of raw and pretreated spent grains of China spirits

白酒丟糟經(jīng)NaOH-過氧乙酸預(yù)處理后化學(xué)組成發(fā)生了較大變化。由附表可以看出，預(yù)處理后100g白酒丟糟可得63.55g固體產(chǎn)物。纖維素及半纖維素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為48.47%、19.99%，而木質(zhì)素質(zhì)量分?jǐn)?shù)僅為8.23%。與未處理的原料相比，只有極少的纖維素發(fā)生了水解，絕大部分纖維素保留在固體中，纖維素回收率達(dá)到96.20%；小部分半纖維素被溶解，大部分半纖維素保留在固體中，半纖維素回收率達(dá)到66.10%；而絕大部分木質(zhì)素被溶解或分解在NaOH-過氧乙酸預(yù)處理液中，木質(zhì)素的去除率為71.90%。試驗(yàn)結(jié)果表明，NaOH-過氧乙酸預(yù)處理有效地解除了白酒丟糟中木質(zhì)素對纖維素及半纖維素的束縛，為纖維素及半纖維素進(jìn)一步酶解創(chuàng)造了有利條件。

2.2 酶解白酒丟糟

2.2.1 底物濃度對酶解白酒丟糟的影響

改變底物濃度6%、8%、10%、12%、14%、16%（預(yù)處理后干白酒丟糟（w/v），下同），添加0.1mL/g纖維素酶NS22086，進(jìn)行白酒丟糟酶解試驗(yàn)，結(jié)果見圖1。

由圖1可以看出，酶解液中總糖、葡萄糖及木糖濃度隨底物濃度的增加，呈現(xiàn)逐漸提高的趨勢；當(dāng)?shù)孜餄舛葹?4%時(shí)，酶解液中總糖、葡萄糖和木糖濃度分別達(dá)到25.43g/L、11.22g/L和10.03g/L；當(dāng)?shù)孜餄舛却笥?4%時(shí)，酶解液中總糖、葡萄糖及木糖濃度幾乎未增加。CARA C等[22]利用纖維素酶糖化經(jīng)蒸汽處理的甘蔗渣獲得了類似的結(jié)果。為了提高酶解液中可發(fā)酵糖濃度，需要增加底物濃度。但是底物濃度過高導(dǎo)致酶解過程攪拌困難和酶解抑制劑濃度較高[23]。對該因素進(jìn)行方差分析，其p<0.05，說明底物濃度對酶解白酒丟糟有顯著影響。

圖1 底物濃度對酶解白酒丟糟效果的影響Fig.1 Influence of substrate concentration on the enzyme hydrolyzation of spent grains of China spirits

2.2.2 纖維素酶NS22086添加量對酶解白酒丟糟的影響

底物濃度14%，分別添加0.05mL/g、0.10mL/g、0.15mL/g、0.20mL/g、0.30mL/g纖維素酶NS22086進(jìn)行丟糟酶解試驗(yàn)，結(jié)果見圖2。

圖2 NS22086添加量對酶解白酒丟糟效果的影響Fig.2 Influence of NS22086 loading on the enzyme hydrolyzation of spent grains of China spirits

由圖2可以看出，隨著NS22086添加量的增加，酶解液中總糖、葡萄糖和木糖濃度，呈現(xiàn)漸增的趨勢。當(dāng)NS22086添加的量為0.20mL/g時(shí)，酶解液中總糖、葡萄糖及木糖濃度達(dá)到41.33g/L、26.43g/L和11.95g/L；當(dāng)NS22086添加量大于0.20mL/g時(shí)，酶解液中總糖、葡萄糖及木糖濃度增加不多。對該因素進(jìn)行方差分析，其p<0.01，說明NS22086添加量對酶解白酒丟糟有極顯著影響。

另外計(jì)算結(jié)果表明，酶解液中葡萄糖與木糖濃度之和低于總糖濃度，由此推測糖化水解液中還存在寡糖（如纖維二糖等）。這與ZHAOX B等[5]用纖維素酶和β-葡萄糖苷酶糖化經(jīng)NaOH-過氧乙酸預(yù)處理的甘蔗渣的試驗(yàn)結(jié)果類似。因此，在后續(xù)試驗(yàn)中補(bǔ)充β-葡萄糖苷酶進(jìn)一步水解纖維二糖等寡糖，并消除寡糖對酶解過程的抑制。

2.2.3 β-葡萄糖苷酶NS22118添加量對酶解白酒丟糟的影響

底物濃度14%，在添加0.20mL/g纖維素酶NS22086基礎(chǔ)上，分別添加0.01mL/g、0.05mL/g、0.10mL/g、0.15mL/g、0.20mL/gβ-葡萄糖苷酶NS22118進(jìn)行白酒丟糟酶解試驗(yàn)，結(jié)果見圖3。

圖3 NS22118添加量對酶解白酒丟糟效果的影響Fig.3 Influence of NS22118 loading on the enzyme hydrolyzation of spent grains of China spirits

由圖3可以看出，由于纖維二糖等寡糖是纖維素酶水解過程主要抑制物[10-11]，與單獨(dú)添加NS22086的酶解液相比，隨著NS22118添加量的增加，酶解液中總糖和葡萄糖濃度，呈現(xiàn)漸增的趨勢；當(dāng)NS22118添加量為0.10mL/g時(shí)，酶解液中總糖和葡萄糖濃度分別達(dá)到70.16g/L、40.32g/L，而木糖濃度幾乎未增加；當(dāng)NS22118添加量大于0.10mL/g時(shí)，酶解液中總糖、葡萄糖及木糖濃度不再增加。對該因素進(jìn)行方差分析，其p<0.01，說明NS22118添加量對酶解白酒丟糟有極顯著影響。

2.2.4 木聚糖酶NS22083添加量對酶解白酒丟糟的影響

完全降解半纖維素需要半纖維素酶和木聚糖水解酶系協(xié)同完成[12]。半纖維素被木聚糖酶水解后，可降低物料對纖維素酶的無效吸附，提高單糖產(chǎn)率。因此，底物濃度14%，在添加0.20mL/g纖維素酶NS22086及0.10mL/gβ-葡萄糖苷酶NS22118基礎(chǔ)上，分別添加0.01mL/g、0.02mL/g、0.04mL/g、0.08mL/g、0.16mL/g木聚糖酶NS22083進(jìn)行白酒丟糟酶解試驗(yàn)，結(jié)果見圖4。

圖4 NS22083添加量對酶解白酒丟糟效果的影響Fig.4 Influence of NS22083 loading on the enzyme hydrolyzation of spent grains of China spirits

由圖4可以看出，隨著NS22083添加量的增加，酶解液中總糖、葡萄糖及木糖濃度，呈現(xiàn)漸增的趨勢；當(dāng)NS22083添加量為0.02mL/g時(shí)，酶解液中總糖、葡萄糖和木糖濃度分別達(dá)到96.54g/L、51.21g/L和16.87g/L；當(dāng)NS22118添加量大于0.02mL/g時(shí)，酶解液中總糖、葡萄糖及木糖濃度幾乎不再增加。

與添加NS22086和NS22118的酶解液相比，當(dāng)再補(bǔ)充0.02mL/g的NS22083時(shí)，酶解液中總糖、葡萄糖及木糖濃度分別從70.22g/L、40.54g/L和11.35g/L上升至96.54g/L、51.21g/L和16.87g/L。NS22083有效減少了半纖維素對纖維素酶水解的阻礙作用，提高水解過程纖維素的轉(zhuǎn)化率。對該因素進(jìn)行方差分析，其p<0.01，說明NS22083添加量對酶解白酒丟糟有極顯著影響。

2.2.5 復(fù)合酶NS22119添加量對酶解白酒丟糟的影響

底物濃度14%，在添加0.20mL/g纖維素酶NS22086、0.10mL/gβ-葡萄糖苷酶NS22118及0.02mL/g木聚糖酶NS22083的基礎(chǔ)上，分別添加0.01mL/g、0.02mL/g、0.04mL/g、0.08mL/g、0.16mL/g復(fù)合酶NS22119進(jìn)行白酒丟糟酶解試驗(yàn)，結(jié)果見圖5。

圖5 NS22119添加量對酶解白酒丟糟效果的影響Fig.5 Influence of NS22119 loading on the enzyme hydrolyzation of spent grains of China spirits

由圖5可以看出，隨著NS22119添加量的增加，酶解液中總糖、葡萄糖及木糖濃度，呈現(xiàn)漸增的趨勢；當(dāng)NS22119添加量為0.04mL/g時(shí)，酶解液中總糖、葡萄糖和木糖濃度分別達(dá)到101.85g/L、54.68g/L和17.11g/L；當(dāng)NS22119添加量大于0.04mL/g時(shí)，酶解液中總糖、葡萄糖及木糖濃度不再增加。

與添加NS22086、NS22118和NS22083的酶解液相比，當(dāng)補(bǔ)充0.04mL/g的NS22119時(shí)，酶解液中總糖、葡萄糖和木糖濃度分別從96.01g/L、51.21g/L和16.33g/L上升至101.85g/L、54.68g/L和17.11g/L。補(bǔ)充NS22119能有效提高酶解液中可發(fā)酵糖濃度。對該因素進(jìn)行方差分析，其p<0.05，說明NS22119添加量對酶解白酒丟糟有顯著影響。

2.2.6 復(fù)合酶NS22002添加量對酶解白酒丟糟的影響

底物濃度14%，在添加0.20mL/g纖維素酶NS22086、0.10mL/gβ-葡萄糖苷酶NS22118、0.02mL/g木聚糖酶NS 22083、0.04mL/g復(fù)合酶NS22119基礎(chǔ)上，分別添加0.01mL/g、0.02mL/g、0.04mL/g、0.08mL/g、0.16mL/g復(fù)合酶NS22002進(jìn)行白酒丟糟酶解試驗(yàn)，結(jié)果見圖6。

圖6 NS22002添加量對酶解白酒丟糟效果的影響Fig.6 Influence of NS22002 loading on the enzyme hydrolyzation of spent grains of China spirits

由圖6可以看出，隨著NS22002添加量的增加，酶解液中總糖、葡萄糖及木糖濃度，呈現(xiàn)逐漸增大的趨勢；當(dāng)NS22002添加量為0.04mL/g時(shí)，酶解液中總糖、葡萄糖和木糖濃度分別從達(dá)到106.44g/L、56.73g/L和15.89g/L；當(dāng)NS22002添加量大于0.04mL/g時(shí)，酶解液中總糖、葡萄糖、木糖濃度不再提高。

與未添加NS22002的酶解液相比，當(dāng)補(bǔ)充0.04mL/g的NS22002時(shí)，酶解液中總糖、葡萄糖和木糖濃度分別從101.85g/L、54.68g/L和17.11g/L上升至106.44g/L、56.73g/L和15.89g/L。補(bǔ)充NS22002有效提高酶糖化水解液可發(fā)酵糖濃度。對該因素進(jìn)行方差分析，其p<0.05，說明NS22002添加量對酶解白酒丟糟有顯著影響。

2.2.7 葡糖淀粉酶NS22035添加量對酶解白酒丟糟的影響

圖7 NS22035添加量對酶解白酒丟糟效果的影響Fig.7 Influence of NS22035 loading on the enzyme hydrolyzation of spent grains of China spirits

底物濃度14%，在添加0.20mL/g纖維素酶NS22086、0.10mL/gβ-葡萄糖苷酶NS22118、0.02mL/g木聚 糖酶NS22083、0.04mL/g復(fù)合酶NS22119及0.04mL/g復(fù)合酶NS22002基礎(chǔ)上，分別添加0.01mL/g、0.02mL/g、0.04mL/g、0.08mL/g、0.16mL/g葡糖淀粉酶NS22035進(jìn)行白酒丟糟酶解試驗(yàn)，結(jié)果見圖7。

由圖7可以看出，隨著NS22035添加量的增加，酶解液中總糖、葡萄糖及木糖濃度，呈現(xiàn)略有增大的趨勢，但其濃度沒有顯著提高；當(dāng)NS22035添加量為0.02mL/g時(shí)，酶解液中總糖、葡萄糖和木糖濃度分別達(dá)到107.30g/L、57.44g/L和16.53g/L；當(dāng)NS22035添加量大于0.02mL/g時(shí)，酶解液中總糖、葡萄糖及木糖濃度不再增加。因NaOH-過氧乙酸預(yù)處理會(huì)除去白酒丟糟中部分淀粉成分或因NS22086、NS22119、NS22118等酶會(huì)與NS22035爭奪接觸原料的機(jī)會(huì)，補(bǔ)充NS22035對酶解液總糖、葡萄糖及木糖濃度沒有顯著的提高。對該因素進(jìn)行方差分析，其p>0.05，說明NS22035添加量對酶解白酒丟糟沒有顯著影響。

2.3 添加不同酶對酶解白酒丟糟的影響

圖8 添加不同酶對酶解白酒丟糟效果的影響Fig.8 Influence of multi-enzyme complex on the enzyme hydrolyzation of spent grains of China spirits

由圖8可以看出，添加0.10mL/gβ-葡萄糖苷酶NS22118，酶解液中總糖、葡萄糖濃度分別從41.33g/L、26.43g/L上升至70.16g/L、40.32g/L，木糖濃度變化較小；再添加0.02mL/g木聚糖酶NS22083后，酶解液中總糖、葡萄糖和木糖濃度均有較大提高，其濃度分別從70.16g/L、40.32g/L和11.65g/L上升至96.77g/L、51.42g/L和16.33g/L；再依次添加0.04mL/g復(fù)合酶NS22119、0.04mL/g復(fù)合酶NS22002和0.02mL/g葡糖淀粉酶NS22035后，酶解液中總糖、葡萄糖和木糖濃度均有不同程度提高，但增幅較小，這是由于復(fù)合酶中阿拉伯糖酶、果膠酶及淀粉酶等酶能有效降解物料中的阿拉伯糖、果膠及淀粉等多糖，以致總糖濃度有所提高，但復(fù)合酶與原料接觸降低了纖維素酶、木聚糖酶和β-葡萄糖苷酶與原料接觸的機(jī)會(huì)。

同 時(shí) 添 加0.20mL/g NS22086、0.10mL/g NS22118、0.02mL/g NS22083、0.04mL/g NS22119、0.04mL/g NS22002和0.02mL/g的NS22035 6種酶，酶解液中總糖、葡萄糖及木糖濃度均達(dá)到較好水平，酶解液中總糖、葡萄糖和木糖濃度分別達(dá)到107.30g/L、57.44g/L和16.53g/L，對應(yīng)糖產(chǎn)率分別為659.13mg/g、317.22mg/g和96.01mg/g。這與ZHOU J等[13]將7種純化酶用于糖化經(jīng)蒸汽爆破預(yù)處理的玉米秸稈相比，所得水解液葡萄糖濃度（57.44g/L）將近其酶解液葡萄糖濃度（15.5g/L）的3.5倍；且與TABKA MG等[14-18]對多酶復(fù)配做了大量的研究的試驗(yàn)結(jié)果略優(yōu)。

3 結(jié)論

（1）白酒丟糟經(jīng)NaOH-過氧乙酸預(yù)處理（2%NaOH，固液比1:10（w:v），85℃、90min；6%過氧乙酸，固液比1:5（w:v），75℃、90min），固體中96.20%纖維素被保留，71.90%木質(zhì)素被去除。這有效地解除了木質(zhì)素對纖維素及半纖維素的束縛，為進(jìn)一步高效酶解創(chuàng)造了有利條件。

（2）多酶復(fù)配糖化經(jīng)NaOH-過氧乙酸預(yù)處理的白酒丟糟，其糖化效果比單一纖維素酶糖化效果好。在添加纖維素酶NS22086的基礎(chǔ)上，補(bǔ)充β-葡萄糖苷酶NS22118或木聚糖酶NS22083時(shí)，酶解液中可發(fā)酵糖濃度均有顯著提高；進(jìn)一步補(bǔ)充復(fù)合酶NS22119或復(fù)合酶NS22002時(shí)，酶解液中可發(fā)酵糖濃度均有不同程度提高；補(bǔ)充葡萄糖淀粉酶NS22035時(shí)，效果不明顯。

（3）底物濃度14%（w/v），在添加0.20mL/g纖維素酶NS22086的基礎(chǔ)上，補(bǔ)充0.10mL/gβ-葡萄糖苷酶NS22118、0.02mL/g木聚糖酶NS22083、0.04mL/g復(fù)合酶NS22119、0.04mL/g復(fù)合酶NS22002及0.02mL/g葡萄糖淀粉酶NS22035，經(jīng)48h糖化水解，得到酶解液中總糖（以還原糖計(jì)）、葡萄糖和木糖濃度分別為107.30g/L、57.44g/L和16.53g/L，酶解液中總糖、葡萄糖和木糖產(chǎn)率分別為659.13mg/g、317.22mg/g和96.01mg/g（預(yù)處理后干丟糟）。

（4）從白酒廠可持續(xù)發(fā)展出發(fā)，還需進(jìn)一步對多酶復(fù)配糖化白酒丟糟工藝進(jìn)行系統(tǒng)優(yōu)化研究，以降低生產(chǎn)成本。

[1]秦廣利，郭坤亮，汪 強(qiáng)，等.纖維素酶對白酒酒糟資源化利用研究[J].釀酒科技，2009（4）：34-35.

[2]楊 健，張 健，張文學(xué)，等.蒸汽與液氨爆破對白酒丟糟稀硫酸降解工藝的影響研究[J].中國釀造，2012，31（1）：68-71.

[3]王文宗，李 恒，張文學(xué)，等.新型麩曲釀酒發(fā)酵的實(shí)用化研究[J].釀酒科技，2009（8）：80-82.

[4]劉躍紅，張文學(xué)，譚 力，等.濃硫酸降解白酒丟糟制備降解糖液的條件研究[J].中國釀造，2011，30（1）：82-85.

[5]ZHAO Xuebing,SONG Yuanquan,LIU Dehua.Enzymatic hydrolysis and simultaneous saccharification and fermentation of alkali/peracetic acid-pretreated sugarcanebagassefor ethanol and 2,3-butanediol production[J].Enzyme Microb Technol,2011,49:413-419.

[6]ZHAO Xuebing,PENG Feng,CHENG Keke,et al.Enhancement of the enzymatic digestibility of sugarcane bagasse by alkali-peracetic acid pretreatment[J].Enzyme Microb Technol,2009,44(1):17-23.

[7]TEIXEIRA LC,LINDEN JC,SCHROEDERHA.Alkaline and peracetic acid pretreatments of biomass for ethanol production[J].Appl Biochem Biotechnol,1999,78:19-34.

[8]杜文娟，王家東，侯紅萍.纖維素酶的制備及其應(yīng)用研究[J].釀酒，2007（3）：60-62.

[9]DESWAL D,KHASA YP,KUHAD RC.Optimization of cellulase production by a brown rot fungus Fomitopsis sp.RCK2010 under solid state fermentation[J].Bioresource Technol,2011,102(10):6065-6072.

[10]馮 月，蔣建新，朱莉偉，等.纖維素酶活力及混合纖維素酶協(xié)同作用的研究[J].北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2009（S1）：169-173.

[11]王璀璨，王義強(qiáng)，李 輝，等.混合纖維素酶對楊木酶解的研究[J].可再生能源，2010（6）：57-62

[12]BAJPAIP.Microbial xylanolytic enzyme system:properties and applications[J].Adv Appl Microbiol,1997,43:141-194.

[13]ZHOUJin,WANGYonghong,CHU Ju,et al.Optimization of cellulase mixturefor efficient hydrolysisof steam-explodedcorn stover by statistically designed experiments[J].Bioresource Technol,2009,100:819-825.

[14]TABKA MG,HERPOEL-GIMBERT F,MONOD M,et al.Enzymatic saccharification of wheat straw for bioethanol production by a combined cellulose xylanase and feruloyl esterase treatment[J].Enzyme Microb Technol,2006,39:897-902.

[15]RUFFELL J,LEVIEB,HELLES,et al.Pretreatment and enzymatic hydrolysisof recovered fibrefor ethanol production[J].Bioresource Technol,2010,101:2267-2272.

[16]KATARIA R,GHOSH S.Saccharification of Kans grass using enzyme mixture fromTrichodermareeseifor bioethanol production[J].Bioresource Technol,2011,102:9970-9975.

[17]RABELO SC,AMEZQUITA FONSECA NA,ANDRADE RR,et al.Ethanol production from enzymatic hydrolysisof sugarcanebagassepretreated with lime and alkaline hydrogen peroxide[J].Biomass Bioenerg,2011,35:2600-2607.

[18]邢 玲，江 華.木聚糖酶對玉米芯酶水解過程的影響[J].食品工業(yè)科技，2010（11）：228-231.

[19]National Renewable Energy Laboratory(NREL).Chemical Analysis and Testing Laboratory Analytical Procedures.

[20]王 平，王朋朋，左瑞雨，等.牛瘤胃中米曲霉的分離鑒定及對玉米秸稈降解效果的研究[J].河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，44（3）：295-299.

[21]黎軍友，孫 丹.間苯三酚顯色法微量快速測定木糖含量[J].感染、炎癥、修復(fù)，2002，3（9）：167-169.

[22]CARA C,MOYA M,Ballesteros I,et al.Influence of solid loading on enzymatic hydrolysis of steam exploded or liquid hot water pretreated olivetreebiomass[J].Process Biochem,2007,42:1003-1009.

[23]CARRASCO C,BAUDEL HM,SENDELIUSA J,et al.SO2-catalyzed steam pretreatment and fermentation of enzymatically hydrolyzed sugarcanebagasse[J].Enzyme Microb Technol,2010,46:64-73.