亨廷頓舞蹈病又稱亨廷頓?。℉untington's disease，HD）、慢性進(jìn)行性舞蹈病，是一種影響運(yùn)動功能為主的神經(jīng)退行性疾病，以基底節(jié)及大腦皮層神經(jīng)元缺失為基本病理特征。IT15（interesting transcript 15）基因是HD的致病基因，定位于4p16.3，是由于該處外顯子1的CAG重復(fù)序列的異常擴(kuò)展突變引起［1］。我們收集了湖北一個臨床擬診為亨廷頓舞蹈病的家系，采用DNA直接測序方法檢測IT15，以提供遺傳咨詢以及探討IT15基因中CAG的重復(fù)拷貝數(shù)與發(fā)病年齡、臨床特征之間的關(guān)系并綜述亨廷頓舞蹈病治療的最新進(jìn)展。

1 資料與方法

1.1 對象

一經(jīng)臨床擬診為 HD家系（圖 1），對該家系進(jìn)行詳細(xì)的臨床病史調(diào)查并盡可能全面收集患者的臨床資料包括實(shí)驗(yàn)室檢查、腦電圖、頭顱CT、MRI和簡易智力狀態(tài)量表（mini-mental state examination，MMSE），都經(jīng)過臨床檢查排除了其他內(nèi)外科疾病。按知情同意和自愿參與原則，該家系中有11名成員參與（包含2名有癥狀成員）。

1.2 研究方法

1.2.1 提取 DNA 采集肘靜脈血 4 mL，應(yīng)用DNA提取試劑盒提取外周血白細(xì)胞基因組DNA，DNA提取試劑盒購于上海賽百盛基因技術(shù)有限公司。

1.2.2 PCR擴(kuò)增 ①上游引物序列（t15f）：CCCAGAGCCCCATTGATTGCC；下游引物序列（t15r）：GGCGGCGGTGGCGGCTGTTGC，引物由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成；②以受試者外周血白細(xì)胞基因組DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，反應(yīng)體系為10X的PCR緩沖液（含Mg2＋）5μL，2.5mM的dNTPs4μL，10μM引物t15f和t15r各2μL，基因組DNA（100ng／μL）4μL，5U／μL的熱啟動TaqDNA聚合酶（TAKARA）0.5μL，加水補(bǔ)足50μL；③應(yīng)用9700型自動擴(kuò)增儀（美國ABI公司）進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，反應(yīng)條件為預(yù)變性94℃，8min，（94℃，30s；64℃，30s；72℃，30s）為1個循環(huán)，共40個循環(huán)，最后72℃，延伸5min。

圖1 HD家系圖譜，即先證者

1.2.3 電泳 將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物各取5μL進(jìn)行2％瓊脂糖電泳檢測。

1.2.4 基因測序 將PCR產(chǎn)物直接測序，測序引物采用t15f，并對有明顯雙特異性條帶的擴(kuò)增產(chǎn)物，進(jìn)行切膠純化后測序。

2 結(jié)果

2.1 臨床特點(diǎn) 該家系共28人（家系圖譜見圖一），6例患者，男3例，女3例，首發(fā)年齡在35～71歲，平均54.3歲；已逝的3例患者病程9～15年，平均11.3年。呈父系遺傳，第Ⅰ代起病年齡71歲，第Ⅱ代平均起病年齡59歲，第Ⅲ代平均起病年齡39歲：先證者46歲，43歲時出現(xiàn)輕微左肩聳動，目前已進(jìn)展至吐詞欠清，雙肩聳動，左側(cè)肢體不自主運(yùn)動，以上肢為主。神經(jīng)系統(tǒng)查體主要為四肢肌張力低，四肢腱反射活躍，雙上肢Rossolimo′s和Hoffman′s 征（＋），雙下肢踝陣攣（＋），指鼻和跟膝脛試驗(yàn)完成不協(xié)調(diào)。家屬訴其記憶力下降，暴躁易怒伴抑郁傾向，表現(xiàn)為語言減少，不愛活動。Ⅱ9：62歲起病，病程已10年，起初表現(xiàn)為一側(cè)腿抬高，逐漸進(jìn)展為全身不自主運(yùn)動伴認(rèn)知障礙，目前查體：不能行走，神清，計算力下降，反應(yīng)遲鈍，嚴(yán)重構(gòu)音障礙，吞咽困難，不自主吐舌頭，嘴角牽動，全身不自主運(yùn)動，雙手徐動，全身肌肉重度萎縮，四肢肌力V級，四肢肌張力高，四肢腱反射減弱，指鼻和跟膝脛試驗(yàn)不能，家屬訴患者性格固執(zhí)，舞蹈樣動作減少；據(jù)家屬介紹Ⅰ1和Ⅱ3與Ⅱ9臨床表現(xiàn)類似，Ⅱ3病歷中記載病程中服用氟哌啶醇和安坦片期間曾有好轉(zhuǎn)，最終因呼吸循環(huán)衰竭死亡；Ⅱ1起初表現(xiàn)為雙肩聳動，雙上肢扣扣子樣不自主動作，病情發(fā)展也與Ⅱ9類似；Ⅲ5：35歲起病，以雙下肢抖動為主，不倒地。

2.2 主要實(shí)驗(yàn)室特征 先證者腦電圖檢查未見明顯異常；Ⅱ3病歷中記載頭顱CT、MRI示腦萎縮；Ⅱ9MMSE評分小于10分。

2.3 電泳結(jié)果 2例已發(fā)病患者（Ⅱ9和Ⅲ4）和1例無癥狀成員（Ⅳ1）均有特征性兩條擴(kuò)增帶，一條含正常（CAG）n重復(fù)數(shù)，約220bp，另一條含異常擴(kuò)展的（CAG）n重復(fù)，約300bp左右；余8名成員只顯示一條擴(kuò)增帶，約220bp（圖2）。

2.4 基因測序 對所有成員的PCR產(chǎn)物直接測序，其中對有明顯雙特異性條帶的擴(kuò)增產(chǎn)物，進(jìn)行切膠純化后測序；3名成員CAG重復(fù)數(shù)目大于等于40：Ⅱ9為17／40，Ⅲ4為17／45，Ⅳ1為16／48，其他8名成員CAG重復(fù)數(shù)目在20次以下。具體見圖3和表1。

圖2 PCR后電泳結(jié)果注：Marker：50 bp梯度相對分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；Ⅲ4和Ⅱ9為有癥狀患者，Ⅳ1為癥狀前患者，余為健康成員

表1（CAG）n與起病年齡和臨床表現(xiàn)之間的關(guān)系

3 討論

亨廷頓舞蹈病多中年起病，以慢性進(jìn)行性舞蹈樣動作、認(rèn)知障礙和精神行為異常三聯(lián)征為典型特點(diǎn)，呈遲發(fā)型常染色體顯性遺傳的神經(jīng)變性疾病，一般病程在15～20年左右［2］，臨床上頭顱CT和MRI提示基底節(jié)區(qū)腦萎縮，無特異性，確診須靠IT15基因檢測。國外通過對歐美大樣本人群IT15基因檢測分析得出［3］：CAG重復(fù)數(shù)≤26時未發(fā)現(xiàn)引起疾病；在27～35時未發(fā)現(xiàn)引起疾病，但可引起突變，在減數(shù)分裂時不穩(wěn)定，易發(fā)生擴(kuò)展突變，尤其是父系遺傳時；在36～39時為不完全外顯的HD等位基因，攜帶者可能發(fā)病也可能不發(fā)病，≥40時為完全外顯的HD等位基因，攜帶個體必然會患病。我們收集的這個家系起病年齡平均54.3歲，舞蹈樣動作逐漸加大，其中4例晚期伴智能障礙、性格固執(zhí)和脾氣暴躁，基因測序結(jié)果顯示有癥狀的2例患者CAG重復(fù)數(shù)目大于40；IT15基因檢測結(jié)果為雜合子，結(jié)合家系圖譜中代代遺傳，中年起病的特點(diǎn)表明該家系呈遲發(fā)型常染色體顯性遺傳，故可明確診斷該家系疾病為亨廷頓舞蹈病。其中Ⅳ1為女性12歲，目前無任何臨床表現(xiàn)，但電泳顯示特征性兩條擴(kuò)增帶，基因測序CAG重復(fù)數(shù)目大于40，我們稱之為癥狀前患者，該患者必然發(fā)病，但起病時間目前不能確定，并有50％的可能將IT15基因遺傳到下一代，故將來孕早期建議行產(chǎn)前診斷。

通過家系圖譜，我們可以看出該家系呈父系遺傳，且每代發(fā)病年齡較上代提前，體現(xiàn)出遺傳早現(xiàn)的特點(diǎn)，這與國外報道一致［4］；有文獻(xiàn)報道，（CAG）n重復(fù)越多，發(fā)病越早，累計50％～70％的符合這個規(guī)律［5］，其他不符合的情況可能與基因變異和環(huán)境有關(guān)；但（CAG）n重復(fù)長度與病情進(jìn)展的速度無顯著的關(guān)聯(lián)［6］，在我們收集的這個家系里，Ⅱ9CAG重復(fù)40次，62歲發(fā)病；Ⅲ4，45次，43歲發(fā)病，一定程度也提示了發(fā)病年齡與CAG重復(fù)數(shù)呈負(fù)相關(guān)。Ⅳ1，48次，目前未發(fā)病，其發(fā)病年齡有待觀察；這3例結(jié)果也提示隨著年齡的增加，逐漸表現(xiàn)出癥狀，可能與IT15基因表達(dá)的亨廷頓蛋白聚集有關(guān)。有學(xué)者提出HD的發(fā)病年齡可能與MSX1基因［7］、ApoE基因［8］、ADORA2A［9］基因或Atg7基因上的V471A的多態(tài)性［10］等有關(guān)。

目前關(guān)于HD的治療，致力于減慢疾病進(jìn)展，藥物均處于試驗(yàn)性階段，仍未發(fā)現(xiàn)特異性藥物［11］。目前輔酶Q10［12］、利魯唑［13］、艾斯能［14］以及肌酸［15］這四種藥物有研究報道在治療HD有一定療效，但仍需長時間大樣本的隨機(jī)對照試驗(yàn)證實(shí)，其中輔酶Q10和肌酸已進(jìn)入臨床試驗(yàn)Ⅲ期。有學(xué)者認(rèn)為HD非常適合作為神經(jīng)保護(hù)藥物的模型，可能推遲甚至阻止其臨床表現(xiàn)的發(fā)生［16］。提倡HD從無癥狀階段開始干預(yù)可能對預(yù)后有利，HD治療前景還是很樂觀的［2］。

致謝：感謝潘松青教授對我的課題指導(dǎo)和論文修改，感謝這個家系成員的合作，感謝夏莉，梁靜靜幫助我收集資料，感謝北京尤比愛生物科技中心楊福輝對我們收集的家系成員DNA進(jìn)行基因測序。

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