汪福昌，郭武華

(南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院，南昌330006)

原發(fā)性肝細(xì)胞癌(HCC)發(fā)病率較高，早期確診比較困難，致使其預(yù)后較差。近年來，隨著醫(yī)學(xué)影像學(xué)的發(fā)展，許多小肝癌可以被早期發(fā)現(xiàn)，這使患者的預(yù)后及生存質(zhì)量有了明顯改善，但HCC患者的5年生存率仍然在5%左右。生物標(biāo)志物作為腫瘤診斷的重要依據(jù)備受關(guān)注。為了提高HCC的早期檢出率，有關(guān)HCC生物標(biāo)志物的研究也一直在進(jìn)行中?，F(xiàn)將相關(guān)指標(biāo)的研究進(jìn)展情況綜述如下。

1 血清標(biāo)志物

1.1 AFP類 正常情況下，AFP由卵黃囊及胚胎肝產(chǎn)生，胎兒出生1 a后維持低水平，肝病時(shí)升高，明顯增高見于HCC、生殖胚胎性腫瘤及妊娠期。雖然其特異性較高，但在發(fā)現(xiàn)早期HCC方面缺乏敏感性［1］。AFP異質(zhì)的化學(xué)基礎(chǔ)與天冬胺酰酸相關(guān)糖鏈巖藻糖基化的程度有關(guān)。其中天冬胺酰酸相關(guān)糖鏈約占AFP組成成分的5%。AFP片段的命名由Twketa提出，是基于AFP凝集素的反應(yīng)情況及相應(yīng)條件提出的，HCC以AFP-L3增加為特征，而良性肝疾病以AFP-p4/5增加為特征［2］。對(duì)于HCC來說，AFP-L3是非常特異的。研究［3］發(fā)現(xiàn)，血清AFP-L3對(duì)HCC的特異性為95%、敏感性為51%，在大約35%的直徑＜2 cm的HCC患者的血清中AFP-L3被發(fā)現(xiàn)升高，結(jié)合影像學(xué)檢查對(duì)肝癌的發(fā)現(xiàn)可提前9～12個(gè)月;血清AFP-L3與高敏感性的異常凝血酶原(DCP)聯(lián)合檢測(cè)可有效提高HCC的早期診斷及小HCC(直徑＜2 cm)的發(fā)現(xiàn)率［4］。對(duì)于AFP-L3陽性的HCC患者，腫瘤更傾向于生長快速、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移更早、肝功能更差［3］。血清AFP-L3陽性但DCP陰性的HCC患者比單獨(dú)DCP陽性患者表現(xiàn)出更晚期的臨床特征［5］。但是，AFP-L3作為HCC的標(biāo)志物還有局限性:首先，AFP-L3的分析是復(fù)雜的，不便于臨床檢測(cè);其次，對(duì)于血清AFP陰性的HCC患者，無法檢測(cè)到AFP-L3。

1.2 DCP DCP是除AFP外最常用的HCC標(biāo)志物，它由惡性細(xì)胞產(chǎn)生;后天形成的維生素K依賴羧化酶缺陷會(huì)導(dǎo)致DCP的產(chǎn)生［6］。DCP的檢測(cè)對(duì)進(jìn)展期HCC的發(fā)現(xiàn)具有比較高的特異性，但對(duì)直徑＜3 cm的HCC缺乏足夠的敏感性［7］。不過，通過改進(jìn)檢測(cè)方法，DCP檢出率越來越高，其在診斷HCC方面與AFP同樣有效。

1.3 白細(xì)胞介素(IL)類 ①IL-6:越來越多的證據(jù)顯示，IL-6是HCC的一個(gè)危險(xiǎn)因素，血清高IL-6水平可增加B型肝炎患者癌變的可能。因此，IL-6可被認(rèn)為是HCC的一個(gè)生物標(biāo)志物。STAT3是介導(dǎo)IL-6到細(xì)胞核的主要途徑，并調(diào)控增殖及凋亡相關(guān)基因的表達(dá)。利用IL-6抗體或IL-6/STAT3途徑抑制劑可降低IL-6的效應(yīng)。因此，阻斷IL-6的病理過程可成為HCC的一個(gè)治療選擇［8］。②IL-8:IL-8是一種影響人類中性粒細(xì)胞功能(主要包括趨化性、酶的釋放及表面黏附分子的表達(dá))的多功能趨化因子，它對(duì)腫瘤、血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖及血管形成、腫瘤的轉(zhuǎn)移有直接影響［9］。HCC患者術(shù)前血清IL-8的水平比健康人明顯升高，其高血清水平與大HCC (直徑＞5 cm)、HCC靜脈侵襲、HCC病理分期及較差的預(yù)后相關(guān)［10］。

1.4 磷脂酰肌醇蛋白聚糖(GPC3) GPC3是一種錨定在細(xì)胞膜上的硫酸肝素蛋白多糖，是HCC的一個(gè)好的候選標(biāo)志物，其可溶性的氨基末端成分(sGPC3)是在GPC3的精氨酸(358)和絲氨酸(359)之間裂開形成的［10］。HCC患者的血清GPC3水平比肝硬化及健康人明顯高，同時(shí)檢測(cè)血清GPC3和AFP可提高HCC診斷的敏感性［11］。然而，GPC3在部分惡性黑色素瘤患者的血清中也會(huì)升高，故其對(duì)HCC的診斷尚存在一定的局限性。

1.5 血管內(nèi)皮生長因子(VEGF) VEGF是一種調(diào)節(jié)腫瘤新血管形成的分泌型單聚體細(xì)胞因子。血管再生在腫瘤包括HCC的生長及進(jìn)程中起著至關(guān)重要的作用，其以高水平的血管化為特征。在HCC腫瘤組織及具有微血管侵襲的HCC中，VEGF比在正常肝組織及微血管未侵襲的HCC中表達(dá)水平明顯高［12］。較高水平的血清VEGF與HCC進(jìn)展、門靜脈癌栓形成、對(duì)治療反應(yīng)較差、更短的總生存率有關(guān)［13］。

1.6 Ⅱ型高爾基體跨膜蛋白(GP73) GP73主要由膽管上皮細(xì)胞產(chǎn)生，正常肝臟細(xì)胞表達(dá)甚微或不表達(dá)。毛一雷等［14］發(fā)現(xiàn)，HCC患者血清GP73水平明顯升高，其診斷HCC的敏感性達(dá)76.9%，特異性達(dá)92.8%，與血清AFP相比，其敏感性更高。

1.7 腫瘤特異性生長因子(TSGF) 惡性腫瘤在其生長過程中釋放TSGF到周圍血中，導(dǎo)致腫瘤周圍毛細(xì)血管的增生。血清TGSF作為早期HCC的標(biāo)志，敏感性達(dá)82%［15］。

1.8 蛋白質(zhì)表達(dá)譜 用表面增強(qiáng)的激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(SELDI-TOFMS)技術(shù)檢測(cè)血清蛋白質(zhì)譜，對(duì)HCC的診斷有一定參考價(jià)值，靈敏性和特異性較高，準(zhǔn)確率優(yōu)于血清AFP［16］。

2 基因標(biāo)志物

2.1 人宮頸癌基因(HCCR) HCCR具有p53基因的抑制調(diào)節(jié)功能。HCCR蛋白在腫瘤性的肝硬化組織中高表達(dá)，但在正常肝組織中卻未發(fā)現(xiàn)［17］。作為HCC的標(biāo)志物，HCCR比AFP具有更高的敏感性，特異性高達(dá)95.7%，在小HCC患者中HCCR血清陽性檢出率達(dá)69.2%。

2.2 AFP mRNA 研究［18］顯示，通過RT-PCR技術(shù)在血清中檢測(cè)到AFP mRNA預(yù)示HCC預(yù)后不良，與血清AFP mRNA陰性的HCC患者相比，血清AFP mRNA陽性的HCC患者術(shù)后復(fù)發(fā)間期短得多。

2.3 人類端粒逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)mRNA HCC患者血清中hTERT mRNA的表達(dá)明顯高于健康人及非惡性肝臟疾病患者，血清hTERT mRNA診斷HCC的敏感性及特異性分別為88.2%、70.0%，優(yōu)于傳統(tǒng)的腫瘤標(biāo)志物如AFP mRNA、AFP和DCP，并且血清hTERT mRNA的表達(dá)與血清AFP含量、腫瘤大小及其分化程度相關(guān)，其可作為HCC預(yù)后不良的判斷指標(biāo)［19］。

2.4 小泛素相關(guān)修飾物(SUMO-1)mRNA

SUMO-1是蛋白質(zhì)翻譯后的一種修飾物，在RNA轉(zhuǎn)錄、DNA修復(fù)、核物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)及染色體分離等方面發(fā)揮重要作用?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，SUMO-1的修飾調(diào)節(jié)了許多與腫瘤發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移有關(guān)的蛋白質(zhì)的功能，如p53、增殖細(xì)胞核抗原、雌激素受體、端粒酶等［20］。有研究［21］顯示，HCC組織中SUMO-1 mRNA呈高表達(dá)，而在癌旁肝臟組織及肝臟良性腫瘤組織中表達(dá)較低。故SUMO-1mRNA可作為診斷HCC的一個(gè)重要標(biāo)志物。

2.5 Parkin基因 Parkin基因又名PARK2，定位于染色體6q25.2～27，包含12個(gè)外顯子，全長約1.5 Mb，編碼465個(gè)氨基酸、分子量約5.2 kD的蛋白質(zhì)，即Parkin蛋白。一般情況下，Parkin基因存在于大多數(shù)正常組織中。目前發(fā)現(xiàn)該基因在乳腺癌、卵巢癌、腎細(xì)胞癌、肺癌、黑色素瘤及很多血液系統(tǒng)癌癥中存在雜合性缺失。因此，Parkin基因可能是一種候選的抑癌基因。但目前Parkin基因缺失的機(jī)制以及它與癌癥的細(xì)胞周期調(diào)控關(guān)系尚不十分清楚。

2.6 微小RNA(miRNA) miRNA是一種內(nèi)源性的微小非編碼RNA。正常情況下，細(xì)胞核內(nèi)先轉(zhuǎn)錄出一種RNA前體，這種前體RNA隨后被剪切成21～25個(gè)核酸長度的“發(fā)卡”結(jié)構(gòu)的成熟miRNA。這些miRNA通過非嚴(yán)格的配對(duì)，結(jié)合在目標(biāo)mRNA的3'端非編碼區(qū)，引導(dǎo)翻譯或降解mRNA，起到了類似轉(zhuǎn)錄因子的作用。雖然大量的miRNA的作用還沒有研究得很清楚，但是它參與腫瘤發(fā)生發(fā)展這一作用已逐漸明確。同mRNA一樣，HCC相關(guān)的miRNA也可以作為HCC診斷和預(yù)后判斷的腫瘤標(biāo)志物。Blondeau［22］利用芯片技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)，HCC和非HCC組織的miRNA表達(dá)有差異。對(duì)于臨床診斷來說，建立HCC和miRNA的關(guān)聯(lián)作用只是第一步，接著需要在大量人群中證實(shí)這些顯著變化的意義。目前有5種miRNA在這方面的意義已經(jīng)得到肯定，比如利用miR-222和miR-223的異常可以區(qū)分HCC和癌旁組織。也有研究者通過聯(lián)合檢測(cè)6種miRNA，將肝腺瘤、肝內(nèi)小結(jié)等良性肝臟腫瘤與HCC區(qū)分開來，前者表現(xiàn)為miR-21、miR-10b、miR-222、miR-224水平升高，而 HCC的miR-200c、miR-203表達(dá)降低［23］。

2.7 其他 2010年中國軍事科學(xué)院聯(lián)合國內(nèi)多家醫(yī)療機(jī)構(gòu)和研究院所，通過對(duì)部分HCC患者的440 794 SNPs分析，發(fā)現(xiàn)一個(gè)長度為24萬個(gè)堿基的HCC易感基因新區(qū)域染色體 1p36.22，包含UBE4B、KIF1B和PGD三個(gè)基因［24］。這三個(gè)基因能否成為HCC的標(biāo)志物尚待進(jìn)一步研究。

綜上所述，AFP作為肝癌的一個(gè)生物標(biāo)志物，現(xiàn)已廣泛用于HCC的臨床診斷及治療療效的判斷，但仍然存在不足和缺陷。理想的腫瘤血清標(biāo)志物應(yīng)是特異性強(qiáng)、靈敏度高、表達(dá)量或血清中水平與腫瘤組織發(fā)展或大小呈正相關(guān)。隨著研究的進(jìn)展，已發(fā)現(xiàn)一些更敏感、更特異的診斷HCC的標(biāo)志物，如基因標(biāo)志物。但如何綜合應(yīng)用這些標(biāo)志物以提高HCC的診治效果是一個(gè)值得解決的問題。

［1］Saffroy R，Pham P，Reffas M，et al.New perspectives and strategy research biomarkers for hepatocellular carcinoma［J］.Clin Chem Lab Med，2007，45(9):1169-1179.

［2］Taketa K，Sekiya C，Namiki M，et al.Lectinreactive profi les of alpha-fetoprotein characterizing hepatocellular carcinoma and related conditions［J］.Gastroenterology，1990，99(2):508-518.

［3］Yuen MF，Lai CL.Serological markers of liver cancer［J］.Best Pract Res Clin Gastroenterol，2005，19(1):91-99.

［4］Durazo FA，Biarr LM，Corey WG，et al.Des-gamma-carboxyprothrombin，alpha-fetoprotein and AFP-L3 in patients with chronic hepatitis，cirrhosis and hepatocellular carcinoma［J］.J Gastroenterol，2008，23(10):1541-1548.

［5］Zinkin NT，Grall F，Bhaska R，et al.Serum proteomics and biomarkers in hepatocellular carcinoma and chronic liver disease［J］.Clin Cancer Res，2008，14(2):470-477.

［6］Ono M，Ohat H，Ohhira M，et al.Measurement of immunoreactive prothrombin precursor and vitamin-K-dependent gammacarboxylation in human hepatocellular tissues:decreased carboxylation of prothrombin precursor as a cause of desgamma-carboxyprothrombin synthesis［J］.Tumour Biol，1990，11(6):319-326.

［7］Bertino G，Ardiri AM，Calvagno GS，et al.Prognostic and diagnostic value of des-γ-carboxy prothrombin in liver cancer［J］.Drug News Perspect，2010，23(8):498-508.

［8］Liu Y，F(xiàn)uchs J，Li C，et al.IL-6，a risk factor for hepatocellular carcinoma:FLLL32 inhibits IL-6-induced STAT3 phosphorylation in human hepatocellular cancer cells［J］.Cell Cycl，2010，9 (17):3423-3427.

［9］Cheng KS，Tang HL，Chou FT，et al.Cytokine evaluation in liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma［J］.Hepatogastroenterology，2009，56(93):1105-1110.

［10］Tangkijvanich P，Thong-Ngam D，Mahachai V，et al.Role of serum interleukin-18 as a prognostic factor in patients with hepatocellular carcinoma［J］.World J Gastroenterol，2007，13(32):4345-4349.

［11］Hippo Y，Watanabe K，Watanabe A，et al.Identifi cation of soluble NH2-terminal fragment of glypican-3 as a serological marker for early-stage hepatocellular carcinoma［J］.Cancer Res，2004，64 (7):2418-2423.

［12］Poon RT，Lau C，Pang R，et al.High serum vascular endothelial growth factor levels predict poor prognosis after radiofrequency ablation of hepatocellular carcinoma:importance of tumor biomarker in ablative therapies［J］.Ann Surg Oncol，2007，14(6):1835-1845.

［13］Zhang ZB，Cai L，Zheng SG，et al.Overexpression of caveolin-1 in hepatocellular carcinoma with metastasis and worse prognosis: correlation with vascular endothelial growth factor，microvessel density and unpaired artery［J］.Pathol Oncol Res，2009，15(3): 495-502.

［14］毛一雷，楊華瑜，徐海峰，等.新的肝癌血清標(biāo)志物GP73在肝癌診斷中的初步研究［J］.中華醫(yī)學(xué)雜志，2008，88(4):948-951.

［15］Zhou L，Liu J，Luo F.Serum tumor markers for detection of hepatocellular carcinoma［J］.World J Gastroenterol，2006，12(8): 1175-1181.

［16］Liu C，Shen J，Pan C，et al.MALDI-TOF MS combined with magnetic beads for detecting serum protein biomarkers and establishment of boosing decision tree model for diagnosis of hepatocellular carcinoma［J］.Am J Clin Pathol，2010，134(2):235-241.

［17］楊楊，張國新，施瑞華.人宮頸癌基因蛋白在人肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其臨床意義［J］.中華肝臟病雜志，2007，15(3):223-224.

［18］Yang SZ，Dong JH，Li K，et al.Detection of AFP mRNA and melanoma antigen gene-1mRNA as markers of disseminated hepatocellular carcinoma cells in blood［J］.Hepatobili Pancreat Dis Int，2005，4(2):227-233.

［19］Buschmann T，F(xiàn)uchs SY，Lee CG，et al.SUMO-1 modification of Mdm2 prevents its self-ubiquitination and increases Mdm2 ability to buiquitinate p53［J］.Cell，2000，101(7):753-763.

［20］Xhemalce B，Riisong EM，Baumann P，et al.Role of SUMO in the dynamics of telomere maintenance in fission yeast［J］.Proc Natl Acad SCI USA，2007，104(3):893-898.

［21］Wang F，Denison S，Lai JP，et al.Parkin gene alterations in hepatocellular carcinoma［J］.Gen Chromo Cancer，2004，40(2):85-96.

［22］Blondeau K.Treatment of gastro-esophageal reflux disease:the new kids to block［J］.Neurogastroen Terol Motil，2010，22(8): 836-840.

［23］李紅梅，敬華，仲人前.CEA、AFP、TPA、HBsAg聯(lián)檢在肝癌診斷中的意義［J］.標(biāo)記免疫分析與臨床，2005，12(1):57-58.

［24］Zhang H，Zhai Y，Hu Z，et al.Genome-wide association study identifies 1p36.22 as a new susceptibility locus for hepatocellular carcinoma in chronic hepatitis B virus carriers［J］.Nat Genet，2010，42(9):755-758.